【文章內(nèi)容簡介】 ..............................................26 實驗儀器 .............................................................................................................................................26 實驗材料及溶劑 .................................................................................................................................26 實驗方法 .....................................................................................................................................................26 原料準備 .............................................................................................................................................26 樣品制備方法 .....................................................................................................................................26 反相高效液相色譜條件 ......................................................................................................................27 實驗結(jié)果及分析 .........................................................................................................................................27 雪蓮各部位 HPLC 色譜圖 ..................................................................................................................27 實驗結(jié)果 .............................................................................................................................................29 結(jié)果分析 .............................................................................................................................................29 小結(jié) .............................................................................................................................................................30第五章 總結(jié)及展望 .............................................................................................................................................31 總結(jié) .............................................................................................................................................................31 展望 .............................................................................................................................................................318 北京工商大學畢業(yè)論文（設計）1 北京工商大學畢業(yè)論文（設計）1第一章 文獻綜述 概述新疆雪蓮(Saussurea involucrata Kar. et Kir .)又稱天山雪蓮、雪蓮花、雪荷花或大苞雪蓮，是維吾爾醫(yī)藥中的常用民族藥，維吾爾名塔裕依力斯，屬被子植物門、雙子葉植物綱、菊目、菊科、鳳毛菊屬雪蓮亞屬的多年生草本植物，是新疆的珍貴草藥之一。株高 15—30 cm 左右，莖直立、粗壯，下部有宿存的褐色殘片；葉叢生，近革質(zhì)，呈長橢圓形，邊緣有鋸齒；花苞多層，呈蓬座狀，近膜質(zhì)，白色或淺黃綠色；具管狀、紫紅色花冠； 頭狀花序聚生。雪蓮花是我國藏族、蒙古族、維吾爾族、納西族和普米族常用的珍稀民族藥，在《本草綱目拾遺》和藏本草《晶珠本草》中都有記載，起來源于鳳毛菊屬的水母兔子、綿頭雪兔子及天山雪蓮花等同屬多中植物的干燥地上部分或全草，具有抗風濕、通絡活血的功效，用于頭部創(chuàng)傷、熱性刺痛、婦科病、類風濕關節(jié)炎和腦中風?，F(xiàn)在藥理和化學研究表明，雪蓮花類藥材主要含黃酮、出體、倍半帖內(nèi)酚、木脂素和多糖等成分，具有抗癌、抗生育、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)、清除自由基和免役促進等作用。雪蓮還有抗菌、抗輻射、抗寒、耐高山缺氧、強心、解痙鎮(zhèn)靜、平喘等功效。新疆雪蓮主要分布于新疆境內(nèi)的天山山脈、阿勒泰山脈和昆侖山脈，生長于山脈海拔 4000 米左右的懸崖陡壁之上、冰漬巖縫之中。那里氣候奇寒、終年積雪不化，這種獨有的生存習性和獨特的生長環(huán)境使其天然而稀有，并造就了它獨特的藥理作用和神奇的藥用價值，人們奉雪蓮為“百草之王” 、 “藥中極品”?！毒V目拾遺》中就有天山雪蓮的文字記載:天山雪蓮又名 “鳳毛菊”，性大熱，能補陰益陽，祛一切寒癥，雪蓮全草人藥，具有通經(jīng)活血，暖宮散寮、散寒除濕、強精助陽，止血消腫的功效，使用安全無毒、無副作用，雪蓮人肝、脾、腎、三經(jīng)，治療急慢性風濕關節(jié)炎及關節(jié)疼痛，肺寒咳嗽、宮寒腹痛、閉經(jīng)、胎衣不下、陽痰和麻疹等癥。雪蓮一般生長在海拔 2400 m 以上的高山冰債石、流石灘石隙中，生態(tài)環(huán)境惡劣，自然生長期 5 一 8 年，最后一年開花結(jié)種且種子萌發(fā)率極低。由于近年來野生雪蓮亂采濫挖現(xiàn)象十分嚴重，加之人工栽培困難，雪蓮已被列為國家 3 級瀕危物種而受到保2 北京工商大學畢業(yè)論文（設計）2護。3 北京工商大學畢業(yè)論文（設計）3 新疆雪蓮化學成分 從新疆雪蓮中提取分離的化合物化學類型 化合物名稱黃酮 高車前素、金合歡素、檞皮素 [1]、芹菜素5,6二甲氧基黃酮、芹菜素6 甲氧基黃酮 [2]黃酮苷 蘆丁、檞皮素3oαL 鼠李糖苷 [3]糖類 多糖（813） 、天山雪蓮花多糖（SIP） 、精制雪蓮多糖（SPSI ） [4]生物堿 大苞雪蓮堿（13脯胺酸取代的二氫去氫廣木香內(nèi)酯） [5]、秋水仙堿[2]倍半萜內(nèi)酯及內(nèi)酯苷大苞雪蓮內(nèi)酯（4,10環(huán)外亞甲基 8羥基11甲基愈創(chuàng)內(nèi)酯） [6]、去氫廣木香內(nèi)酯 [7]、3αOH,11β,13二氫去氫廣木香內(nèi)酯8βD葡萄糖苷 [8]、11α,13 二氫去氫廣木香內(nèi)酯、雪蓮內(nèi)酯、大苞雪蓮內(nèi)酯8βD葡萄糖 [4]。苯丙素類 紫丁香苷 [1]、綠原酸 [2]香豆素類 蛇床子內(nèi)酯、佛手內(nèi)酯、異茴芹內(nèi)酯、愛得爾庭、葉鞘二醇二乙酸酯、別異因波拉托內(nèi)酯 、噢洛內(nèi)酯 、花椒香豆素 [9] 多糖的研究進展及意義多糖(polysaccharides)又稱為多聚糖，即聚合度超過 10 的聚糖，包括植物多糖、動物多糖以及微生物多糖三大來源，它是由糖碳鍵連結(jié)起來的醛糖或酮糖組成的天然大分子物質(zhì)，是所有生命有機體的重要組成部分，并與維持生命所需的多種生理功能有關 [1]. 糖類作為生命的信息分子己經(jīng)得到普遍承認。蛋白質(zhì)和核酸在生命現(xiàn)象中的重要性為世人所知，以基因重組為代表的生物工程己經(jīng)并將大大地造福于人類社會 [2]。但是，糖類研究卻遠遠落后于蛋白質(zhì)和核酸的飛速發(fā)展。之所以如此，有兩個重要原因:第一是理論上的簡單化。人們過低地估計了糖類對生命過程的貢獻，缺乏研究興趣。第二是在研究方法上較困難。從自然界分離的粗多糖是非常復雜的混合物，其中包括各種4 北京工商大學畢業(yè)論文（設計）4生物大分子的混合，不同多糖(中性多糖、酸性多糖、雜多糖)的混合以及不同分子大小，不同糖試鍵構(gòu)成的不同多糖的混合物，必須采取適合其結(jié)構(gòu)特點的方法進行分離、分級和純化。很少有人肯在方法上花很多工夫 [3]。從天然產(chǎn)物提純得到純凈的糖聚合物是非常困難的，合成也是如此。