【正文】 天達(dá)儀器有限公司）、 真空抽濾機(jī)、 DF101干燥箱、錐形瓶、吸量管 (1mL、 2mL、 5mL）、洗耳球、比色管、容量瓶。本文所用的是熱水浸提法。水溶劑滲入到細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞壁中，溶解了液泡里的物質(zhì)，并且通過細(xì)胞壁擴(kuò)散到外部。過濾，濾渣按一定的料液比加入蒸餾水，熱水浴中保溫一定時(shí)間。 多糖提取率 =多糖質(zhì)量 /樣品質(zhì)量 100% 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 [6] 先打開紫外分光光度計(jì)進(jìn)行預(yù)熱。然后用分析天平稱取 5 糖，蒸餾水溶解后，完全轉(zhuǎn)移到 100mL容量瓶進(jìn)行定容，得 糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。將七個(gè)比色管放在冰水浴中，用 5mL的吸量管迅速移取 硫酸溶液分別加入比色管內(nèi)，搖勻。用紫外分光光度計(jì)從低濃度到高濃度在 625nm波長(zhǎng)下，分別測(cè)定它們的吸光度 。 多糖含量 的 測(cè)定方法 用電子天平稱取樣品粗多糖提取物 ，三份，蒸餾水溶解后，完全轉(zhuǎn)移到 100mL容量瓶中 并 且搖勻定容。然后放在沸水浴中加熱 10分鐘，取出，放在乘有自來水的大燒杯中冷卻至室溫。 多糖對(duì) 羥基自由基 ( Fe2+ 與 H2O2 在Fenton反應(yīng)中產(chǎn)生羥基自由基的方程式如下： ?? 222 FeOH === ?? ??? 3FeOHOH 向該反應(yīng)體系中加入鄰菲羅啉，由于羥基自由基活性很高 ， 能夠很有效的被鄰菲羅啉所結(jié)合，產(chǎn)生有色物質(zhì)。當(dāng)加入多糖溶液后，多糖溶液就會(huì)與羥基自由基結(jié)合，減少了鄰菲羅啉與羥基自由基結(jié)合而生成的有色物質(zhì)，減弱了在 510nm處的吸光值。方法如下： 首先用分析天平精確稱量提取的樣品粗多糖沉淀 ，用蒸餾水溶解后，在 100mL的容量瓶中定容，配成濃度為 ，取母液進(jìn)行稀釋至濃度為 、 、 、 、 。 取 6支干燥且干凈的比色管，依次編號(hào)、分別向里面加入 溶液，磷酸鹽 生理鹽水（ pH=）緩沖溶液 ， 和 、 、 、 、 （注： 1號(hào)為空白對(duì)照，用蒸餾水代替多糖溶液）。再將維生素 C藥片研磨，稱取，配制同濃度的維生素C溶液作對(duì)比。OH清除率 =(A0A樣品 )/A0 100% 多糖對(duì)超氧自由基（ 鄰苯三酚可以在堿性條件下發(fā)生自身氧化生成超氧自由基（ 超氧自由基能夠加速鄰苯三酚的氧化速率，如果有清除劑的加入，會(huì)消除 通過 測(cè)定加入多糖溶液的體系的吸光度來判斷它的消除能力。迅速加入在 25℃ 熱水浴中預(yù)熱 20分鐘的鄰苯三酚（ ） ，搖勻。將各管在 310nm處測(cè)定它的吸光度，再將維生素 C藥片研磨，稱取，配制同濃度的維生素 C溶液作對(duì)比。O 2 清除率 =(A0A樣品 )/A0 100% 2 結(jié)果與分析 干木耳粗多糖提取的條件優(yōu)化及含量的測(cè)定 多糖在熱水提取的過程中，有許多因素會(huì)影響多糖提取率。 浸提時(shí)間對(duì)多糖提取的影響 固定溫度為 85℃ 、料液比 1:30不變。當(dāng)浸提時(shí)間為 ，提取率最大，繼續(xù)增加時(shí)間，提取率開始下降。溫度為 50、 60、 70、 7 80、 890、 95℃ 。但是過高溫度會(huì)分解多糖，多糖的活性受到影響，所以我們選擇 90℃ 作 為我們的浸提溫度。料液比分別 1: 1: 1: 1:50、 1:60、 1:70。40 1:50 1:60 1:70 提取率 /% 未完全浸沒 由表三中的數(shù)據(jù)可看出，隨料液比 的增加，多糖的提取率先增加后減小，當(dāng)料液比為 1:40時(shí)，提取率最大。數(shù)據(jù)顯示也看出了這三個(gè)因素對(duì)提取率的影響很大。 表 24 因素水平 水平 A時(shí)間 /h B料液比 C溫度 ℃ 1 2 3 3 30 70 40 80 30 70 90 表 25 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 試驗(yàn)號(hào) 列號(hào) A B C 木耳多糖提取率/% 1 1 1 1 2 1 2 2 3 1 3 3 4 2 1 2 5 2 2 3 8 6 2 3 1 7 3 1 3 8 3 2 1 9 3 3 2 K1 K2 K3 極差 從以上的正交實(shí)驗(yàn)、極差分析結(jié)果顯示：影響木耳多糖提取率的三個(gè)因素的大小排序是浸提溫度 料液比 浸提時(shí)間。