【正文】 祝母校日漸輝煌！ 致謝人： 2022 年 5 月 20 日。非常感謝劉老師的耐心指導(dǎo)，此外，本論文的完成還要感謝任光云老師、曾祥燕老師、邱海洪老師以及 等同學(xué)對我做試驗(yàn)期間給予的照顧和幫助。從選擇實(shí)驗(yàn)題目、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、撰寫論文和報(bào)告及修改格式到最終定稿，都不能離開劉老師的嚴(yán)格的指導(dǎo)和幫助。但是伴隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，相信會有更多高新的技術(shù)用于靈芝多糖的提取和分離，靈芝的應(yīng)用價(jià)值也會越來越具有前景。邵陽學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）175 展 望近年來，國內(nèi)外對于靈芝多糖的提取和分離也做了大量的研究，取得了驕人的成績，也出現(xiàn)了一些有關(guān)采用微波輔助提取法，酶法提取，超聲波提取等新方法的文獻(xiàn)資料，但是新提取方法的生產(chǎn)設(shè)備昂貴，工藝技術(shù)復(fù)雜。所以我們可以考慮用其他的有效提取法來代替原有的提取法，近年來半仿生提取法逐漸活躍在藥學(xué)界的視野，半仿生提取法是根據(jù)藥物的有效成分由未知到已知的實(shí)現(xiàn)，比較符合靈芝多糖提取的初衷,都是由結(jié)果出發(fā)，逆向思維，將藥物有整體和分子相結(jié)合,并且能夠建立模擬口服藥物和藥物流經(jīng)腸胃的運(yùn)轉(zhuǎn)過程，具有很強(qiáng)的臨床性。4 結(jié) 論 經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果表明，采用優(yōu)化工藝條件后的酶法提取靈芝多糖方法提取靈芝粉中的靈芝多糖，最佳實(shí)驗(yàn)條件為：紫外照射時(shí)間35分鐘，烘烤溫度75℃，物料粒度80目，靈芝多糖的得率達(dá)到 %。取相同的 靈芝粉，分成 3 份，按優(yōu)化后的工藝組合條件進(jìn)行熱水提取靈芝多糖，實(shí)驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)結(jié)果見表 。 因素 偏差平方和 自由度 F 比 F 臨界值 顯著性烘烤溫度 2 F()=物料粒度 2 F()=紫外線照射時(shí)間 2 誤差 2從表 中同樣也可以得出：各因素影響的順序是：C(紫外線照射時(shí)間) B(物料粒度) A(烘烤溫度)D(實(shí)驗(yàn)誤差) 優(yōu)化工藝條件的確定由表 和表 可知 C2B2A1（B 2C2A1）組合在直觀分析表中能夠得到證明并且多糖得率最高，符合實(shí)驗(yàn)要求，不需要追加驗(yàn)證試驗(yàn)。從正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出：最佳組合為 B2C2A1，即紫外線照射時(shí)間 是 35 分鐘，物料粒度是 80 目，烘烤溫度是 75℃。 因素水平表因素水平與編碼試驗(yàn)因素1 0 1烘烤溫度 A(℃) 75 80 85物料粒度 B（目） 60 80 100紫外線照射時(shí)間（min） 30 35 40 直觀分析表試驗(yàn) 物料粒度序列烘烤溫度（ ℃） （目）紫外照射時(shí)間（ min） 空列多糖得率 (%) 1 1（75） 1（60） 1（30） 1 2 1（75） 2（80） 2（35） 2 3 1（75） 3（100） 3（40） 3 4 2（80） 1（60） 2（35） 3 5 2（80） 2（80） 3（40） 1 6 2（80） 3（100） 1（30） 2 7 3（85） 1（60） 3（40） 2 8 3（85） 2（80） 1（30） 3 9 3（85） 3（100） 2（35） 1 均值 1 均值 2 均值 3 極差 　觀察分析表 可知： 主　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　次 C(紫外線照射時(shí)間) B(物料粒度) A(烘烤溫度) D(實(shí)驗(yàn)誤差)即 C(紫外線照射時(shí)間) B(物料粒度) A(烘烤溫度) D (實(shí)驗(yàn)誤差)。 正交試驗(yàn)結(jié)果分析 正交試驗(yàn)結(jié)果直觀分析用烘烤溫度、物料粒度、紫外線的照射時(shí)間作為本次實(shí)驗(yàn)的 3 個(gè)考查因素，邵陽學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）14按 L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，見表 。分析討論出現(xiàn)這種情況的可能原因是，紫外線能夠殺死靈芝粉表面附著的微生物，隨著紫外線照射時(shí)間的不斷增加，靈芝粉表面的微生物被滅菌徹底，有利于多糖溶出的，多糖得率升高；當(dāng)紫外線照射時(shí)間繼續(xù)增加時(shí)，多糖得率趨于平緩，原因可能在于靈芝粉表面的微生物已經(jīng)全部滅菌，已經(jīng)趨于飽和亦或者靈芝子實(shí)體自身結(jié)構(gòu)被破壞失活了，多糖得率變化甚微。 