【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ..............................................26 實(shí)驗(yàn)儀器 .............................................................................................................................................26 實(shí)驗(yàn)材料及溶劑 .................................................................................................................................26 實(shí)驗(yàn)方法 .....................................................................................................................................................26 原料準(zhǔn)備 .............................................................................................................................................26 樣品制備方法 .....................................................................................................................................26 反相高效液相色譜條件 ......................................................................................................................27 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析 .........................................................................................................................................27 雪蓮各部位 HPLC 色譜圖 ..................................................................................................................27 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 .............................................................................................................................................29 結(jié)果分析 .............................................................................................................................................29 小結(jié) .............................................................................................................................................................30第五章 總結(jié)及展望 .............................................................................................................................................31 總結(jié) .............................................................................................................................................................31 展望 .............................................................................................................................................................318 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）1 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）1第一章 文獻(xiàn)綜述 概述新疆雪蓮(Saussurea involucrata Kar. et Kir .)又稱天山雪蓮、雪蓮花、雪荷花或大苞雪蓮，是維吾爾醫(yī)藥中的常用民族藥，維吾爾名塔裕依力斯，屬被子植物門、雙子葉植物綱、菊目、菊科、鳳毛菊屬雪蓮亞屬的多年生草本植物，是新疆的珍貴草藥之一。株高 15—30 cm 左右，莖直立、粗壯，下部有宿存的褐色殘片；葉叢生，近革質(zhì)，呈長(zhǎng)橢圓形，邊緣有鋸齒；花苞多層，呈蓬座狀，近膜質(zhì)，白色或淺黃綠色；具管狀、紫紅色花冠； 頭狀花序聚生。