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定和回歸方程的建立 根據(jù) ： 010 葡萄糖溶液濃度( m g / m L )吸光度A 圖 1 由圖 1 可知，葡萄糖溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程是 Y=+，相關(guān)系數(shù)是 。 表 26 測(cè)得干木耳的粗多糖的含量 多糖粗提取物質(zhì)量 //g 多糖含量 //% 平均值 //% RSD值 //% 9 干枸杞的粗多糖的含量測(cè)定 參考文獻(xiàn)得最佳提取條件：料液比 1:30，溫度 90℃ ，浸提時(shí)間 2h[11] 表 27 測(cè)得干枸杞的粗多糖的含量 多糖粗提取物質(zhì)量 //g 多糖含量 //% 平均值 //% RSD值 //% 干海帶的粗多糖的含量測(cè)定 參考文獻(xiàn)得最佳提取條件：料液比 1:25，溫度 90℃ ，浸提時(shí)間 5h[12] 表 28 測(cè)得干海帶的粗多糖的含量 多糖粗提取物質(zhì)量 //g 多糖含量 //% 平均值 //% RSD值 //% 干百合的粗多糖的含量測(cè)定 參考文獻(xiàn)得最佳提取條件：料液比 1:30，溫度 80℃ ，浸提時(shí)間 2h[13] 表 29 測(cè)得干百合的粗多糖的含量 多糖粗提取物質(zhì)量 //g 多糖含量 //% 平均值 //% RSD值 //% 干銀耳的粗多糖的含量測(cè)定 參考文獻(xiàn)得最佳提取條件：料液比 1:20，溫度 80℃ ，浸提時(shí)間 6h[14] 表 210 測(cè)得干銀耳的粗多糖的含量 多糖粗提取物質(zhì)量 //g 多糖含量 //% 平均值 //% RSD值 //% 干紅棗的粗多糖的含量測(cè)定 參考文獻(xiàn)得最佳提取條件：料液比 1:40，溫度 100℃ ，浸提時(shí)間 1h[15] 10 表 211 測(cè)得干紅棗的粗多糖的含量 多糖粗提取物質(zhì)量 //g 多糖含量 //% 平均值 //% RSD值 //% 干茶樹菇的粗多糖的含量測(cè)定 參考文獻(xiàn)得最佳提取條件：料液比 1:20，溫度 90℃ ，浸提時(shí)間 4h[16] 表 212 測(cè)得干茶樹菇的粗多糖的含量 多糖粗提取物質(zhì)量 //g 多糖含量 //% 平均值 //% RSD值 //% 多糖對(duì) 羥基自由基 (它可以降解 DNA，而且膜系統(tǒng)也會(huì)被誘導(dǎo)產(chǎn)生損傷，造成膜通透性增加，從而引起膜內(nèi)外物質(zhì)的內(nèi)流、泄漏，出現(xiàn)線粒體膨脹和紅細(xì)胞溶血等現(xiàn)象。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，如果加羥基自由基的消除劑后，影響會(huì)明顯減小。OH的清除作用 圖 2顯示，茶樹菇多糖對(duì)羥基自由基具有清除能力，且和維生素 C一樣隨著濃度增加清除作用增強(qiáng)。并且可以看出在試液濃度 相同的情況下，茶樹菇多糖對(duì)羥基自由基的清 11 除能力比維生素 C的強(qiáng)。OH的清除率 圖 3顯示，百合多糖具有清除羥基自由基的能力，并且和維生素 C一樣，隨著濃度的增加，清除能力也相應(yīng)增大。維生素 C的清除率是%。 枸杞多糖 根據(jù) ，不同濃度的枸杞多糖，對(duì)照維生素 C對(duì)羥基自由基的清除作用，結(jié)果如圖 4： 01020304050607080 1試液濃度/ / m g / m L清除率//%枸杞多糖維生素C 圖 4 維生素 C和枸杞多糖對(duì) 并且當(dāng)枸 杞多糖濃度為 ，它的清除率有 %。 12 多糖對(duì)超氧自由基（ O 2的清除率 由圖 5顯示，茶樹菇多糖對(duì)超氧陰離子具有清除作用，且隨著濃度的增加清除能力增加。與同濃度的維生素 C濃度比強(qiáng)很多。O 2的清除率 由圖 6顯示，百合多糖對(duì)超氧陰離子具有清除作用，并且隨著濃度的增加，清除作用也逐漸增大。當(dāng)達(dá)到 13 時(shí)，它對(duì)超氧陰離子的清除率為 %，維生素 C的清除率為 %。O 2具有一定的清除能力，且稍低于維生素 C溶液。O 2的清除率 由圖 7顯示，枸杞多糖對(duì)超氧陰離 子具有清除作用，并且隨著濃度的增加，清除作用也逐漸增大。明顯要比維生素 C的清除能力低很多。選取干木耳，采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)影響多糖提取率的浸提時(shí)間、溫度、料液比進(jìn)行探究。提取率 %。 