【文章內(nèi)容簡介】 合及關(guān)節(jié)強(qiáng)直等并發(fā)癥,且藥源廣，價廉方便，不良反應(yīng)小，很值得推廣?！? 臨床研究表明，虎杖治療急性上消化道出血，具有顯著療效，總有效率為%,其療效明顯優(yōu)于西藥對照組，具顯著性差異(P)，且止血時間較短。機(jī)理:虎杖可增加血小板和纖維蛋白原，縮短凝血時間、凝血活酶時間從而促進(jìn)內(nèi)凝血、抗纖溶、局部止血。祛瘀止血、增加大腸蠕動，有利于腸內(nèi)血的排除,而不激惹胃、十二指腸與小腸,對出血病灶無妨 [20]?；⒄葘毙陨舷莱鲅哂酗@著的止血作用，可能為蒽醌類衍生物與鞣質(zhì)的雙重作用[21,22]。張斌 [23]等運(yùn)用虎杖清肝湯治療慢性乙型肝炎，結(jié)果顯示虎杖清肝湯對慢性乙型肝炎有較好的臨床療效和抗肝纖維化作用 郭小平 [44]等運(yùn)用金虎退黃湯治療重度黃疸型肝炎32例，結(jié)果顯示金虎退黃湯退黃效果明顯。劉統(tǒng)峰 [25]自擬參虎調(diào)肝湯合拉米呋啶治療慢性乙型肝炎70例療效觀察，結(jié)果：臨床基本治愈364例，顯效20例，好轉(zhuǎn)9例，無效5例，%。 曹文等 [26]應(yīng)用復(fù)方虎杖清熱膠囊治療風(fēng)熱型急性上呼吸道感染30例，并與用感冒退熱沖劑治療的20例作對照觀察，臨床研究表明，復(fù)方虎杖清熱膠囊治療急性上呼吸道感染風(fēng)熱證療效好，對主癥起效快，并有明顯的改善白細(xì)胞異常及降低體溫的作用，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 陳曉莉 [27]等比較虎杖片與辛伐他汀治療高脂血癥的療效，將高膽固醇血癥患者120例，隨機(jī)分為兩組，分別服用虎杖片和辛伐他汀，療程均2個月，并觀察治療前后膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、動脈硬化指數(shù)等指標(biāo)變化。結(jié)果：虎杖片和辛伐他汀治療高脂血癥的總有效率%和95% ，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，虎杖片降脂療效與辛伐他汀相近?；⒄葘?fù)發(fā)性口腔潰瘍、膽石癥、慢性前列腺炎、男性不育、闌尾周圍膿腫、小兒過敏性紫癜、褥瘡及心腦血管疾病，療效顯著 [28]。目前虎杖的藥源主要來自野生資源,藥材因產(chǎn)地、生長年限、生長環(huán)境及采收時間的不同,品質(zhì)參差不齊,質(zhì)量穩(wěn)定性差。應(yīng)加強(qiáng)虎杖資源調(diào)查、生物學(xué)特性、人工繁育技術(shù)、種質(zhì)的遺傳多樣性、生態(tài)因子與品質(zhì)相關(guān)性、優(yōu)良種質(zhì)的收集和篩選等方面的研究工作,為建立規(guī)范的虎杖生產(chǎn)基地,實(shí)現(xiàn)虎杖資源的可持續(xù)利用奠定基礎(chǔ)。同時尚需更進(jìn)一步對虎杖的品質(zhì)評價體系進(jìn)行系統(tǒng)研究,建立切實(shí)可行的評價方法和標(biāo)準(zhǔn)。在藥效研究方面近年有較多的實(shí)驗(yàn)研究的報道,然在臨床藥理學(xué)、毒理學(xué)、藥代動力學(xué)等方面尚缺乏系統(tǒng)規(guī)范的研究。本論文的研究目的：研究超臨界CO 2萃取壓力、溫度、時間和攜帶劑甲醇的添加量對虎杖莖中虎杖苷提取的影響，高效液相色譜、紫外分光光度法檢測虎杖苷的含量，并以虎杖苷的提取率為參考指標(biāo)，通過正交實(shí)驗(yàn)方法對超臨界萃取法萃取取虎杖莖中虎杖苷的最佳提取參數(shù)進(jìn)行探討。1 材 料 與 方 法1．1 材料、儀器與試劑儀器：LC3600高效液相色譜儀系統(tǒng)(北京凱奧科技發(fā)展有限公司）、UV3600紫外檢測器（北京凱奧科技發(fā)展有限公司）、超越3000色譜工作站（浙江大學(xué)智能信息研究所）)FY1215001型超臨界CO 2萃取裝置(南通市飛宇石油科技開發(fā)有限公司)TDL—5Z 高速臺式離心機(jī)(長沙星科有限公司)5FSJ114植物標(biāo)本粉碎機(jī)（牧漁業(yè)扶溝科技儀器廠）超低溫冰箱 （中科美菱）FD—1冷凍干燥機(jī)（北京德天佑科技發(fā)展有限公司）AUY220電子分析天平 (SHIMADZU CORPORAT ON JAPAN)2021A型 電熱恒溫干燥箱（上海東星建材試驗(yàn)設(shè)備有限公司）HHS數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市正基儀器有限公司）試劑：無水乙醇為分析純；無水甲醇為色譜純、萃取劑；ddH 2O虎杖苷對照品 (中國藥品生物制品檢定所 , 供含量測定用)實(shí)驗(yàn)材料：虎杖（采于湖南省邵陽市）1．