【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 　 近年來，一些人提出的“仿生提取” 。它基本上是建立模型，模擬胃和小腸的身體內(nèi)部工作環(huán)境，提出了人工胃液和人工腸液提取中藥(TCM)在低溫和酶催化的引入人體，使藥物進(jìn)入人體易于綜合利用活動(dòng)的混合物。目前，主要實(shí)驗(yàn)室研究采用的酶類有纖維素酶和果膠酶，除此之外也有中性蛋白酶等 [20~21]。超聲波提?。嚎梢源偈谷軇B透快速進(jìn)入細(xì)胞,大大縮短提取時(shí)間,顯著提高提取率 [22~23]。 超聲提取是由超聲波輔助溶劑萃取,其特點(diǎn)是超聲波產(chǎn)生高速,強(qiáng)烈的空化效應(yīng)和混合功能損傷的細(xì)胞,能夠縮短提取的時(shí)間。超聲波提取優(yōu)點(diǎn)： 萃取效率高； 提取時(shí)間非常短；提取溫度非常低；適應(yīng)性廣；提取液中雜質(zhì)很少，有效成分比較容易分離和提純；提取的過程中操作成本非常低，綜合經(jīng)濟(jì)效益顯著提高。超濾法：超濾是一種膜分離的技術(shù)，在多糖的提取過程中，使用超濾膜可以孤立于水或其他液體分子量不同的膠體和高分子材料。動(dòng)植物多糖的超濾技術(shù)可以將多糖進(jìn)行有效的分級(jí)，具有非常高的收率、重復(fù)性也比較好好、能源邵陽學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）4消耗低、設(shè)備比較簡(jiǎn)單、沒有污染、并且不會(huì)破壞多糖的生物活性等優(yōu)點(diǎn)。和超濾膜的情況下連續(xù)使用了很長(zhǎng)一段時(shí)間也可以維持一個(gè)恒定的輸出和分離效果 [24~25]。 靈芝多糖的開發(fā)和利用現(xiàn)狀自1960年代以來,研究表明,某些真菌多糖的藥用價(jià)值顯著,沒有細(xì)胞毒性,應(yīng)用前景非常廣闊。測(cè)定多糖的多糖在藥物質(zhì)量控制有著非常重要的作用,但多糖的研究開始得較晚，所以其測(cè)定方法以及提取過程中存在的影響因素目前還存在著很大的不足。近年來郭利平 [26]，陳超琴 [27]，范曉良 [28]等，這些學(xué)者在多糖的研究方面都做出了很大的貢獻(xiàn)，但是他們的研究主要關(guān)注多糖的提取工藝,故本實(shí)驗(yàn)從老師所給的幾點(diǎn)影響因素入手，參考近五年的有關(guān)多糖提取方面的文獻(xiàn)，結(jié)合不同學(xué)者多年來從不同方面對(duì)多糖測(cè)定方法的研究,預(yù)處理在幾個(gè)對(duì)酶法提取靈芝多糖的影響,并提出自己的看法不同的問題，以期為工業(yè)上預(yù)處理對(duì)酶法提取靈芝多糖的影響因素的選擇提供依據(jù)。 本論文研究的主要內(nèi)容這部分研究靈芝子實(shí)體為原料，通過不同因素的預(yù)處理，然后利用酶法提取靈芝子實(shí)體的靈芝多糖，最后利用紫外分光光度法測(cè)定靈芝多糖的含量。本次的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕菫榱丝疾椴煌膯我蛩氐奈锪项A(yù)處理對(duì)酶法提取靈芝多糖的影響，然后在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，用靈芝中靈芝多糖的提取率為參考目標(biāo)，對(duì)烘烤溫度、紫外線的照射時(shí)間、物料粒度等因素進(jìn)行正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)研究。 研究方案和采取的措施 靈芝子實(shí)體的預(yù)處理靈芝多糖存在于子實(shí)體細(xì)胞內(nèi)壁，提取較為困難，因此采用粒度處理、烘烤處理、紫外處理三種預(yù)處理方式，由于靈芝原材料不易加工， 所以實(shí)驗(yàn)前要對(duì)原材料進(jìn)行挑選、清洗、干燥、粉碎等幾個(gè)預(yù)處理工藝。粉碎是為了增加在萃取過程中反應(yīng)的接觸面積，用以獲得到較高的提取率。 靈芝多糖的提取邵陽學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）5近年來很多學(xué)者在靈芝多糖的提取上做了大量的研究，由曹澤虹 [16]等做的酶法提取靈芝多糖的工藝研究實(shí)驗(yàn)可知：%，纖維素酶的降解溫度為55 ℃，時(shí)間80 分鐘， ；% ，用果膠酶酶解溫度為40 ℃，果膠酶的降解時(shí)間為80分鐘， ；植物蛋白水解酶%，植物蛋白酶的降解時(shí)間為60 分鐘，酶降解溫度55 ℃。三種酶相比,纖維素酶提取靈芝多糖的效果最好,多糖提取容量高達(dá),酒精、纖維素酶+酒精下沉的方法來比較三種方法提取靈芝多糖含量、纖維素酶水解+酒精下沉方法提取效果是最好的,多糖含量,故本實(shí)驗(yàn)采取纖維素酶法 +醇沉法提取，探究物料粒度、烘烤溫度以及紫外照射時(shí)間與（酶法提取）靈芝多糖提取率之間的相關(guān)關(guān)系。 靈芝多糖的測(cè)定靈芝多糖在濃硫酸的作用下能夠水解成單糖,然后單糖之間能夠快速脫水形成醛衍生品,最后與酚結(jié)合，反應(yīng)生成有色的化合物。最后可以用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定其 OD 值，并且通過計(jì)算可以得到靈芝多糖的獲得率。