【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 級(jí)糖果中卻具有增強(qiáng)風(fēng)味的作用。如柑橘汁中的橘皮苷是其特征的黃酮化合物，用其可以鑒別外觀和風(fēng)味類(lèi)似柑橘汁的偽劣產(chǎn)品。 用從茶葉、竹葉中所提取的黃酮類(lèi)混合物配制成的可樂(lè)型飲料及口香糖均具有一種天然的淡淡茶香和竹香，生津止渴，口感甚佳，具有明顯的除口臭、去煙味、蒜味及口腔滅菌功效，且成本比一般可樂(lè)飲料及一般口香糖低。（3）天然色素近20年來(lái)，發(fā)現(xiàn)一些合成色素都有不同程度的毒性，其應(yīng)用受到一定限制，因而從自然界尋找合成色素的代用品——天然食用色素的研究倍受各國(guó)重視。黃酮類(lèi)化合物多呈黃色，同時(shí)又具有很寬的溶解特性，既有水溶性的黃酮類(lèi)化合物，又有脂溶性的黃酮類(lèi)化合物，所以完全可以根據(jù)食品加工的需要而選擇合適的黃酮類(lèi)化合物作為著色劑。（4）黃酮類(lèi)化合物功能食品近年來(lái)上市的保健產(chǎn)品中，很大一部分其中主要功效成分都屬于黃酮類(lèi)化合物，涉及功能食品的許多方面，如防衰、防癌、提高免疫力、降脂、降壓食品等，產(chǎn)品外觀覆蓋到液體、固體和半流體等多種形式，如銀杏葉袋泡茶、苦芥速食粉、山楂葉沖劑、蜂膠膠囊、黃酮類(lèi)口香糖、黃酮類(lèi)牙膏、沙棘汁等，其中以蜂膠、銀杏、山楂、沙棘、蕎麥、柑橘皮、茶葉等黃酮類(lèi)化合物加工品為最多，占黃酮類(lèi)化合物功能食品的80％以上。黃酮類(lèi)化合物無(wú)毒，廣泛存在于植物界中，人體不能合成，而且在體內(nèi)代謝很快。人體攝取黃酮類(lèi)化合物主要來(lái)自于飲料、茶、咖啡、可可、果酒（尤其紅葡萄酒）和啤酒，甚至醋都是其重要來(lái)源，占總攝入量的25％30％。關(guān)于其日攝取量，目前尚無(wú)定性結(jié)論，美國(guó)攝取量達(dá)1g/d，荷蘭對(duì)槲皮素、山萘酚、高粱黃酮、葉黃酮、楊梅黃酮的總攝取量達(dá)23mg/d，但目前的攝取水平遠(yuǎn)未達(dá)到有益的攝取量。近年來(lái)雖然分離、提取了大量的新黃酮類(lèi)化合物，掀起了黃酮類(lèi)化合物的研究熱潮，但對(duì)其吸收、代謝機(jī)制、活性機(jī)理，具有生理功能的活性基團(tuán)、穩(wěn)定性等方面仍缺乏全面的認(rèn)識(shí)，因此應(yīng)加強(qiáng)此方面的工作，弄清其生理功能從而進(jìn)行有效地分離和提取，為生物類(lèi)黃酮在醫(yī)藥、食品工業(yè)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)，加速植物資源的有效開(kāi)發(fā)利用，生產(chǎn)出具有治療和預(yù)防多種疾病的藥品和天然保健品。 黃酮類(lèi)化合物應(yīng)用中今后應(yīng)解決的問(wèn)題近年來(lái)對(duì)黃酮類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)、功能等都有了深刻的了解，并應(yīng)用各種高新技術(shù)從各種植物中分離、提取了大量的黃酮類(lèi)化合物，掀起了黃酮類(lèi)化合物的研究熱潮，但對(duì)其吸收、代謝機(jī)制、活性機(jī)理，具有生理功能的活性基團(tuán)結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性等方面仍缺乏全面的認(rèn)識(shí)，因此應(yīng)加強(qiáng)此方面的工作。另外，隨著研究的加深，開(kāi)發(fā)出了一大批黃酮類(lèi)藥物與食品，但其結(jié)構(gòu)復(fù)雜，并且作用位點(diǎn)較多，因而對(duì)一些病癥缺乏針對(duì)性和選擇性，限制了其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用，這也是今后研究者所要解決的重要問(wèn)題?？傊?，黃酮類(lèi)化合物作為一類(lèi)生物活性很強(qiáng)的化合物，具有眾多優(yōu)點(diǎn)，其在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域中具有廣闊的應(yīng)用前景。 麥胚黃酮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用研究進(jìn)展動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis AS)是心腦血管病的主要病理學(xué)基礎(chǔ)，是一種由多因素誘導(dǎo)的復(fù)雜病變，其中血脂代謝異常和氧化損傷與AS的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。