2 對照品溶液的制備,置10mL 容量瓶中, 用甲醇定容至刻度, 搖勻, 1 的對照品Ⅰ液。分別精密吸取對照品 Ⅰ液5 mL 、 mL、 10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，、 mg/mL、 mg/mL、 mg/mL、 mg/mL五種濃度的標(biāo)樣。1．3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用紫外分光光度計檢測不同濃度虎杖苷標(biāo)樣的OD值（檢測波長：306nm），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。高效液相色譜檢測虎杖苷，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：色譜柱：NucleosilCN分析柱(250mm50mm) 流動相:無水甲醇；流速:；檢測波長: 306nm；柱溫:室溫；進(jìn)樣量:20μL；數(shù)據(jù)處理為外標(biāo)法峰面積定量，以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo), 峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。1．4 超臨界二氧化碳流體萃取工藝流程將虎杖按根莖液分類曬干，粉碎，過60目篩，備用。稱取100g虎杖莖粉裝入500 mL的不銹鋼萃取釜中，開啟主泵，達(dá)到設(shè)置條件，將虎杖莖粉靜態(tài)萃取30min，再開啟泵動態(tài)萃取，萃取完畢后即瀉壓關(guān)機(jī)，得到萃取液。1．5 萃取物中虎杖苷含量的測定將所得萃取液處理后冷凍干燥后，將萃取物粗品用甲醇定容于 50mL 容量瓶中，用高效液相色譜外標(biāo)法測定萃取粗品中虎杖苷含量，測定條件為：色譜柱，6YWGC18分析柱(250mm,10μm)；流動相:無水甲醇；流速:；檢測波長: 306nm；柱溫:室溫；進(jìn)樣量:20μL。1．6 單因素試驗(yàn)1．6．1 攜帶劑甲醇的添加量對虎杖苷提取率的影響稱取虎杖莖粉100g，在萃取溫度25℃，萃取壓力10Mpa，萃取時間20min條件下，分別加入攜帶劑甲醇用量50mL、75mL、100mL，進(jìn)行超臨界二氧化碳流體萃取，提取液用HPLC進(jìn)行測定。1．6．2 萃取時間對虎杖苷提取率的影響稱取虎杖莖粉100g，在萃取溫度30℃、萃取壓力20Mpa、攜帶劑用量50mL，萃取時間分別為20min、40min、60min,進(jìn)行超臨界二氧化碳流體萃取，提取液用HPLC進(jìn)行測定。1．6．3 萃取溫度對虎杖苷提取率的影響稱取虎杖莖粉100g，在萃取壓力10Mpa、萃取時間20min、攜帶劑用量50mL，萃取溫度分別為25℃、30℃、35℃,進(jìn)行超臨界二氧化碳流體萃取，提取液用HPLC進(jìn)行測定。1．6．4 萃取壓力對虎杖苷提取率的影響稱取虎杖莖粉100g，在萃取溫度30℃、萃取時間60min、攜帶劑用量50mL，萃取分別為壓力10Mpa、12Mpa、15Mpa,進(jìn)行超臨界二氧化碳流體萃取，提取液用HPLC進(jìn)行測定。1．7 最佳萃取工藝條件實(shí)驗(yàn)設(shè)計 在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上, 以虎杖苷提取率為主要考察指標(biāo), 選定四因素三水平按L 9(34)正交表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計，, 試驗(yàn)方案。表 因素水平表Table Factors and levels因 素Factors水 平Levels A 壓力 Mpa B 溫度℃ C 時間 min D 攜帶劑（甲醇）mlPressure Temperature Time presoaker71 10 25 20 502 12 30 40 753 15 35 60 100表 　試驗(yàn)方案表Table Results of orthogonal experiment 試 A 萃取壓力 B 萃取溫度 C 萃取時間 D 萃取劑 虎杖苷含量驗(yàn) MPa ℃ min ml /%、mg/g 號1 10 25