雪蓮花是我國(guó)藏族、蒙古族、維吾爾族、納西族和普米族常用的珍稀民族藥，在《本草綱目拾遺》和藏本草《晶珠本草》中都有記載，起來(lái)源于鳳毛菊屬的水母兔子、綿頭雪兔子及天山雪蓮花等同屬多中植物的干燥地上部分或全草，具有抗風(fēng)濕、通絡(luò)活血的功效，用于頭部創(chuàng)傷、熱性刺痛、婦科病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和腦中風(fēng)?，F(xiàn)在藥理和化學(xué)研究表明，雪蓮花類藥材主要含黃酮、出體、倍半帖內(nèi)酚、木脂素和多糖等成分，具有抗癌、抗生育、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)、清除自由基和免役促進(jìn)等作用。雪蓮還有抗菌、抗輻射、抗寒、耐高山缺氧、強(qiáng)心、解痙鎮(zhèn)靜、平喘等功效。新疆雪蓮主要分布于新疆境內(nèi)的天山山脈、阿勒泰山脈和昆侖山脈，生長(zhǎng)于山脈海拔 4000 米左右的懸崖陡壁之上、冰漬巖縫之中。那里氣候奇寒、終年積雪不化，這種獨(dú)有的生存習(xí)性和獨(dú)特的生長(zhǎng)環(huán)境使其天然而稀有，并造就了它獨(dú)特的藥理作用和神奇的藥用價(jià)值，人們奉雪蓮為“百草之王” 、 “藥中極品”?！毒V目拾遺》中就有天山雪蓮的文字記載:天山雪蓮又名 “鳳毛菊”，性大熱，能補(bǔ)陰益陽(yáng)，祛一切寒癥，雪蓮全草人藥，具有通經(jīng)活血，暖宮散寮、散寒除濕、強(qiáng)精助陽(yáng)，止血消腫的功效，使用安全無(wú)毒、無(wú)副作用，雪蓮人肝、脾、腎、三經(jīng)，治療急慢性風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及關(guān)節(jié)疼痛，肺寒咳嗽、宮寒腹痛、閉經(jīng)、胎衣不下、陽(yáng)痰和麻疹等癥。雪蓮一般生長(zhǎng)在海拔 2400 m 以上的高山冰債石、流石灘石隙中，生態(tài)環(huán)境惡劣，自然生長(zhǎng)期 5 一 8 年，最后一年開花結(jié)種且種子萌發(fā)率極低。由于近年來(lái)野生雪蓮亂采濫挖現(xiàn)象十分嚴(yán)重，加之人工栽培困難，雪蓮已被列為國(guó)家 3 級(jí)瀕危物種而受到保2 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）2護(hù)。3 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）3 新疆雪蓮化學(xué)成分 從新疆雪蓮中提取分離的化合物化學(xué)類型 化合物名稱黃酮 高車前素、金合歡素、檞皮素 [1]、芹菜素5,6二甲氧基黃酮、芹菜素6 甲氧基黃酮 [2]黃酮苷 蘆丁、檞皮素3oαL 鼠李糖苷 [3]糖類 多糖（813） 、天山雪蓮花多糖（SIP） 、精制雪蓮多糖（SPSI ） [4]生物堿 大苞雪蓮堿（13脯胺酸取代的二氫去氫廣木香內(nèi)酯） [5]、秋水仙堿[2]倍半萜內(nèi)酯及內(nèi)酯苷大苞雪蓮內(nèi)酯（4,10環(huán)外亞甲基 8羥基11甲基愈創(chuàng)內(nèi)酯） [6]、去氫廣木香內(nèi)酯 [7]、3αOH,11β,13二氫去氫廣木香內(nèi)酯8βD葡萄糖苷 [8]、11α,13 二氫去氫廣木香內(nèi)酯、雪蓮內(nèi)酯、大苞雪蓮內(nèi)酯8βD葡萄糖 [4]。苯丙素類 紫丁香苷 [1]、綠原酸 [2]香豆素類 蛇床子內(nèi)酯、佛手內(nèi)酯、異茴芹內(nèi)酯、愛(ài)得爾庭、葉鞘二醇二乙酸酯、別異因波拉托內(nèi)酯 、噢洛內(nèi)酯 、花椒香豆素 [9] 多糖的研究進(jìn)展及意義多糖(polysaccharides)又稱為多聚糖，即聚合度超過(guò) 10 的聚糖，包括植物多糖、動(dòng)物多糖以及微生物多糖三大來(lái)源，它是由糖碳鍵連結(jié)起來(lái)的醛糖或酮糖組成的天然大分子物質(zhì)，是所有生命有機(jī)體的重要組成部分，并與維持生命所需的多種生理功能有關(guān) [1]. 糖類作為生命的信息分子己經(jīng)得到普遍承認(rèn)。蛋白質(zhì)和核酸在生命現(xiàn)象中的重要性為世人所知，以基因重組為代表的生物工程己經(jīng)并將大大地造福于人類社會(huì) [2]。但是，糖類研究卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于蛋白質(zhì)和核酸的飛速發(fā)展。之所以如此，有兩個(gè)重要原因:第一是理論上的簡(jiǎn)單化。人們過(guò)低地估計(jì)了糖類對(duì)生命過(guò)程的貢獻(xiàn)，缺乏研究興趣。第二是在研究方法上較困難。從自然界分離的粗多糖是非常復(fù)雜的混合物，其中包括各種4 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）4生物大分子的混合，不同多糖(中性多糖、酸性多糖、雜多糖)的混合以及不同分子大小，不同糖試鍵構(gòu)成的不同多糖的混合物，必須采取適合其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的方法進(jìn)行分離、分級(jí)和純化。很少有人肯在方法上花很多工夫 [3]。從天然產(chǎn)物提純得到純凈的糖聚合物是非常困難的，合成也是如此。除了很少的例外，基本上蛋白質(zhì)或核酸是由確定位置連接而成的線形聚合物。與之相比，因?yàn)樘前S多能與單體成鍵的輕基所以可合成的聚合物的組合可能遠(yuǎn)大于蛋白質(zhì)或核酸的。而且，糖甚至能在其線形聚合物上伸出側(cè)鏈，這讓推斷純凈的天然糖結(jié)構(gòu)非常困難。除此之外，核酸如 mRNA 等作為遺傳表達(dá)的藍(lán)圖，蛋白質(zhì)作為基因表達(dá)初產(chǎn)品，僅通過(guò)復(fù)制和翻譯過(guò)程，產(chǎn)生的都是相同的聚合物。因此，相對(duì)等量的聚合物能被分離。