氨基酸組成分析ppt課件-展示頁
2025-05-10 04:16本頁面
【正文】 影響氨基酸分析結(jié)果的三大因素是：水解、衍生、色譜。其中，苯酚是作為一種抗氧化劑來防止半胱氨酸 (Cys)和甲硫氨酸 (Met)的氧化。將 100～ 500181。 第二節(jié) 蛋白質(zhì)的水解方法 氨基酸分析的第一步是將蛋白質(zhì)或多肽水解，常規(guī)方法是采用 ℃ 水解 24h，也有在 150℃ 下快速水 解 90min。 另外，在蛋白質(zhì)測(cè)序中有時(shí)遇到測(cè)不出結(jié)果的情況， 一種可能是蛋白質(zhì)的 N端封閉， 另一種可能則是樣品本身不是蛋白質(zhì)或絕大部分是非蛋白質(zhì) 物質(zhì)， 解決這個(gè)問題的很好途徑便是做氨基酸組成分析以確定樣品 的成分 。 第一節(jié) 氨基酸組成分析的目的 現(xiàn)代分離提純技術(shù)的發(fā)展使蛋白質(zhì)操作微量化，但也給 定量帶來了困難，一般很難通過常規(guī)的稱量或測(cè)蛋白質(zhì)溶液 在 280nm的光吸收值來準(zhǔn)確定量蛋白質(zhì)。 色譜技術(shù)的引入為氨基酸分析打開了一扇新的大門。第三章 氨基酸組成分析 氨基酸是一種小分子的兩性化合物，分子質(zhì)量在 75～ 200Da之間，其化學(xué)通式為 RCH(NH2)COOH，在生物體 內(nèi)出現(xiàn)的氨基酸都是 L型，僅在少數(shù)微生物來源的多肽中出 現(xiàn) D型氨基酸。 氨基酸分析技術(shù)的發(fā)展始于 1820年，由 Braconnot最早 將甘氨酸從白明膠水解物中分離出來，但直到 21世紀(jì)，用 化學(xué)方法或微生物方法測(cè)定氨基酸，仍是一項(xiàng)持續(xù)數(shù)周或數(shù) 月的繁瑣的工作。 1941年， Martin等運(yùn)用色層法分析氨基酸，主要采用乙酰 化氨基酸在硅膠柱上或?yàn)V紙上半定量；隨后， Moore、 Stein應(yīng)用離子交換柱直接分離游離的氨基酸，在 1958年， Spackman、 Stein、 Moore制造了自動(dòng)化的氨基酸分析 儀，使氨基酸定量分析進(jìn)入了一個(gè)嶄新的階段，至今仍是 經(jīng)典的方法。所以如果在蛋白 質(zhì)酶解或測(cè)序前，取蛋白質(zhì)樣品的一部分進(jìn)行氨基酸組成分 析，根據(jù)結(jié)果便可以推算出蛋白量的可靠值。 除了蛋白質(zhì)研究和重組蛋白需要測(cè)定氨基酸組成外，醫(yī)學(xué) 上也需要測(cè)定血液或各種體液中的游離氨基酸。 Waters公司有商品化儀器 (水解工作臺(tái) )出售。 mol的 蛋白質(zhì)或肽轉(zhuǎn)移到水解指管中冷凍抽干，在水解反應(yīng)器中加入 ，含 2％苯酚 (m/V)，將指管置于反應(yīng)器中，抽真 空
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