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正文內(nèi)容

銀杏果多糖抗氧化活性的初步研究畢業(yè)論文范例(編輯修改稿)

2024-07-10 20:13 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 位論文 5 銀杏樹葉、種子、木材、樹皮、根等 可開發(fā)成食品、保健品、化妝品、藥品、生物農(nóng)藥 以及原料藥的替代品等,故銀杏被稱為 “全身都是 寶的活化石 ” []。研究發(fā)現(xiàn),銀杏葉提取物及其制劑 在醫(yī)治心腦血管疾病及老年癡呆癥等方面效果顯著。 隨后深人研究發(fā)現(xiàn),銀杏外種皮 中含有具有抗過敏、 抗炎、抗氧化、抑菌等作用的銀杏酸類成分及 具有 較好抗腫瘤作用的多糖類成分,在生物農(nóng)藥和醫(yī)藥方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值圄。銀杏白果是銀杏的種子,有研究 表明銀杏白果中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì) ,主要包括碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂類等,同時(shí)銀杏 白果中還含有豐富的維生素、無機(jī)鹽和人體需要但 自身不能合成的 9種氨基酸。 Josef Kraus[ 16] 研究了銀杏葉多糖的成分及其化學(xué)結(jié)構(gòu) ,廣西醫(yī)科大學(xué)黃桂寬等[17] 對(duì)銀杏葉多糖進(jìn)行了分離、純化和鑒定 ,揚(yáng)州醫(yī)科大學(xué)許愛華等 [ 18 ] 對(duì)銀杏外種皮多糖進(jìn)行了粗提 ,并對(duì)它的免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤及抗衰老活性進(jìn)行了研 究。上述銀杏多糖是從銀杏葉和銀杏外種皮中提取的 本文敘述的是 有關(guān)銀杏白果多糖 的研究 。陳群等人發(fā)現(xiàn), 銀杏白果多糖是簡單均勻的水溶性多糖,相對(duì)分子質(zhì)量為 10,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)銀杏果多糖具 有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用。本實(shí)驗(yàn)利用熱水抽提、乙醇沉淀的方法 ,首次從銀杏白果中提取出多糖 , 然后對(duì)其結(jié)構(gòu)成分進(jìn)行了初步分析。結(jié)果表明銀杏白果多糖與銀杏葉多糖、銀杏外種皮多糖顯著不同 ,對(duì)其進(jìn)行深入的研究將為銀杏白果的藥理研究及其臨床應(yīng)用和開發(fā)提供重要的基礎(chǔ)資料。 目前,銀杏果中已被確認(rèn)的活性成分主要有銀杏果蛋白質(zhì) 、白果油、銀杏酸等。鄧乾春等人通過動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)銀杏果清蛋白( GAP)能顯著增強(qiáng)小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用,并且能夠能抑制體內(nèi) S180實(shí)體瘤和體外 S180 腫瘤細(xì)胞的生長,還能通過增強(qiáng)輻射損傷小鼠的抗氧化能力、造血功能及體內(nèi)免疫功能來起到對(duì)輻射損傷小鼠的保護(hù)作用 [19]。國內(nèi)外對(duì)白果油功能性的報(bào)道很少,直到 2021年馬薩諸塞州大學(xué)研究表明,在某種程度上可以認(rèn)為銀杏果脂溶性成分可能對(duì)心血管疾病具有預(yù)防作用 [20]。江蘇大學(xué)楊小明等人研究發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)銀杏酸對(duì)金黃色葡萄球菌、蠟樣芽抱桿菌、枯草桿菌均有抑制作用,對(duì)耐青霉素金葡菌 也有一定的抑制作用,銀杏酸與青霉素聯(lián)用,具有加強(qiáng)作用 [21,22]。