近年來(lái)，隨著對(duì)AS的深入了解，植物來(lái)源的抗氧化物的研究開(kāi)發(fā)及其在抗AS中的應(yīng)用已取得很大進(jìn)展。麥胚是面粉加工業(yè)的副產(chǎn)品, 麥胚中色素的主要成分是黃酮類(lèi)化合物, 黃酮具有多種生理活性，能捕捉生物體內(nèi)膜脂質(zhì)過(guò)氧化自由基，捕捉生物體內(nèi)的超氧化物及氧離子，切斷生物體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化連鎖反應(yīng)，螯合金屬離子使之純化,阻止脂質(zhì)氧化酶的作用，有持續(xù)抗氧化作用。另外，對(duì)冠狀動(dòng)脈血管、下肢等血管有擴(kuò)張及調(diào)節(jié)作用，可作血管保護(hù)劑有防止動(dòng)脈硬化、栓塞等效果。所以本文綜述了近年麥胚黃酮（Flavonoids of Wheatgem）抗AS的研究進(jìn)展。動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是許多心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)，發(fā)病率及死亡率極高。其主要表現(xiàn)為動(dòng)脈內(nèi)膜形成纖維性(纖維脂性,動(dòng)脈粥樣)斑塊。AS的發(fā)病原因很多，病程復(fù)雜。其形成原因主要是由于血脂代謝異常，脂質(zhì)過(guò)氧化損傷、動(dòng)脈壁受損等。血漿脂質(zhì)超出正常范圍稱(chēng)為高脂血癥或高脂蛋白血癥，是體內(nèi)脂質(zhì)代謝障礙的表現(xiàn)，為動(dòng)脈弱樣病變的重要原因之一。大量資料表明，AS的發(fā)生與脂質(zhì)過(guò)氧化的損傷有關(guān)。機(jī)體氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失去平衡時(shí)就會(huì)產(chǎn)生大量的自由基，血清中活性氧自由基導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化而產(chǎn)生大量的丙二醛(MDA)可能與LDL結(jié)合成一種對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有較強(qiáng)的損傷作用的復(fù)合物，當(dāng)這種復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞，使細(xì)胞內(nèi)膽固醇堆積并轉(zhuǎn)變成泡沫細(xì)胞，形成AS早期病變。 麥胚黃酮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)理（1）減少主動(dòng)脈病變斑塊程度汪敏等用高膽固醇飼養(yǎng)家兔60天，取主動(dòng)脈鏡檢，出現(xiàn)明顯的AS，動(dòng)脈壁表面粗糙，大量泡沫細(xì)胞形成，有變性、壞死及纖維組織增生出現(xiàn)。泡沫細(xì)胞是脂質(zhì)沉積的主要部位，脂質(zhì)的大量積聚使細(xì)胞器移位，進(jìn)而使其代謝障礙而壞死。麥胚黃酮組鏡檢后發(fā)現(xiàn)AS病變有不同程度的減輕，并未見(jiàn)泡沫細(xì)胞?？梢?jiàn)，麥胚黃酮能減少脂質(zhì)沉積和泡沫細(xì)胞的出現(xiàn)以抑制AS斑塊形成。（2）降脂作用高血脂癥與AS的發(fā)生密切相關(guān)，高膽固醇、高LDL、高甘油三酯、低HDL是AS的主要原因。國(guó)內(nèi)外動(dòng)脈粥樣硬化和血脂的流行病學(xué)調(diào)查及近10年來(lái)開(kāi)展的調(diào)脂藥物應(yīng)用的多中心多病例數(shù)的觀察結(jié)果顯示：高TC、高HDLC與臨床心血管病事件發(fā)生率密切相關(guān)。，發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)性上升20%，HDLC降低1g/L，發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)性增加2倍。