如果產(chǎn)量不足，對(duì)于核酸以 PCR 法，對(duì)于蛋白質(zhì)以微生物法倍增和提純。然而，因?yàn)樵谔呛铣芍袥](méi)有如核酸那樣的藍(lán)圖，因而糖僅是包含由環(huán)境不同而產(chǎn)生的多種組分，保持相似的結(jié)構(gòu)，很難得到相同結(jié)構(gòu)的糖，而且也沒(méi)有發(fā)展倍增技術(shù)。如果我們將核酸或蛋白質(zhì)比作保持體形統(tǒng)一的動(dòng)物，那么糖就是植物，有不同的枝葉有不同的形狀。 自六十年代以來(lái)，人們逐漸發(fā)現(xiàn)多糖具有復(fù)雜的、多方面的生物功能 [45]。大量的藥理實(shí)驗(yàn)表明，多糖類化合物是一種免疫調(diào)節(jié)劑，它能激活免疫細(xì)胞，同時(shí)又能促進(jìn)干擾素生成，促進(jìn)白細(xì)胞介素生成，誘生腫瘤壞死因子 [6]。到目前為止，己有近 300 種的多糖類化合物從天然產(chǎn)物中被分離提取出來(lái)。中草藥是祖國(guó)醫(yī)學(xué)的寶貴遺產(chǎn)，各種多糖資源十分豐富，具有巨大的開發(fā)潛力，故從中藥中提取的植物多糖類尤為重要 [7]。己有不少研究結(jié)果確證，糖類作為信息分子在受精、發(fā)生、發(fā)育分化，神經(jīng)系統(tǒng)和系統(tǒng)衡態(tài)的維持等方面起著重要作用。炎癥和自身免疫疾病、老化、癌細(xì)胞的異常增殖和轉(zhuǎn)換胞識(shí)別和病原體感染等生物學(xué)過(guò)程都有糖類的介導(dǎo)。在這一系列的生物過(guò)程中，最重要的生物活性因子便是糖鏈。它在生命活動(dòng)中的功用并不亞于蛋白質(zhì)和脂類，這就預(yù)示著重要的天然糖和人工糖的巨大醫(yī)療保健價(jià)值，以糖為基礎(chǔ)的糖藥物學(xué)的研究和開發(fā)便成為現(xiàn)在世界生物化學(xué)與生物醫(yī)學(xué)交叉點(diǎn)的新的邊緣學(xué)科 [8]。糖藥物的研究與開發(fā)必將成為 21 世紀(jì)新藥開發(fā)的一個(gè)重要領(lǐng)域。 糖藥物的最重要的特點(diǎn)，它們中間的大多數(shù)是作用于細(xì)胞表面，參與了細(xì)胞和細(xì)胞，細(xì)胞和活性分子的相互作用 [2,9]。由于多數(shù)以糖類為基礎(chǔ)的藥物的作用位點(diǎn)是在細(xì)胞表面，而不進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，因此這類藥物對(duì)于整個(gè)細(xì)胞、進(jìn)而整個(gè)機(jī)體的干擾要比進(jìn)入細(xì)胞核、質(zhì)內(nèi)小得多。就這點(diǎn)而一言，糖藥物是副作用相對(duì)較小的藥物。因此不僅可以作為治療疾病的藥物，而且可以作為保健類藥物 [10]。5 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）5 我國(guó)到目前為止，只有云芝多糖、獲等多糖、香菇多糖、裂褶多糖等用于臨床，但它們?cè)诳鼓[瘤抗病毒、抗衰老、降血糖。愈潰瘍等疑難病癥的治療方面己顯示了誘人的前景 [11]。展望未來(lái)，我國(guó)開發(fā)糖藥物有著得天獨(dú)厚的條件，蘊(yùn)藏了豐富的生物資源，其中僅特有植物有 92 種，已被研究開發(fā)的只占其中很少一部分，同時(shí)還有深厚的傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論和臨床實(shí)踐可供借鑒。相信經(jīng)過(guò)我國(guó)科研人員的辛勤工作，一定會(huì)擁有自己獨(dú)立的知識(shí)產(chǎn)權(quán)，在世界糖藥物研究領(lǐng)域里寫下輝煌的篇章 [12]。 多糖的生物活性與構(gòu)效關(guān)系多糖具有多種生物活性是與它的化學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)的。活性多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)是其生物活性的基礎(chǔ)。就其一級(jí)結(jié)構(gòu)而言，多糖中單糖的組成、糖普鍵的類型以及一些官能團(tuán)對(duì)其生物活性都有影響。一般而言，多糖主鏈上 β(13)糖著鍵是其活性前提。在高級(jí)結(jié)構(gòu)層次上，多糖立體結(jié)構(gòu)中 β螺旋具有較強(qiáng)生物活性，可拉伸帶狀有一定生物活性，而其它兩種結(jié)構(gòu)無(wú)生物活性。另外，多糖的分子量溶解度、旋光度、粘度等性狀也影響其生理功能。多糖結(jié)構(gòu)的化學(xué)修飾有時(shí)可提高其生物活性，如梭甲基化、硫酸酷化、乙酞化等。但至今為止，多糖構(gòu)效關(guān)系的研究還沒(méi)有更大的突破。 糖的構(gòu)效關(guān)系就是指多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)和高級(jí)結(jié)構(gòu)與其生物活性的關(guān)系，是當(dāng)前糖化學(xué)和糖生物學(xué)共同關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題。 [37]多糖中的官能團(tuán)的種類或有無(wú)對(duì)其生物活性有極大的影響，而這些官能團(tuán)往往可以通過(guò)一定的化學(xué)方式進(jìn)行添加或消除，所以多糖中官能團(tuán)的改造己成為研究多糖構(gòu)效關(guān)系的有力手段。多糖的高級(jí)結(jié)構(gòu)的研究還較少，但科學(xué)家己肯定多糖的高級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)功能的影響比一級(jí)結(jié)構(gòu)重要得多。X 一衍射分析表明，香菇多糖及長(zhǎng)褶多糖均具 β三股繩狀螺旋型立體結(jié)構(gòu)，在香