多糖作為無毒副作用具有生物活性的大分子化合物,已成為成為食品科學(xué)、天然藥物、生物化學(xué)與生命科學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn) [23,24]。人們對(duì)銀杏多糖的研究主要集中在銀杏葉和銀杏外種皮上,對(duì)于銀杏果多糖的研究卻比較匱乏。目前,能確認(rèn)銀杏果多糖具有的生物活性,有免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性 [25],關(guān)于銀杏果多糖抗氧化活性的研究還未見報(bào)道。 大量的研究表明,一大部分從天然產(chǎn)物中分離得到的多糖類化合物具有除自由基,抑制脂質(zhì)過氧化,抑制亞油酸氧化,清除多種活性氧 (Reactive oxygen species, ROS)等抗氧化作用 [26]。銀杏果多糖屬天然植物提取物,提取過程中環(huán)保無污染,具有無細(xì)胞毒性及其它副作用的優(yōu)點(diǎn),因此對(duì)其進(jìn)行研究和將其開發(fā)成天然抗氧化劑或自由基清除劑對(duì)保銀杏果多糖抗氧化活性的初步研究 6 障機(jī)體健康、預(yù)防疾病有重要意義。 銀杏果多糖屬天然植物提取物,提取過程中環(huán)保無污染,具有無細(xì)胞毒性及其它副作用的優(yōu)點(diǎn),因此對(duì)其進(jìn)行研究和將其開發(fā)成天然抗氧化劑或自由基清除劑對(duì)保障機(jī)體健康、預(yù)防疾病有重要意義。植物多糖是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)之一,研究發(fā)現(xiàn)銀杏多糖具有多種活性 , 有重要的研究和開發(fā)應(yīng)用 價(jià)值 ,本文將 對(duì)銀杏多糖的研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述 。 以銀杏果為原料,從 銀杏白果中提取出多糖 , 然后對(duì)其結(jié)構(gòu)成分進(jìn)行了初步分析。結(jié)果表明銀杏白果多糖與銀杏葉多糖、銀杏外種皮多糖顯著不同 ,對(duì)其進(jìn)行深入的研究將為銀杏白果的藥理研究及其臨床應(yīng)用和開發(fā)提供重要的基礎(chǔ)資料。 本實(shí)驗(yàn) 采用水提醇沉法提取 銀杏果粗糖, 利用 葡萄糖 標(biāo)準(zhǔn)曲線 測定其中 多糖含量。采用提取物與穩(wěn)定自由基 DPPH 反應(yīng)的分析方法 , 通過對(duì) DPPH 自由基清除作用 ;對(duì) 雞卵黃脂蛋白的脂質(zhì)過氧化模型 的還原作用;以及對(duì)鐵離子的還原作用 , 來 研究銀杏果多糖抗氧化活性 。結(jié)果顯示 , 銀杏果多糖有顯著的抗氧化功能。 材料 銀杏果,收集于沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)( 10 月份采摘) 。 NBT( 氯化硝基四氮唑藍(lán) ),上海恒星應(yīng)用化學(xué)研究所;核黃素,北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司; 1, 1二苯 2苦肼基 ( 1, 1 diphenyl 2picrylhydrazyl, DPPH,純度 95%) , A Johnson MattheyCompany,其他所用試劑均為國產(chǎn)分析純。 儀器 數(shù)字恒溫水浴鍋,常州國華電器有限公司;低速離心機(jī),北京醫(yī)用離心機(jī)廠 。 循環(huán)水式多用真空泵,鄭州長城科工貿(mào)有限公司; SL 202 型電子天平,上海長橋精密科學(xué)儀器有限公司超凈工作臺(tái),哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司;日光燈反應(yīng)箱,自制。 