TG2mmol/L并伴有HDLC降低()，則動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)性增加，TC每降低1%，動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)性可減少2%，TC增高會(huì)損害動(dòng)脈內(nèi)皮功能，使動(dòng)脈粥樣硬化易患率增加；TC明顯過(guò)高()者動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病與死亡率顯著增高。麥胚黃酮對(duì)血脂代謝的影響展示了其防治AS的作用。Bordia等早在20世紀(jì)70年代就發(fā)現(xiàn)黃酮類(lèi)化合物對(duì)營(yíng)養(yǎng)性高血脂癥和血液凝固有非常明顯的保護(hù)作用。黃酮類(lèi)化合物能夠明顯阻止高膽固醇飼料所致的家兔高脂血癥,明顯降低血清膽固醇，血漿纖維蛋白原的升高，明顯降低低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白的含量，提高高密度脂蛋白含量，阻止B2脂蛋白上升和A2脂蛋白降低，從而維持B/A值于正常水平，其作用明顯優(yōu)于安妥明組。Balkan等報(bào)道將實(shí)驗(yàn)家兔分為普通飼料喂養(yǎng)之對(duì)照組、高膽固醇飼料喂養(yǎng)組和高膽固醇喂養(yǎng)加麥胚組，表明能降低血漿膽固醇和三酰甘油，并能改善因高膽固醇飼料誘發(fā)的氧化刺激及膽固醇在大動(dòng)脈內(nèi)皮的蓄積。國(guó)內(nèi)學(xué)者高希寶等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)麥胚對(duì)改善血清中游離脂肪酸組成，降低膽固醇含量有顯著作用。于長(zhǎng)青等對(duì)用高膽固醇飼料飼養(yǎng)的小鼠形成高脂對(duì)照組，同時(shí)給予麥胚黃酮，觀察麥胚黃酮對(duì)高脂對(duì)照組小鼠膽固醇代謝和膽固醇在大動(dòng)脈蓄積的影響，結(jié)果表明麥胚黃酮組TC、TG極顯著低于高脂對(duì)照組(P),HDLC極顯著高于高脂對(duì)照組(P)。陸旭等在應(yīng)用麥胚油丸為高血脂病人的服用試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其可選擇性地升高高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)，升高HDLC的作用(%)比較明顯。還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)麥胚具有延緩脂肪肝發(fā)生的作用，喂高脂肪飼料的同時(shí)給予麥胚，有顯著阻止肝中膽固醇和脂肪升高作用。文獻(xiàn)表明，高脂型的AS主要與HDL和LDL水平有關(guān)，HDL可將體外膽固醇運(yùn)送到肝臟內(nèi)，因而可降低血液中膽固醇的濃度，HDL能夠轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)脈壁膽固醇到肝臟分解為膽酸,是有效的抗AS因子。而影響HDL轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇的主要因素是卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(LCAT)活性，LCAT能夠使血中膽固醇催化生成膽固醇酯轉(zhuǎn)入HDL核心部分而轉(zhuǎn)動(dòng)，HDL的含量反映了從心腦血管系統(tǒng)運(yùn)送膽固醇至肝臟代謝的活躍程度。綜上所述可表明麥胚黃酮抗AS的機(jī)制與降血脂有關(guān)。（3）抗氧化作用黃酮類(lèi)化合物清除氧自由基的作用機(jī)制途徑：通過(guò)抗氧化劑的還原作用直接給出電子而清除自由基，同時(shí)能顯著提高超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱苷肽過(guò)氧化物酶(GSHPx)活性并對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)的生成有明顯的抑制作用；通過(guò)抗氧化劑對(duì)金屬離子的絡(luò)合，降低若干需金屬離子催化的反應(yīng),從而間接實(shí)現(xiàn)抗氧化作用。目前研究已證實(shí)，SOD、GSHPX是體內(nèi)最重要的抗氧化酶, 分別具有清除體內(nèi)過(guò)量的自由基和抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的作用。在機(jī)體抗自由基損傷中起著重要作用。