甘草酸的純化工藝研究分析(編輯修改稿)
2025-07-24 15:30 本頁面
【文章內容簡介】 于溫包上加熱5分鐘，然后趁熱過濾，得到紅棕色溶液作為原料對照品。配制展開劑正丁醇：水：冰醋酸=4:2:1和4:1:1[21]，取對照品和標準品點板，用兩種展開劑展開，在紫外燈光下觀察。展開劑為正丁醇：水：冰醋酸=4:2:1的硅膠板有拖尾現象，展開時間約為2小時；展開劑為正丁醇：水：冰醋酸=4:1:1的硅膠板分離較好。 HPLC法色譜條件為流動相：甲醇：%mol/L醋酸銨：冰醋酸=67:33:1檢測波長為254nm[22]，,柱溫維持在2830℃。先由標準品進樣，獲得甘草酸的保留時間。再用處理過的原料對照品進樣，與標準品譜圖對比獲得原料中甘草酸的含量。結果發(fā)現在甘草酸的高效液相色譜上，鄰近甘草酸的位置存在許多雜質峰，TLC法得到的點不能說明只存在甘草酸，還可能存在與甘草酸類似的雜質，該方法不能用于甘草酸的定性分析。所以只選用HPLC法進行檢測。 流動相的選擇根據文獻記載，甘草酸高效液相色譜使用的流動相主要分為兩類，一類為乙腈體系，即乙腈：%磷酸=35：65；另一類為甲醇體系，即甲醇：%mol/l乙酸銨：乙酸=67：33：1[23]。我們將兩種體系都用于高效液相色譜的檢測，發(fā)現乙腈體系峰形較好，雜質峰較少，保留時間較長，出峰時間較晚，但是由于乙腈毒性較大，價格較貴，與甲醇換相時易產生氣泡阻塞泵體。甲醇體系的保留時間較短，峰形較乙腈體系差，但雜質峰較多，更能說明樣品中甘草酸的實際含量，且較短的保留時間有利于縮短檢測時間增加檢測效率。在流動相為甲醇：%mol/l乙酸銨：乙酸=67：33：1中，甘草酸峰值與雜質峰未完全分開，積分結果不準確。所以，我們調整了流動相比例，甲醇：%mol/l乙酸銨：乙酸=60：40：1，保留時間變長，甘草酸峰值與雜質峰的分離不理想。將流動相比例調整為甲醇：%mol/l乙酸銨：乙酸=65：35：1，保留時間相應變短，用原料進樣，甘草酸峰附近未發(fā)現雜質峰。因此，確定高效液相色譜的流動相為甲醇：%mol/l乙酸銨：乙酸=65：35：1。 樹脂種類的選擇準確稱取六種大孔樹脂（ABADS1D40XD10NKA）各5g，分別置于100ml錐形瓶中，加入25%甘草酸原料30ml，濃度10mg/ml，靜置24小時，期間搖動幾次，取少量上層清液檢測甘草酸含量，結果發(fā)現六組實驗均未檢測到甘草酸。繼續(xù)向錐形瓶中加入25%甘草酸原料20ml，濃度10mg/ml，靜置24小時，期間搖動幾次，取少量上層清液檢測甘草酸含量，發(fā)現 ABD40XNKA中均檢測到甘草酸，在ADS17和D101中則均未檢測到甘草酸。再次向錐形瓶中加入25%甘草酸原料20ml，濃度10mg/ml，靜置24小時，期間搖動幾次，取少量上層清液檢測甘草酸含量，在ADS17和D101中依然未檢測到甘草酸。最后向ADS17和D101組的錐形瓶中加入25%甘草酸原料20ml，濃度10mg/ml，靜置24小時，期間搖動幾次，取少量上層清液檢測甘草酸含量，%，%，可認為這兩種樹脂已經達到泄漏點。%圖1 ADS17泄漏點HPLC圖%圖2 D101泄漏點HPLC圖因此，選擇ADS17和D101樹脂進行動態(tài)實驗。 甘草酸的動態(tài)吸附 ADS17動態(tài)吸附實驗設定pH（、）、原料流速（1BV/h、2BV/h、3BV/h）、上樣濃度（5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml）為實驗因素，繪制三因素三水平正交實驗表。表1：ADS17動態(tài)吸附正交試驗因素水平表序號ApHB原料流速（BV/h）C上樣濃度（mg/ml）11522103315取ADS17樹脂540ml，平均裝入9根層析柱中，即填料體積為60ml(1BV)。配制各種pH和濃度的原料液3BV，以設定條件進行實驗，用一組13ml西林瓶盛接原料流出液，檢測各瓶中甘草酸含量，確定各組實驗的泄漏點，并計算吸附量。表2：ADS17動態(tài)吸附的正交試驗表實驗號ABC吸附量（mg）1151015225156533536541101770521072063101180711510958215129093151485表3：ADS17動態(tài)正交試驗結果總結表項目pH項原料流速項上樣濃度項K1（mg）348538802936K2（mg）482035754045K3（mg）2171302138701（mg）116212939792（mg）1607119113483（mg）72410071295R（mg）883286369對于該動態(tài)吸附實驗，其中吸附量計算公式： （1）C——上樣濃度，單位mg/mln——泄漏點所在瓶號（13為每個西林瓶的體積）計算舉例：在第4組實驗中，由HPLC檢測得出第9瓶出現泄露，則在第4組的實驗條件下，甘草酸的吸附量為（60+139）10=1770mg其它實驗組的吸附量以同樣的方法計算。當pH=5時，三組吸附量的加和為K1=1015+1180+1290=3485mg，而1= K1/3=1162mg。同理可以計算出正交表中的其他各因素水平下的吸附量的總和K及平均值。pH因素下的極差計算公式： （2）即R =1607724=883。同理以同樣的方法可計算原料流速和上樣濃度的極差。因此在三個影響因素中，pH是最主要的影響因素，其次為原料流速，上樣濃度的影響最小，最佳條件組合為A2B2C2，即ADS17樹脂選定的最佳實驗條件為pH=，原料流速2BV/h，上樣濃度C=10mg/ml。 D101動態(tài)吸附實驗設定pH（、）、原料流速（、）、上樣濃度（8mg/ml、10mg/ml、12mg/ml）為實驗因素，繪制三因素三水平正交實驗表。表4：D101動態(tài)吸附正交試驗因素水平表序號ApHB原料流速（BV/h）C上樣濃度（mg/ml）18210312取D101樹脂540ml，平均裝入9根層析柱中，即樹脂床體積為60ml(1BV)。配制各種pH值和濃度的原料液5BV，以設定條件進行實驗，收集原料流出液，檢測甘草酸含量，確定各組實驗的泄漏點[24]。表5：D101動態(tài)吸附的正交試驗表實驗號ABC吸附量（mg）181728228193638204841022905210241061019007122280821219689121968表6：D101動態(tài)正交試驗結果總結表項目pH項
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