抗氧化活性 選取了茶樹菇多糖、百合多糖、枸杞多糖在超氧陰離子和羥基自由基兩個(gè)不同的氧化體系中，以維生素 C作參照，研究了這三種干貨多糖的抗氧化抗氧化活性。在試驗(yàn)濃度的范圍中，和同濃度的維生素 C比較，茶樹菇對(duì)羥基自由基和超氧陰離子的清除作用都很強(qiáng)，并且均大于維 14 生素 C的抗氧化活性，百合多糖對(duì)羥基自由基的清除作用和維生素 C差不多，但是對(duì)超氧陰離子的清除作用稍低于維生素 C。 4 未來展望 近年來 ，有關(guān)多糖的研究國(guó)內(nèi)外都有 許 多，但是關(guān)于多糖的抗氧化活性的應(yīng)用還只是處于初級(jí)階段。關(guān)于這方面研究也已經(jīng)得到了越來越多人的重視和參與。抗氧化活性的研究在未來一定會(huì)出現(xiàn)新的突破。 15 參考文獻(xiàn) [1] 胡敏敏 , 蔡寶昌 , 張志杰等 . 百合多糖的藥學(xué)研究 [J]. 中藥新藥與臨床藥理 , 2021, 18（ 2） : 101102. [2] SeonJoo Yoon, MyeongAe Yu. The nontoxic mushroom Auricularia auricula contains a ploysaccharide with anticoagulant activity mediated by antithrombin[J]. Thrombosis Research, 2021, 112: 151158. [3] Liu F, Fung M C, Ooi V E C, et al. Induction in the mouse of gene expression ytokine Immunomdulating cytoline by Mushroom poplysaccharideprotein plexes[J]. Life Science, 1996, 58(21): 17951803. [4] 張惟杰 . 復(fù)合多糖生化 研究技術(shù) [M]. 上海 : 上?？萍汲霭嫔?, 1987, 6 ~7, 110. [5] 梁麗君 , 曾哲靈 , 熊淘 . 蒽酮 硫酸法測(cè)定大蒜多糖的含量 [J]. 食品科學(xué) , 2021, 29（ 9） : 499502. [6] 王東 , 林力 , 袁昌魯?shù)?. 車前子多糖含量的分析 [J]. 中草藥 , 2021, (10): 896897. [7] 齊亞娥 , 吳冬青 , 安紅綱等 . 玫瑰花蕾黃銅類化合物提取及清除羥基自由基能力 [J]. 食品科技 , 2021, 32(4): 8285. [8] 張曉強(qiáng) , 浦躍樸 , 尹立紅等 . 冬蟲夏草及人工蟲草菌絲對(duì)超氧陰離子自由基和請(qǐng)即自由基清除作用的實(shí)驗(yàn)研究 [J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志 , 2021, 23(11): 773775. [9] 賈建會(huì)等 . 深層發(fā)酵羊肚菌多糖的提取、分離及純化研究 [J]. 2021, 23(4): 5962. [10] 吳有煒 , 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與數(shù)據(jù)處理（第一版） [M]. 蘇州 : 蘇州大學(xué)出版社 , 2021, 85105. [11] 高洪霞 , 劉軍海等 . 枸杞多糖提取工藝的研究 [J]. 食品與機(jī)械 , 2021, 24(5): 6062. [12] 李利華 . 百合 多糖的含量測(cè)定及其抗氧化活性研究 [J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) , 2021, 50(14): 773775. [13] 余華 , 海帶多糖提取條件的優(yōu)化和脫蛋白研究 [J]. 中國(guó)食品添加劑 , 2021, 27(2): 3941. [14] 何偉珍 , 吳麗仙 . 銀耳多糖的提取分離與純化 [J]. 海峽藥學(xué) , 2021, 20(7): 3334. [15] 羅凱 , 胡廷章等 . 紅棗中多糖提取及純化工藝的研究 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) , 2021, 34(22): 59625963 . [16] 王宗君 , 廖丹葵 , 張良 軍 . 茶樹菇多糖提取工藝研究 [J]. 廣州化工 , 2021, 37(7): 9293. 16 致謝 經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的努力，畢業(yè)論文終于完成了，在這里對(duì)所有老師，同學(xué)及幫助