【正文】 銀杏果多糖屬天然植物提取物，提取過程中環(huán)保無污染，具有無細(xì)胞毒性及其它副作用的優(yōu)點(diǎn)，因此對其進(jìn)行研究和將其開發(fā)成天然抗氧化劑或自由基清除劑對保障機(jī)體健康、預(yù)防疾病有重要意義。人們對銀杏多糖的研究主要集中在銀杏葉和銀杏外種皮上，對于銀杏果多糖的研究卻比較匱乏。在此向?qū)熜炱G致以我最誠摯的謝意！在我撰寫論文的過程中，徐艷老師傾注了大量的心血和汗水，無論是在論文的選題、構(gòu)思 和資料的收集方面，還是在論文的研究方法以及成文定稿方面，我都得到了老師悉心細(xì)致的教誨和無私的幫助，在此期間的收獲使我終生受益，在此表示真誠地感謝和深深的謝意！ 在論文的實(shí)驗(yàn)過程中，同組的同學(xué)給了我極大的幫助，并提出了很多寶貴的意見，在此向他們致以衷心的感謝！另外，在論文的完成過程中，我也得到了沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)生物工程課題組所有師兄師姐的幫助和指導(dǎo)；同寢同學(xué)王帥、董楠等也給予了我熱心的幫助。導(dǎo)師在論文的選題、試驗(yàn)設(shè)計及研究內(nèi)容方面都對我進(jìn)行了嚴(yán)格要求和悉心指導(dǎo)。綜上所述，銀杏果多糖具有很好的抗氧化作用。銀杏果多糖表現(xiàn)出了很強(qiáng)的抗氧化能力，隨著銀杏果多糖質(zhì)量密度的遞增，對卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率也在逐步提升。通過以上分析可以得到，銀杏果多糖有較強(qiáng)的供氫能力。 通過實(shí)驗(yàn)所顯示的圖片結(jié)果和繪制的曲線表明銀杏果多糖對 DPPH自由基的清除效果與其質(zhì)量濃度緊密相關(guān)。 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 13 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)以銀杏果為原料，采用水提醇沉法提取銀杏果粗糖，利用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出銀杏果中多糖含量。較濃的亞鐵離子鹽溶液呈現(xiàn)深綠色 ,稀溶液呈現(xiàn)淺綠色，而鐵離子呈現(xiàn)淺黃色，因此透過圖片我們可以明顯看出，銀杏果多糖表現(xiàn)出了很強(qiáng)的還原能力，并且隨著銀杏果多糖質(zhì)量密度的遞增，對鐵離子的還原程度也在逐步提升。通過以上分析可以得到，銀杏果多糖有對卵黃脂質(zhì)過氧化有抑制作用。通過曲線我們可以發(fā)現(xiàn)銀杏果多糖對卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率與其 質(zhì)量濃度緊密相關(guān)。通過以上分析可以得到，銀杏果多糖有較強(qiáng)的供氫能力。而通過曲線可知，銀杏果多糖對 DPPH自由基的清除效果與其質(zhì)量濃度緊密相關(guān)。通過以上分析可以得到，銀杏果多糖有鐵離子具有較強(qiáng)的還原作用。通過圖 6我們可以發(fā)現(xiàn)銀杏果多糖對鐵離子的還原程度與其質(zhì)量濃度緊密相關(guān)。因此又叫通光 率。 3. 3 還原力的測定結(jié)果 分別取 mL 不同濃度的樣品于試管中，依次加入 2. 5 mL0. 2 moL /L pH 6. 6 的磷酸鹽緩沖液和 2. 5 mL 1% K3［ Fe( CN) 6］于 50 ℃水浴保溫 20 min 后，快速冷卻，再加入 2. 5 mL 10% TCA， 以 4 000 r /min 離心 10min， 取上清液 2. 5 mL，依次加入 2. 5 mL 重蒸水， 0. 5mL 0. 1%FeCl3，充分混勻， 靜止 10 min，以蒸餾水為對照在 700 nm處測定吸光度值。銀杏果多糖表現(xiàn)出了很強(qiáng)的抗氧化能力，隨著銀杏果多糖質(zhì)量密度的遞增，對 卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率也在逐步提升 很強(qiáng)的抗氧化能力，隨著銀杏果多糖質(zhì)量密沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 11 度的遞增，對 卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率也在逐步提升。 而通過圖 4顏色對比我們可以看出隨著銀杏果多糖濃度的升高，相應(yīng)的試管顏色越來越淺，因此我們也可以發(fā)現(xiàn) 銀杏果多糖對 卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率 與其質(zhì)量濃度緊密相關(guān)。銀杏果多糖表現(xiàn)出了很強(qiáng)的抗氧化能力，隨著銀杏果多糖質(zhì)量密度的遞增，對 卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率也在逐步提升。 得到結(jié)論如下圖： 銀杏果多糖抗氧化活性的初步研究 10 圖 3銀杏果多糖 對卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率 圖 4銀杏果多糖 對卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率 通過圖 3銀杏果多糖對卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率的曲線可以看出，銀杏果多糖對卵黃脂質(zhì)過氧化有抑制作用，而對卵黃脂質(zhì)過氧化的抑制作用可以反映銀杏果多糖的抗氧化性。 