除了很少的例外，基本上蛋白質(zhì)或核酸是由確定位置連接而成的線形聚合物。與之相比，因為糖包含許多能與單體成鍵的輕基所以可合成的聚合物的組合可能遠大于蛋白質(zhì)或核酸的。而且，糖甚至能在其線形聚合物上伸出側(cè)鏈，這讓推斷純凈的天然糖結(jié)構(gòu)非常困難。除此之外，核酸如 mRNA 等作為遺傳表達的藍圖，蛋白質(zhì)作為基因表達初產(chǎn)品，僅通過復制和翻譯過程，產(chǎn)生的都是相同的聚合物。因此，相對等量的聚合物能被分離。如果產(chǎn)量不足，對于核酸以 PCR 法，對于蛋白質(zhì)以微生物法倍增和提純。然而，因為在糖合成中沒有如核酸那樣的藍圖，因而糖僅是包含由環(huán)境不同而產(chǎn)生的多種組分，保持相似的結(jié)構(gòu)，很難得到相同結(jié)構(gòu)的糖，而且也沒有發(fā)展倍增技術。如果我們將核酸或蛋白質(zhì)比作保持體形統(tǒng)一的動物，那么糖就是植物，有不同的枝葉有不同的形狀。 自六十年代以來，人們逐漸發(fā)現(xiàn)多糖具有復雜的、多方面的生物功能 [45]。大量的藥理實驗表明，多糖類化合物是一種免疫調(diào)節(jié)劑，它能激活免疫細胞，同時又能促進干擾素生成，促進白細胞介素生成，誘生腫瘤壞死因子 [6]。到目前為止，己有近 300 種的多糖類化合物從天然產(chǎn)物中被分離提取出來。中草藥是祖國醫(yī)學的寶貴遺產(chǎn)，各種多糖資源十分豐富，具有巨大的開發(fā)潛力，故從中藥中提取的植物多糖類尤為重要 [7]。己有不少研究結(jié)果確證，糖類作為信息分子在受精、發(fā)生、發(fā)育分化，神經(jīng)系統(tǒng)和系統(tǒng)衡態(tài)的維持等方面起著重要作用。炎癥和自身免疫疾病、老化、癌細胞的異常增殖和轉(zhuǎn)換胞識別和病原體感染等生物學過程都有糖類的介導。在這一系列的生物過程中，最重要的生物活性因子便是糖鏈。它在生命活動中的功用并不亞于蛋白質(zhì)和脂類，這就預示著重要的天然糖和人工糖的巨大醫(yī)療保健價值，以糖為基礎的糖藥物學的研究和開發(fā)便成為現(xiàn)在世界生物化學與生物醫(yī)學交叉點的新的邊緣學科 [8]。糖藥物的研究與開發(fā)必將成為 21 世紀新藥開發(fā)的一個重要領域。 糖藥物的最重要的特點，它們中間的大多數(shù)是作用于細胞表面，參與了細胞和細胞，細胞和活性分子的相互作用 [2,9]。由于多數(shù)以糖類為基礎的藥物的作用位點是在細胞表面，而不進入細胞內(nèi)部，因此這類藥物對于整個細胞、進而整個機體的干擾要比進入細胞核、質(zhì)內(nèi)小得多。就這點而一言，糖藥物是副作用相對較小的藥物。因此不僅可以作為治療疾病的藥物，而且可以作為保健類藥物 [10]。5 北京工商大學畢業(yè)論文（設計）5 我國到目前為止，只有云芝多糖、獲等多糖、香菇多糖、裂褶多糖等用于臨床，但它們在抗腫瘤抗病毒、抗衰老、降血糖。愈潰瘍等疑難病癥的治療方面己顯示了誘人的前景 [11]。展望未來，我國開發(fā)糖藥物有著得天獨厚的條件，蘊藏了豐富的生物資源，其中僅特有植物有 92 種，已被研究開發(fā)的只占其中很少一部分，同時還有深厚的傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論和臨床實踐可供借鑒。相信經(jīng)過我國科研人員的辛勤工作，一定會擁有自己獨立的知識產(chǎn)權，在世界糖藥物研究領域里寫下輝煌的篇章 [12]。 多糖的生物活性與構(gòu)效關系多糖具有多種生物活性是與它的化學結(jié)構(gòu)密切相關的?；钚远嗵堑幕瘜W結(jié)構(gòu)是其生物活性的基礎。就其一級結(jié)構(gòu)而言，多糖中單糖的組成、糖普鍵的類型以及一些官能團對其生物活性都有影響。一般而言，多糖主鏈上 β(13)糖著鍵是其活性前提。在高級結(jié)構(gòu)層次上，多糖立體結(jié)構(gòu)中 β螺旋具有較強生物活性，可拉伸帶狀有一定生物活性，而其它兩種結(jié)構(gòu)無生物活性。另外，多糖的分子量溶解度、旋光度、粘度等性狀也影響其生理功能。多糖結(jié)構(gòu)的化學修飾有時可提高其生物活性，如梭甲基化、硫酸酷化、乙酞化等。但至今為止，多糖構(gòu)效關系的研究還沒有更大的突破。 糖的構(gòu)效關系就是指多糖的一級結(jié)構(gòu)和高級結(jié)構(gòu)與其生物活性的關系，是當前糖化學和糖生物學共同關注的焦點問題。 [37]多糖中的官能團的種類或有無對其生物活性有極大的影響，而這些官能團往往可以通過一定的化學方式進行添加或消除，所以多糖中官能團的改造己成為研究多糖構(gòu)效關系的有力手段。多糖的高級結(jié)構(gòu)的研究還較少，但科學家己肯定多糖的高級結(jié)構(gòu)對功能的影響比一級結(jié)構(gòu)重要得多。X 一衍射分析表明，香菇多糖及長褶多糖均具 β三股繩狀螺旋型立體結(jié)構(gòu)，在香