【文章內(nèi)容簡介】 糖醛，糖醛然后與蒽酮脫水縮合生成的這種物質(zhì)是呈藍綠色的糖醛衍生物，且在625nm處有最大吸收，可溶性糖溶液與它顏色深淺成正比）[5]。使用同一種方法對其他干貨多糖進行了提取及含量測定。再從中選取三種干貨多糖在不同的抗氧化性體系中進行研究，以維生素C為參照，比較他們的抗氧化能力。 此次實驗中選取的七種干貨：木耳，真菌類的一種。種子實體杯狀、耳朵狀、葉狀，邊緣似波浪形，較薄，色澤黑，可以用于防治缺鐵性貧血、延緩衰老。枸杞，味道有點甜，可以明亮眼睛，滋養(yǎng)肝和腎。百合，屬于多年生草本球根植物，基部稍寬，頂部尖，略向內(nèi)彎，無嗅味苦。可以用來降火、潤肺、安神等。海帶，一種大型海藻類的植物之一。曬干后為黑色，含有豐富的礦物質(zhì)、中等的蛋白質(zhì)和多糖。銀耳，真菌界的銀耳目銀耳屬，潔白半透明，曬干后質(zhì)地硬。有補腎美容等作用。紅棗，植物界棗屬，含有豐富的維生素，味甘，有補血抗衰老等功效。茶樹菇，是一種口感極好，富有很高營養(yǎng)價值的食用菌類。曬干后，顏色黃褐，有淺皺紋。 選取的這七種干貨，產(chǎn)量高，價格適中，取材方便，營養(yǎng)價值高，功效多，都有很好的開發(fā)前景。1 材料與方法 實驗材料與試劑 木耳、枸杞、干海帶、干百合、干銀耳、干紅棗、干茶樹菇，均購買于黃山市大潤發(fā)超市。取一定量的干貨樣品于真空烘箱中低溫烘干，用粉碎機粉碎，用40目篩篩取，留著備用。 無水乙醇，鄰苯三酚，雙氧水，鄰菲羅啉，磷酸鹽生理鹽水緩沖溶液（，，溶于800mL蒸餾水中，然后加蒸餾水定容到1L），硫酸亞鐵，葡萄糖為國產(chǎn)分析純，蒸餾水，維生素C溶液，蒽酮硫酸溶液（，加入100mL、質(zhì)量分數(shù)98%的濃硫酸溶液，搖勻，放在棕色試劑瓶中，低溫保存），無水丙酮，TrisHCl（pH=，）緩沖溶液（稱取25gTris試劑溶于蒸餾水中，加8mL濃鹽酸溶液，然后定容至1L，高壓、高溫滅菌后室溫下保存）。 實驗器材 RE52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）、AL104電子分析天平(瑞士梅特勒托利多儀器有限公司）、UV1100紫外可見分光光度計（上海美普達儀器有限公司）、離心機、SHA水浴恒溫振蕩器（江蘇省金壇市醫(yī)療器械有限公司）、PHS3C型pH計（上海天達儀器有限公司）、真空抽濾機、DF101干燥箱、錐形瓶、吸量管(1mL、2mL、5mL）、洗耳球、比色管、容量瓶。 實驗方法 粗多糖提取的方法 多糖的提取一般有超微波輔助法、微波輔助法、酶法、熱水浸提法。本文所用的是熱水浸提法。它的原理是在熱力作用下，細胞的質(zhì)壁分離。水溶劑滲入到細胞質(zhì)、細胞壁中，溶解了液泡里的物質(zhì)，并且通過細胞壁擴散到外部。 取一定量預(yù)處理過的樣品，按1:10的料液比加入95%（V/V）的乙醇，低溫浸泡12h。過濾，濾渣按一定的料液比加入蒸餾水，熱水浴中保溫一定時間。減壓抽濾得到濾液，濾渣二次浸提，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至原來體積的1/4，加入3倍于濃縮液的95%（V/V)乙醇，3℃下放置過夜，密封好，當有粒狀沉淀和絮狀膠狀物產(chǎn)生后，用離心機以30分鐘、3000r/min去上清液，沉淀復溶再離心、抽濾后，用無水丙酮、乙醇多次洗滌，干燥得到樣品的粗多糖提取物，備用。多糖提取率=多糖質(zhì)量/樣品質(zhì)量100% 標準曲線的繪制[6] 先打開紫外分光光度計進行預(yù)熱。 清洗七個比色管，干燥編號備用。