L1的硫酸亞鐵 ，最后用 moL L1 pH PBS按 1:1配成懸液，再稀釋成 1:25(卵黃 :總體積 )，磁力攪拌 30min。通過以上分析可以得到，銀杏果多糖 有較強(qiáng)的供氫能力。 而通過圖 2顏色對比我們可以看出隨著銀杏果多糖濃度的升高，相應(yīng)的試管顏色越來越淺，這也可以表示為 銀杏果多糖對 DPPH自由基的清除效果與其質(zhì)量濃度緊密相關(guān)。銀杏果多糖表現(xiàn)出了很強(qiáng)的 DPPH自由基清除能力，隨著銀杏果多糖質(zhì)量密度的遞增，對 DPPH自由基的清楚率也在逐步提升后趨于平穩(wěn)。 空白用 2 mL無水乙醇代替 DPPH，測定吸光度值 A 對照 樣品對 DPPH 的清除率計算 : E /% =［ 1 － ( A樣品 － A對照 ) /A空白］ 100 得到結(jié)論如下圖： 圖 1 銀杏果多糖對 DPPH自由基的清除率 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 9 圖 2 銀杏果多糖對 DPPH自由基的清除率 通過銀杏果多糖對 DPPH自由基的清除率的曲線圖可以看出，抗氧化劑通過轉(zhuǎn)移傳遞電子或氫原子給 DPPH來中和 其自由基，因此，對 DPPH自由基的清除效果可以反映抗氧化劑的供氫能力。 3．結(jié)果與分析 3. 1 清除 DPPH 活性的測定結(jié)果 采用提取物與穩(wěn)定自由基 DPPH 反應(yīng)的分析方法。采用提取物與穩(wěn)定自由基 DPPH 反應(yīng)的分析方法 ， 通過對 DPPH 自由基清除作用 ；對 雞卵黃脂蛋白的脂質(zhì)過氧化模型 的還原作用；以及對鐵離子的還原作用 ， 來 研究銀杏果多糖抗氧化活性 。結(jié)果表明銀杏白果多糖與銀杏葉多糖、銀杏外種皮多糖顯著不同 ,對其進(jìn)行深入的研究將為銀杏白果的藥理研究及其臨床應(yīng)用和開發(fā)提供重要的基礎(chǔ)資料。 L1 PBS 補(bǔ)至 2mL。在試管中加入上述卵黃懸液 ，分別加入樣品 (對照管加入 PBS)，再加入 25mmoL 抗卵黃脂質(zhì)過氧化活性的測定 采用依賴雞卵黃脂蛋白的脂質(zhì)過氧化模型，將新鮮卵黃用等體積的 空白用 2 mL 無水乙醇代替 DPPH，測定吸光度值 A 對照 樣品對 DPPH 的清除率計算 : E /% =［ 1 － ( A 樣品 － A 對照 ) /A 空白］ 100 2. 5 還原力的測定 本研究采用鐵離子還原法 ( FRAP) 和鐵氰化鉀還原法來測定各樣品的還原力 。 2. 4 清除 DPPH 活性的測定 采用提取物與穩(wěn)定自由基 DPPH 反應(yīng)的分析方法。 菌絲多糖含量測定 : 分別量取不同體積的各種菌絲多糖母液裝入具塞試管中， 配制成濃度梯度 然后再從試管中分別量取 1 mL 溶液裝入小試管中，并依次加入 1 mL 6%苯酚溶液， 5 mL 濃 H2 SO4，搖勻 放置 10 min，沸水浴加熱 15 min，冷卻至室溫，在490 nm 波長處測定吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出不同菌絲中多糖含量。 銀杏果多糖的提取 銀杏果去核，過 40 目篩 80%乙醇回流浸提 ( 水浴溫度 60℃ )，過濾，濾渣風(fēng)干樣品稱重，水提取抽濾，粗多糖提取液濃縮至原體積的 1/4，醇析沉淀，冷凍干燥，多糖粗品。 儀器 數(shù)字恒溫水浴鍋，常州國華電器有限公司；低速離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠 。 材料 銀杏果，收集于沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)（ 10 月份采摘） 。采用提取物與穩(wěn)定自由基 DPPH 反應(yīng)的分析方法 ， 通過對 DPPH 自由基清除作用 ；對 雞卵黃脂蛋白的脂質(zhì)過氧化模型 的還原作用；以及對鐵離子的還原作用 ， 來 研究銀杏果多糖抗氧化活性 。結(jié)果表明銀杏白果多糖與銀杏葉多糖、銀杏外種皮多糖顯著不同 ,對其進(jìn)行深入的研究將為銀杏白果的藥理研究及其臨床應(yīng)用和開發(fā)提供重要的基礎(chǔ)資料。植物多糖是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)之一，研究發(fā)現(xiàn)銀杏多糖具有多種活性 ， 有重要的研究和開發(fā)應(yīng)用 價值 ，本文將 對銀杏多糖的研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述 。銀杏果多糖屬天然植物提取物，提取過程中環(huán)保無污染，具有無細(xì)胞毒性及其它副作用的優(yōu)點(diǎn)，因此對其進(jìn)行研究和將其開發(fā)成天然抗氧化劑或自由基清除劑對保銀杏果多糖抗氧化活性的初步研究 6 障機(jī)體健康、預(yù)防疾病有重要意義。目前，能確認(rèn)銀杏果多糖具有的生物活性，有免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性 [25]，關(guān)于銀杏果多糖抗氧化活性的研究還未見報道。多糖作為無毒副作用具有生物活性的大分子化合物，已成為成為食品科學(xué)、天然藥物、生物化學(xué)與生命科學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn) [23,24]。國內(nèi)外對白果油功能性的報道很少，直到 2021年馬薩諸塞州大學(xué)研究表明，在某種程度上可以認(rèn)為銀杏果脂溶性成分可能對心血管疾病具有預(yù)防作用 [20]。 目前，銀杏果中已被確認(rèn)的活性成分主要有銀杏果蛋白質(zhì)