Thomas等報(bào)道GSHPX對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞防御氧化損傷起到重要作用。于長(zhǎng)青等研究發(fā)現(xiàn)麥胚黃酮可顯著增強(qiáng)大鼠血液中SOD、GSHPX活性,提示麥胚黃酮可能通過(guò)提高機(jī)體抗氧化酶類(lèi)的生物合成而增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力,從而有效地防止的發(fā)生。徐貴發(fā)等實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示麥胚提取的黃酮類(lèi)化合物能增加SD大鼠GSHPx酶活性,降低體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化水平。脂質(zhì)過(guò)氧化物(lipid peroxidase,LPO)能通過(guò)多種途徑促進(jìn)的AS發(fā)生和發(fā)展， LPO可造成內(nèi)皮細(xì)胞受損，平滑肌細(xì)胞壞死,最終導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變。它的中間產(chǎn)物丙二醛(MDA)可改變LDL的性質(zhì)，導(dǎo)致大量的膽固醇堆積于平滑細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，使血脂升高。于長(zhǎng)青等報(bào)道高脂血癥大鼠在給予麥胚黃酮灌胃后，血清和組織中LPO含量明顯降低，說(shuō)明了麥胚黃酮具有抗氧自由基的作用,并使血脂降低。Ross等認(rèn)為L(zhǎng)PO對(duì)膽固醇酯酶活性的抑制，有助于TC的沉積，促進(jìn)AS的形成和發(fā)展。而麥胚黃酮能顯著降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清和組織中LPO含量清除過(guò)多活性氧自由基。氧化修飾低密度脂蛋白(OXLDL)在AS的發(fā)生與發(fā)展中起著重要作用。有關(guān)研究表明在AS損害部位存在OXLDL抗原決定簇，而正常動(dòng)脈壁中卻沒(méi)有，麥胚黃酮具有抗氧化作用，能減少OXLDL的生成?？梢?jiàn)，麥胚黃酮作為一種強(qiáng)抗氧化劑，通過(guò)減少OXLDL的生成，增加SOD合成及活性，清除氧自由基而降低AS的發(fā)生。 前景展望由動(dòng)脈粥樣硬化(AS)所引起的心血管疾病是導(dǎo)致全球人口死亡的主要原因之一，故干預(yù)的治療和預(yù)防尤為重要。由于有療效穩(wěn)定、毒副作用小、資源豐富且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠等特點(diǎn)，黃酮類(lèi)化合物在營(yíng)養(yǎng)保健和醫(yī)藥方面的作用已備受重視。我國(guó)有著麥胚豐富的植物資源優(yōu)勢(shì)，而黃酮的提取工藝也在日益優(yōu)化，過(guò)程也越來(lái)越化繁為簡(jiǎn)。這一切也預(yù)示有著降血脂、抗氧化功效的麥胚黃酮在抗動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用中具有廣闊的應(yīng)用前景，但在揭示其抗AS機(jī)制的生化學(xué)方面有待于進(jìn)一步的研究。 研究的目的意義麥胚是面粉工業(yè)的副產(chǎn)品，是小麥籽粒的營(yíng)養(yǎng)寶庫(kù)和精華，麥胚中色素的主要成分是黃酮，它能捕捉生物體內(nèi)膜烷過(guò)氧化自由基，切斷生物體內(nèi)導(dǎo)致人體衰老與疾病的脂質(zhì)過(guò)氧化連鎖反應(yīng)，阻止脂質(zhì)氧化酶的作用，其持續(xù)抗氧化作用效果強(qiáng)于維生素E。因此，加速這一新型保健食品資源的開(kāi)發(fā)研究，形成消費(fèi)者需求的系列保健產(chǎn)品，不僅有著較高的營(yíng)養(yǎng)保健效果，而且將會(huì)帶來(lái)極好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。本研究以麥胚為原料，利用酶法技術(shù)提取麥胚黃酮；通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)探討了麥胚黃酮在不同氧化體系中的抗氧化作用和降血脂效果。本研究可為開(kāi)發(fā)預(yù)防和治療心腦血管疾病的保健食品奠定理論基礎(chǔ)，為麥胚總黃酮的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供技術(shù)參考和支持。 