【正文】 提取物中的含量為 %，它具有促進機體造血和改造肝臟造血機能 [11]。原子吸收分光光度法測定干銀杏葉中礦物質(zhì)含量表明：銅 g/g、鋅 g/g、鐵 μ g/g、鎂 6844μ g/g[12]。 其他成分 研究表明，銀杏提取物中維生素 E、維生素 B維生素 C、維生素 PP及葉酸含量較高，銀杏葉中含量分別為 、 、 、 、 [9]。另有文獻研究發(fā)現(xiàn)在 衰老的銀杏葉中主要存在葉綠素 a、葉綠素 b和脫鎂葉綠素 a，而其他降解產(chǎn)物并未大量積累 [15]。 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 5 銀杏樹葉、種子、木材、樹皮、根等 可開發(fā)成食品、保健品、化妝品、藥品、生物農(nóng)藥 以及原料藥的替代品等，故銀杏被稱為 “全身都是 寶的活化石 ” []。 隨后深人研究發(fā)現(xiàn)，銀杏外種皮 中含有具有抗過敏、 抗炎、抗氧化、抑菌等作用的銀杏酸類成分及 具有 較好抗腫瘤作用的多糖類成分，在生物農(nóng)藥和醫(yī)藥方面具有潛在的應(yīng)用價值圄。 Josef Kraus[ 16] 研究了銀杏葉多糖的成分及其化學(xué)結(jié)構(gòu) ,廣西醫(yī)科大學(xué)黃桂寬等[17] 對銀杏葉多糖進行了分離、純化和鑒定 ,揚州醫(yī)科大學(xué)許愛華等 [ 18 ] 對銀杏外種皮多糖進行了粗提 ,并對它的免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤及抗衰老活性進行了研 究。陳群等人發(fā)現(xiàn)， 銀杏白果多糖是簡單均勻的水溶性多糖，相對分子質(zhì)量為 10，進一步研究發(fā)現(xiàn)銀杏果多糖具 有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明銀杏白果多糖與銀杏葉多糖、銀杏外種皮多糖顯著不同 ,對其進行深入的研究將為銀杏白果的藥理研究及其臨床應(yīng)用和開發(fā)提供重要的基礎(chǔ)資料。鄧乾春等人通過動物試驗發(fā)現(xiàn)銀杏果清蛋白（ GAP）能顯著增強小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用，并且能夠能抑制體內(nèi) S180實體瘤和體外 S180 腫瘤細胞的生長，還能通過增強輻射損傷小鼠的抗氧化能力、造血功能及體內(nèi)免疫功能來起到對輻射損傷小鼠的保護作用 [19]。江蘇大學(xué)楊小明等人研究發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)銀杏酸對金黃色葡萄球菌、蠟樣芽抱桿菌、枯草桿菌均有抑制作用，對耐青霉素金葡菌 也有一定的抑制作用，銀杏酸與青霉素聯(lián)用，具有加強作用 [21,22]。人們對銀杏多糖的研究主要集中在銀杏葉和銀杏外種皮上，對于銀杏果多糖的研究卻比較匱乏。 大量的研究表明，一大部分從天然產(chǎn)物中分離得到的多糖類化合物具有除自由基，抑制脂質(zhì)過氧化，抑制亞油酸氧化，清除多種活性氧 (Reactive oxygen species， ROS)等抗氧化作用 [26]。 銀杏果多糖屬天然植物提取物，提取過程中環(huán)保無污染，具有無細胞毒性及其它副作用的優(yōu)點，因此對其進行研究和將其開發(fā)成天然抗氧化劑或自由基清除劑對保障機體健康、預(yù)防疾病有重要意義。 以銀杏果為原料，從 銀杏白果中提取出多糖 ， 然后對其結(jié)構(gòu)成分進行了初步分析。 本實驗 采用水提醇沉法提取 銀杏果粗糖， 利用 葡萄糖 標準曲線 測定其中 多糖含量。結(jié)果顯示 ， 銀杏果多糖有顯著的抗氧化功能。 NBT( 氯化硝基四氮唑藍 )，上海恒星應(yīng)用化學(xué)研究所；核黃素，北京奧博星生物技術(shù)責任有限公司； 1， 1二苯 2苦肼基 ( 1， 1 diphenyl 2picrylhydrazyl， DPPH，純度 95%) ， A Johnson MattheyCompany，其他所用試劑均為國產(chǎn)分析純。 循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長城科工貿(mào)有限公司； SL 202 型電子天平，上海長橋精密科學(xué)儀器有限公司超凈工作臺，哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司；日光燈反應(yīng)箱，自制。 2. 2 銀杏果多糖的含量測定 多糖的含量測定：采用苯酚 －硫酸法 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 7 葡萄糖標準曲線 : 將 20 mg 葡萄糖溶解并定容至 500 mL 分別量取 母液 0. 5 1. 0 2. 0 3. 0 4. 0 5. 0mL， 定容至 10 mL，各量取 1 mL 溶液、 1 mL 6%苯酚、 5 mL 濃 H2 SO4 搖勻放置 10 min ， 沸水浴加熱 15 min，冷卻至室溫， 490 nm 波長處測定吸光度值以含量為橫坐標，吸光度值為縱坐標繪制標準曲線。 2. 