紫外照射時(shí)間與靈芝多糖提取率的關(guān)系表 紫外照射與靈芝多糖提取率關(guān)系表紫外線照射時(shí)間（min）25 30 35 40 45A1 邵陽學(xué)院 2022 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）13A2 A3 OD 平均值 靈芝多糖得率（% ） 圖 紫外照射時(shí)間與靈芝多糖提取率關(guān)系圖根據(jù)測定結(jié)果見表 ，縱坐標(biāo)為靈芝粉中的靈芝多糖提取率，以紫外線照射時(shí)間為橫坐標(biāo)作出相應(yīng)曲線（圖 ） 。通過分析曲線，選取 3 個(gè)較好的時(shí)間水平。但是不斷提高的的烘烤溫度沒有利于靈芝多糖的溶出，反而具有一定的抑制作用，而且，烘烤溫度不斷增大則對靈芝多糖的生理活性有非常不利的影響，可能還會溶出其他與試驗(yàn)無關(guān)成分，增加后續(xù)分離操作的難度，因此，最佳烘烤溫度應(yīng)該選擇80℃較好。觀察分析（圖 ）曲線圖得知：多糖得率隨烘烤溫度的上升存在一個(gè)最大值 80℃。分析圖可以得出結(jié)果，在 20～160ug 范圍內(nèi)，葡萄糖的質(zhì)量與靈芝多糖的吸光度值具有一定的相關(guān)線性關(guān)系。3 結(jié) 果 與 分 析 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制圖 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線用苯酚硫酸法測定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值（OD 值），并用其在490nm 處測得的吸光度值（OD 值）為縱坐標(biāo)，用葡萄糖的質(zhì)量數(shù)為橫坐標(biāo)，利用 EXCEL 繪制葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（圖 ）。計(jì)算見公式 。 （2）靈芝多糖含量的測定首先提取粗多糖與純凈水反復(fù)溶解并定容至 100 毫升,然后稀釋到一定濃度,取稀釋后的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 1 毫升,用于顏色反應(yīng)、OD 值在 490nm。用移液器移取 mL 靈芝多糖試液，然后遵循葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制步驟進(jìn)行顯色反應(yīng)，用紫外分光光度計(jì)測其在 490 nm 處的OD 值，并且從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的圖中求出供試液的葡萄糖質(zhì)量 M2，換算因素公式 f=M1/M2(M1 為供試液中多糖的實(shí)際質(zhì)量 50 mg，M 2 為測量出的供試液的葡萄糖質(zhì)量） [25]。最后繪圖計(jì)算可以得到線性方程。 配制 5%的苯酚溶液 精確稱量 5 g 苯酚，用容量刻度為 100ml 的移液管（或滴定管）量取 95 mL 的水加入苯酚中，均勻連續(xù)的攪拌，使苯酚完全溶解后，將配置好的溶液轉(zhuǎn)入棕色細(xì)口瓶中，放到冰箱備用。 檢測方法 繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法（1）配制葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液 精確數(shù)量的葡萄糖 25 毫克,添加一定量的水溶解,然后到 250 毫升容量瓶,如果水在容量瓶沒有達(dá)到容量大小規(guī)模滴水,搖勻配成標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。(3) 紫外線的照射時(shí)間與（酶法提?。╈`芝多糖提取率之間的關(guān)系 g，將其置于250 mL錐形瓶中，然后將盛有物料的錐形瓶放入烘箱設(shè)備中適當(dāng)?shù)臏囟群婵疽欢〞r(shí)間，取出錐形瓶，將處理后的盛有靈芝粉的錐形瓶降至室溫，然后將處理后的并稱取好的靈芝粉過最佳的目篩，將錐形瓶放于紫外線下照射（25 min， 30 min，35 min，40 min，45 min） ，然后將樣品取出，按料液比1:15加入適量的緩沖液（pH=） ， %的纖維素酶，纖維素酶降解80分鐘，然后按照上述提取工藝流程得到靈芝粗多糖，計(jì)算得率，探究紫外照射時(shí)間與靈芝多糖的提取率之間的關(guān)系。表 試驗(yàn)用主要儀器名字 規(guī)格 產(chǎn)地紫外 可見光分光光度計(jì) GS53 上海天呈醫(yī)流科技股份有限公司標(biāo)準(zhǔn)篩 JKWQ61M/SZZ 北京中科路達(dá)試驗(yàn)儀器有限公司電子天平 AR5120 上海臺之衡工貿(mào)有限公司生物安全柜 81M/AC24S1 廣州安邦生物科技有限公司高速冷凍離心機(jī) Evolution RC 美國 Thermo Scientific 公司電熱鼓風(fēng)干燥箱 DHG91401 北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司真空干燥箱 DZF6051 上海壘固儀器有限公司中藥粉碎機(jī)