第二章 麥胚黃酮提取工藝研究黃酮類(lèi)化合物是廣泛存在于自然界的一大類(lèi)化合物。據(jù)統(tǒng)計(jì)目前發(fā)現(xiàn)有6000余種，為天然酚類(lèi)化合物之首。由于這類(lèi)化合物大多呈黃色或淡黃色，因此稱(chēng)為黃酮。此類(lèi)化合物在植物的組織內(nèi)大部分與糖結(jié)合成普存在，少部分以普元形式存在。黃酮類(lèi)化合物是麥胚中主要的生理活性物質(zhì)，能捕捉生物體內(nèi)膜脂質(zhì)過(guò)氧化自由基，捕捉生物體內(nèi)的超氧化物及氧離子，螯合金屬離子使之純化，阻止脂肪氧化酶的作用等。近年來(lái)，不少學(xué)者對(duì)麥胚中黃酮類(lèi)物質(zhì)的提取技術(shù)進(jìn)行了多方面積極和有益的探索，但主要還是集中在對(duì)傳統(tǒng)提取方法的優(yōu)化改良上；酶法（主要是纖維素酶、果膠酶、蛋白酶等及其復(fù)合酶類(lèi)）已逐漸作為提取生物活性成分的新興技術(shù)得到了廣泛的應(yīng)用，然而有關(guān)于酶法技術(shù)在麥胚黃酮類(lèi)物質(zhì)提取中的應(yīng)用鮮見(jiàn)報(bào)道。與傳統(tǒng)提取方法相比，酶法提取具有無(wú)毒性、效率高、反應(yīng)條件溫和及催化活力可被調(diào)節(jié)控制等優(yōu)勢(shì)。因此，本文著重對(duì)纖維素酶輔助提取麥胚總黃酮的工藝進(jìn)行了較詳細(xì)的研究，以期改善傳統(tǒng)溶劑提取法的不足。 實(shí)驗(yàn)材料麥胚，購(gòu)于黑龍江科研所，用烘箱在60～70℃烘干，粉碎過(guò)60目篩備用。 蘆?。褐袊?guó)藥品生物制品檢定所；纖維素酶：北京生化試劑制品廠；鹽酸、硫酸、95％乙醇、冰乙酸、石油醚、甲醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉和三氯化鋁均購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑有限公司。電子天平：Mettler PM460；超臨界液體萃取裝置：HA1215001型，南通市華安超臨界萃取有限公司；旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)儀R200：瑞士BUCHI；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)UV2201：日本島津；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：UV754 上海第三分析儀器廠；酸度計(jì)：PH3C，上海雷磁；微波爐：Galanz WG800DSL20ⅡK6；自動(dòng)氮分析儀342：瑞士BUCHI；電熱恒溫水浴鍋：DH4000型天津泰斯特儀器有限公司；離心機(jī)LD52A：北京醫(yī)用離心機(jī)廠；冰箱：BCD186A/E，合肥榮事達(dá)電冰箱有限公司。 實(shí)驗(yàn)方法麥胚→烘干→粉碎→酶法提取→測(cè)定黃酮得率。稱(chēng)取麥胚4g(6份)，用石油醚浸泡1h，過(guò)濾水洗凈，置于250mL錐形瓶中分別加入不同濃度的乙醇100mL和不同濃度的纖維素酶，調(diào)節(jié)pH值，搖勻，用塑料布封口，水浴加熱40min,離心（3500r/min,15min）,將所得沉淀加入另一錐形瓶中，加入100mL蒸餾水，用塑料布封口，水浴90min, 離心（3500r/min,15min）,合并兩次提取液，濃縮至一定體積后加入80mL95%乙醇，趁熱過(guò)濾，將濾液定容至200mL,。 ，用無(wú)水乙醇溶解，定容至50mL。，，，，分別置于10mL容量瓶中，加入5%nNaNO2 ，靜置6min；然后加入10%Al(NO3)3 ，再靜置6min；最后加入5%NaOH ,搖勻，靜置10min后用蒸餾水定容至刻度，15min后30min內(nèi)在510nm處測(cè)定吸光度A，制定標(biāo)準(zhǔn)曲，得蘆丁含量Y(pg/m1)與吸光度A間的回歸方程。分光光度法受溶液體系影響較大，提取液的濃度、離心分離的效果、固形物的含量都會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果造成很大誤差。所以在測(cè)定前先對(duì)提取液進(jìn)行除雜，然后測(cè)定。取各組不同實(shí)驗(yàn)條件下所得的定容樣液依法顯色，按下式計(jì)算麥胚中總黃酮得率（以蘆丁計(jì)）。 Y(%)= （1）式中Y—黃酮得率；A—樣液的吸光