3 銀杏果多糖抗氧化活性的體外測定 將銀杏果多糖定容至 25 mL，進行如下抗氧化活性的測定。 在同一具塞試管中加入 2 mL DPPH 溶液 ( 2 10－ 4mol /L) ， 1 mL 不同濃度樣品溶液，搖勻，室溫避光靜 30 min， 用無水乙醇作參比在 517 nm 處測定 吸光度 A 樣品 用 1 mL 蒸餾水代替樣液，測定空白吸光度 A。 具體方法 : 分別取 mL 不同濃度的樣品于試管中， 依次加入 2. 5 mL0. 2 moL /L pH 6. 6 的磷酸鹽緩沖液和 2. 5 mL 1% K3［ Fe( CN) 6］ 于 50 ℃水浴保溫 20 min 后，快速冷卻，再加入 2. 5 mL 10% TCA， 以 4 000 r /min 離心 10min， 取上清液 2. 5 mL， 依次加入 2. 5 mL 重蒸水， 0. 5mL 0. 1%FeCl3， 充分混勻， 靜止 10 min， 以蒸餾水為對照在 700 nm 處測定吸光度值。 L1 pH 的 PBS 按 1:1 配成懸液， 再稀釋成 1:25(卵黃 :總體積 )，磁力攪拌 30min。 L1銀杏果多糖抗氧化活性的初步研究 8 的硫酸亞鐵 ，最后用 moL 以銀杏果為原料，從 銀杏白果中提取出多糖 ， 然后對其結(jié)構(gòu)成分進行了初步分析。 本實驗 采用水提醇沉法提取 銀杏果粗糖， 利用 葡萄糖 標準曲線 測定其中 多糖含量 。結(jié)果顯示， 銀杏果多糖有顯著的抗氧化功能。 在同一具塞試管中加入 2 mL DPPH 溶液 ( 2 10－ 4mol /L) ， 1 mL不同濃度樣品溶液，搖勻，室溫避光靜止 30 min， 用無水乙醇作參比在 517 nm 處測定吸光度 A 樣品 用 1 mL 蒸餾水代替樣液，測定空白吸光度 A。而通過曲線可知，銀杏果多糖對 DPPH自由基的清除效果與其質(zhì)量濃度緊密相關(guān)。通過以上分析可以得到，銀杏果多糖 有較強的供氫能力。銀杏果多糖表現(xiàn)出了很強的 DPPH自由 基清除能力，隨著銀杏果多糖質(zhì)量密度的遞增，對 DPPH自由基的清楚率也在逐步提升后趨于平穩(wěn)。 3. 2抗卵黃脂質(zhì)過氧化活性的測定 采用依賴雞卵黃脂蛋白的脂質(zhì)過氧化模型，將新鮮卵黃用等體積的 在試管中加入上述卵黃懸液 ，分別加入樣品 (對照管加入 PBS)，再加入 25mmoL L1 PBS補至 2mL。通過曲線我們可以發(fā)現(xiàn) 銀杏果多糖對 卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率 與其質(zhì)量濃度緊密相關(guān)。通過以上分析可以得到，銀杏果多糖 有 對卵黃脂質(zhì)過氧 化有抑制作用 。銀杏果多糖表現(xiàn)出了 我們也可以發(fā)現(xiàn) 銀杏果多糖對 卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率 與其質(zhì)量濃度緊密相關(guān)。通過以上分析可以得到，銀杏果多糖 有 對卵黃脂質(zhì)過氧化有抑制作用 。 得到結(jié)論 如下圖： 圖 5銀杏果多糖 OD值測量結(jié)果 圖 6銀杏果多糖還原力測定結(jié)果 OD是 optical density（ 光密度 ）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度，是檢測方法銀杏果多糖抗氧化活性的初步研究 12 里的專有名詞，檢測單位用 OD值表示， OD=lg（ 1/trans），其中 trans為檢測物的透光值。 結(jié)果如圖 5所示，可以看出 OD值與銀杏 果多糖的濃度成線性相關(guān)。較濃的亞鐵離子鹽溶液呈現(xiàn)深綠色 ,稀溶液呈現(xiàn)淺綠色，而鐵離子呈現(xiàn)淺黃色，因此透過圖片我們可以明顯看出，銀杏果多糖表現(xiàn)出了很強的還原能力，并且隨著銀杏果多糖質(zhì)量密度的遞增，對鐵離子的還原程度 也在逐步提升。 4 討論與結(jié)論 討論 通過銀杏果多糖對 DPPH自由基的清除率的曲線圖可以看出，抗氧化劑通過轉(zhuǎn)移傳遞電子或氫原子給 DPPH來中和其自由基，因此，對 DPPH自由基的清除效果可以反映抗氧化劑的供氫能力。銀杏果多糖表現(xiàn)出了很強的 DPPH自由基清除能力，隨著銀杏果多糖質(zhì)量密度的遞增，對 DPPH自由基的清楚率也在逐步提升后趨于平穩(wěn)。 通過圖 3銀杏果多糖對卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率的曲線可以看出，銀杏果多糖對卵黃脂質(zhì)過氧化有抑制作用，而對卵黃脂質(zhì)過氧化的抑制作用可以反映銀杏果多糖的抗氧化性。銀杏果多糖表現(xiàn)出了很強的抗氧化能力，隨著銀杏果多糖質(zhì)量密度的遞增，對卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率也在逐步提升。 如圖 5所示，可以看出 OD值與銀杏果多糖的濃度成線性相關(guān)，通過圖 6我們可以發(fā)現(xiàn)銀杏果多糖對鐵離子的還原程度與其質(zhì)量濃度緊密相關(guān)。 通過以上分析可以得到，銀杏果多糖有鐵離子具有較強的還原作用。采用提取物與穩(wěn)定自由基 DPPH