邵陽學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）62 材 料 與 方 法 實(shí)驗(yàn)試劑與材料試劑與材料可以見表 。表 試驗(yàn)所用試劑與材料藥品名稱 級(jí)別 生產(chǎn)廠家 濃度無水酒精 AR 東莞市建潤化工有限公 100%C6H12O6 AR 北京化工廠壞水 AR 淄博建龍化工有限公司 95%枸櫞酸鈉 AR 北京化工廠石碳酸 AR 濟(jì)南世紀(jì)通達(dá)化工廠 100%芝草 市售 戴家平老百姓大藥房 主要儀器與設(shè)備儀器與設(shè)備歸納表 。表 試驗(yàn)用主要儀器名字 規(guī)格 產(chǎn)地紫外 可見光分光光度計(jì) GS53 上海天呈醫(yī)流科技股份有限公司標(biāo)準(zhǔn)篩 JKWQ61M/SZZ 北京中科路達(dá)試驗(yàn)儀器有限公司電子天平 AR5120 上海臺(tái)之衡工貿(mào)有限公司生物安全柜 81M/AC24S1 廣州安邦生物科技有限公司高速冷凍離心機(jī) Evolution RC 美國 Thermo Scientific 公司電熱鼓風(fēng)干燥箱 DHG91401 北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司真空干燥箱 DZF6051 上海壘固儀器有限公司中藥粉碎機(jī) TT30,FW177 北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司邵陽學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）7 研究方法 靈芝多糖提取工藝流程 （1）靈芝子實(shí)體的預(yù)處理 靈芝子實(shí)體→挑選、清洗→烘干至恒重→粉碎→過篩→紫外線照射一定時(shí)間→預(yù)處理的靈芝粉 （2）靈芝多糖的提取工藝流程準(zhǔn)確稱取 靈芝粉→單因素處理（烘烤溫度，物料粒度，紫外線照射）→加入一定量的 pH(pH=)的緩沖液（料液比= 1:15）→加入 %的纖維素酶(調(diào) pH，酶解 8 分鐘)→離心分離（3000r/min，15min）→取上層離心液→酶解法除蛋白→透析→加熱滅酶（10min ）→ 過濾除酶→濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮→沉淀→離心取沉淀→丙酮洗滌→烘干→粗多糖 單因素的預(yù)處理對(duì)酶法提取靈芝多糖的影響的實(shí)驗(yàn)(1)烘烤溫度對(duì)(酶法提取) 靈芝多糖的提取率之間的關(guān)系 [29] g，將其置于250 mL錐形瓶中，然后將盛有物料的錐形瓶放入烘箱設(shè)備中烘烤溫度（70℃、75℃、80℃、85℃、90℃ ）一定時(shí)間，取出錐形瓶，處理后的靈芝粉降至室溫時(shí)，將稱取好的靈芝粉過80目篩，紫外照射35min，按料液比 1:15加入適量的緩沖液（pH= ） ，% 的纖維素酶，纖維素酶降解80分鐘，然后按照上述提取工藝流程得到靈芝粗多糖，計(jì)算得率，考察烘烤溫度與靈芝多糖提取率之間的關(guān)系。(2)物料粒度對(duì)（酶法提取）靈芝多糖提取率之間的關(guān)系 [30~31] g，將其置于250 mL錐形瓶中，然后將盛有物料的錐形瓶放入烘箱設(shè)備中適當(dāng)?shù)臏囟群婵疽欢〞r(shí)間，取出錐形瓶，處理后的靈芝粉降至室溫時(shí)，將稱取好的靈芝粉分別通過（50目，60目，80目，100目，150目）的目篩，紫外線下照射35 min，然后將通過不同大小目篩的靈芝粉分別用標(biāo)記好的錐形瓶裝按料液比1:15加入適量的緩沖液（pH= ） ，% 的邵陽學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）8纖維素酶，纖維素酶降解80分鐘，然后按照上述提取工藝流程得到靈芝粗多糖，計(jì)算得率，探究物料粒度對(duì)靈芝多糖的提取率的影響。(3) 紫外線的照射時(shí)間與（酶法提取）靈芝多糖提取率之間的關(guān)系 g，將其置于250 mL錐形瓶中，然后將盛有物料的錐形瓶放入烘箱設(shè)備中適當(dāng)?shù)臏囟群婵疽欢〞r(shí)間，取出錐形瓶，將處理后的盛有靈芝粉的錐形瓶降至室溫，然后將處理后的并稱取好的靈芝粉過最佳的目篩，將錐形瓶放于紫外線下照射（25 min， 30 min，35 min，40 min，45 min） ，然后將樣品取出，按料液比1:15加入適量的緩沖液（pH=） ， %的纖維素酶，纖維素酶降解80分鐘，然后按照上述提取工藝流程得到靈芝粗多糖，計(jì)算得率，探究紫外照射時(shí)間與靈芝多糖的提取率之間的關(guān)系。 正交試驗(yàn)方案設(shè)計(jì) 以單因素試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，以靈芝多糖提取率為主要考察目標(biāo), 以烘烤溫度、物料粒度、紫外線照射時(shí)間作為考察的 3 個(gè)因素，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)。 檢測(cè)方法 繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法（1）配制葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液 精確數(shù)量的葡萄糖 25 毫克,添加一定量的水溶解,然后到