銀杏果多糖的提取 銀杏果去核,過 40 目篩 80%乙醇回流浸提 ( 水浴溫度 60℃ ),過濾,濾渣風(fēng)干樣品稱重,水提取抽濾,粗多糖提取液濃縮至原體積的 1/4,醇析沉淀,冷凍干燥,多糖粗品。 2. 2 銀杏果多糖的含量測定 多糖的含量測定:采用苯酚 -硫酸法 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 7 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 : 將 20 mg 葡萄糖溶解并定容至 500 mL 分別量取 母液 0. 5 1. 0 2. 0 3. 0 4. 0 5. 0mL, 定容至 10 mL,各量取 1 mL 溶液、 1 mL 6%苯酚、 5 mL 濃 H2 SO4 搖勻放置 10 min , 沸水浴加熱 15 min,冷卻至室溫, 490 nm 波長處測定吸光度值以含量為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 菌絲多糖含量測定 : 分別量取不同體積的各種菌絲多糖母液裝入具塞試管中, 配制成濃度梯度 然后再從試管中分別量取 1 mL 溶液裝入小試管中,并依次加入 1 mL 6%苯酚溶液, 5 mL 濃 H2 SO4,搖勻 放置 10 min,沸水浴加熱 15 min,冷卻至室溫,在490 nm 波長處測定吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出不同菌絲中多糖含量。 2. 3 銀杏果多糖抗氧化活性的體外測定 將銀杏果多糖定容至 25 mL,進(jìn)行如下抗氧化活性的測定。 2. 4 清除 DPPH 活性的測定 采用提取物與穩(wěn)定自由基 DPPH 反應(yīng)的分析方法。 在同一具塞試管中加入 2 mL DPPH 溶液 ( 2 10- 4mol /L) , 1 mL 不同濃度樣品溶液,搖勻,室溫避光靜 30 min, 用無水乙醇作參比在 517 nm 處測定 吸光度 A 樣品 用 1 mL 蒸餾水代替樣液,測定空白吸光度 A。 空白用 2 mL 無水乙醇代替 DPPH,測定吸光度值 A 對(duì)照 樣品對(duì) DPPH 的清除率計(jì)算 : E /% =[ 1 - ( A 樣品 - A 對(duì)照 ) /A 空白] 100 2. 5 還原力的測定 本研究采用鐵離子還原法 ( FRAP) 和鐵氰化鉀還原法來測定各樣品的還原力 。 具體方法 : 分別取 mL 不同濃度的樣品于試管中, 依次加入 2. 5 mL0. 2 moL /L pH 6. 6 的磷酸鹽緩沖液和 2. 5 mL 1% K3[ Fe( CN) 6] 于 50 ℃水浴保溫 20 min 后,快速冷卻,再加入 2. 5 mL 10% TCA, 以 4 000 r /min 離心 10min, 取上清液 2. 5 mL, 依次加入 2. 5 mL 重蒸水, 0. 5mL 0. 1%FeCl3, 充分混勻, 靜止 10 min, 以蒸餾水為對(duì)照在 700 nm 處測定吸光度值。 抗卵黃脂質(zhì)過氧化活性的測定 采用依賴雞卵黃脂蛋白的脂質(zhì)過氧化模型,將新鮮卵黃用等體積的 L1 pH 的 PBS 按 1:1 配成懸液, 再稀釋成 1:25(卵黃 :總體積 ),磁力攪拌 30min。在試管中加入上述卵黃懸液 ,分別加入樣品 (對(duì)照管加入 PBS),再加入 25mmoL L1銀杏果多糖抗氧化活性的初步研究 8 的硫酸亞鐵 ,最后用 moL L1 PBS 補(bǔ)至 2mL。 以銀杏果為原料,從 銀杏白果中提取出多糖 , 然后對(duì)其結(jié)構(gòu)成分進(jìn)行了初步分析。結(jié)果表明銀杏白果多糖與銀杏葉多糖、銀杏外種皮多糖顯著不同 ,對(duì)其進(jìn)行深入的研究將為銀杏白果的藥理研究及其臨床應(yīng)用和開發(fā)提供重要的基礎(chǔ)資料。 本實(shí)驗(yàn)
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