，蒸餾水溶解后，完全轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶進行定容。、、、。將七個比色管放在冰水浴中，搖勻。然后將7個比色管放在沸水浴中加熱10分鐘后，取出來，放在盛有自來水的大燒杯中冷卻至室溫。用紫外分光光度計從低濃度到高濃度在625nm波長下，分別測定它們的吸光度。記下數(shù)據(jù)，以吸光度為縱坐標、葡萄糖濃度為橫坐標，用excel繪制葡萄糖溶液的標準曲線，得到相關(guān)系數(shù)和回歸方程。 多糖含量的測定方法 ，三份，蒸餾水溶解后，完全轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中并且搖勻定容。，,將比色管放入冰水浴中，搖勻。然后放在沸水浴中加熱10分鐘，取出，放在乘有自來水的大燒杯中冷卻至室溫。以蒸餾水為參比，迅速用紫外分光光度計在625nm的波長下，測得它的吸光度，然后代入回歸方程求出多糖的濃度，并且算出多糖在樣品粗提取物中的含量。 多糖對羥基自由基(OH）消除作用的測定方法[7] 本文采用的是用Fenton法反應(yīng)形成羥基自由基的體系。Fe2+ 與H2O2 在Fenton反應(yīng)中產(chǎn)生羥基自由基的方程式如下：===向該反應(yīng)體系中加入鄰菲羅啉，由于羥基自由基活性很高，能夠很有效的被鄰菲羅啉所結(jié)合，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)在510nm處有最大吸收。當加入多糖溶液后，多糖溶液就會與羥基自由基結(jié)合，減少了鄰菲羅啉與羥基自由基結(jié)合而生成的有色物質(zhì)，減弱了在510nm處的吸光值。通過測定添加了多糖溶液的體系的吸光度來判斷它的消除能力。方法如下： ，用蒸餾水溶解后，在100mL的容量瓶中定容，、。配制維生素C溶液用同樣的方法。 取6支干燥且干凈的比色管，依次編號、磷酸鹽生理鹽水（pH=），、、（注：1號為空白對照，用蒸餾水代替多糖溶液）。，迅速搖勻，%，將五支比色管放在38℃的熱水浴中反應(yīng)1小時，然后迅速測定各管在510nm下的吸光度。再將維生素C藥片研磨，稱取，配制同濃度的維生素C溶液作對比。清除率的計算：OH清除率=(A0A樣品)/A0 100% 多糖對超氧自由基（O2）消除作用的測定方法[8] 對超氧陰離子清除采用的是鄰苯三酚自氧化法。鄰苯三酚可以在堿性條件下發(fā)生自身氧化生成超氧自由基（O2）、以及紅色中間物質(zhì)。超氧自由基能夠加速鄰苯三酚的氧化速率，如果有清除劑的加入，會消除O2 ，減少了紅色中間產(chǎn)物的積累，降低了在310nm處的吸光度。通過測定加入多糖溶液的體系的吸光度來判斷它的消除能力。方法如下： 取6支干燥且干凈的比色管，依次編號、TrisHCl（pH=，），放在25℃的熱水浴中25分鐘，、、（注：1號管為空白對照，用蒸餾水代替多糖溶液）。迅速加入在25℃熱水浴中預(yù)熱20分鐘的鄰苯三酚（），搖勻。放置在20℃水浴槽中反應(yīng)5分鐘，（8mL/L）溶液結(jié)束反應(yīng)。將各管在310nm處測定它的吸光度，再將維生素C藥片研磨，稱取，配制同濃度的維生素C溶液作對比。清除率計算：O2 清除率=(A0A樣品)/A0 100% 2 結(jié)果與分析 干木耳粗多糖提取的條件優(yōu)化及含量的測定 多糖在熱水提取的過程中，有許多因素會影響多糖提取率。本文針對浸提料液比、溫度、時間這三個條件進行探究[9]。 浸提時間對多糖提取的影響 固定溫度為85℃、料液比1:30不變。時間為，結(jié)果如下：表21 浸提時間對多糖提取率的影響時間/h12 34提取率/% 由結(jié)果得出，隨著時間的增