【文章內(nèi)容簡介】 的酚羥基與Al3+生成絡(luò)合物，控制適宜的PH值，所生成的絡(luò)合物在可見區(qū)能獲得特征吸收峰，其質(zhì)量濃度與吸光度符合比爾定律，其顏色的深淺與黃酮類化合物的量成一定的比例關(guān)系，可以定量測定。 分光光度計(jì)的使用原理分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析[22]。常用的波長范圍為：(1)200~400 nm的紫外光區(qū)(2)400~760 nm的可見光區(qū)(3)~25μm(按波數(shù)計(jì)為4000㎝1~400㎝1)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見分光光度計(jì)。單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關(guān)系如下式：A= log(I/I0) = lgT =κLc式中：A 為吸光度； I0 為入射的單色光強(qiáng)度；I 為透射的單色光強(qiáng)度； T 為物質(zhì)的透射比；κ為吸收系數(shù)； L 為被分析物質(zhì)的光程；c 為物質(zhì)的濃度物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后，可用同樣條件將該共式品配成溶液，測定其吸收度，即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收，但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過顯色處理使其顯色后再測定，故又稱比色分析[23]。 論文研究的目的、意義及主要內(nèi)容 研究的目的及意義癌癥是嚴(yán)重威脅人類生命的三大疾病之一，抗癌藥物的研究一直是藥物研究領(lǐng)域中非?；钴S的課題之一，抗癌中藥的研究也日益蓬勃發(fā)展起來，利用現(xiàn)代科技理論和方法研究中藥對腫瘤的預(yù)防和治療作用，從分子水品闡述中藥的抗癌作用機(jī)理，是研究抗癌中藥的必然趨勢。自然界中存在許多抗癌中藥成分，特別是黃酮類化合物，其抗癌作用以逐漸受到人們的關(guān)注[24]。黃酮類化合物廣泛的分布于植物界中，由于他多重多樣的生理活性，引起了國內(nèi)外的廣泛重視，研究的進(jìn)展也很快。自1814年發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)黃酮類化合物——白楊素以來，到1980年已分離出黃酮類化合物約2700種，包括甙和甙元[25]。植物界中的黃酮類化合物大部分已苷的形式存在，一部分已游離形式存在。其中以黃酮醇類最為常見，其次是黃酮類，其余則較少見，多具有顏色[26]。黃酮類化合物(flavonoids)的名稱來源于黃酮(flavone)，這是因?yàn)檫@一類物質(zhì)大都呈黃色(flavus)，和具有四位羰基之故。以前黃酮類化合物主要是指具有基本母核2—苯基色原酮化合物，而且前則泛指兩個(gè)苯環(huán)(A與B環(huán))通過中央三個(gè)碳原子連接而成的一系列化合物的總稱[27]。近10年來，黃酮類化合物的研究以傾向于其藥用價(jià)值的開發(fā)，涉及到提取、分離和純化等各個(gè)方面的研究，其中黃酮含量的測定在植物化學(xué)活性成分的開發(fā)和評價(jià)等方面有非常重要的意義。對女貞子中的總黃酮的測定及提取的研究將進(jìn)一步挖掘女貞子的藥用價(jià)值，充分利用我國的植物資源，將選擇性能好，操作簡單的提取，以提高產(chǎn)品的質(zhì)量，是一項(xiàng)有意義的工作。 論文主要研究內(nèi)容女貞子中總黃酮的含量根據(jù)不同地區(qū)，不通氣候，不同的采摘時(shí)間，含量都會(huì)不同。本課題主要研究了黃石地區(qū)冬季采摘的女貞子中總黃酮的含量，通過在單因素實(shí)驗(yàn)(即單一變量在各個(gè)條件下黃酮的得率)的基礎(chǔ)上，對黃酮類化合物提取效果的因素：提取溫度、濃度、時(shí)間、料液比進(jìn)行了正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以確定最佳的黃酮提取條件。（先對女貞子總黃酮提取的……等單因素進(jìn)行了研究，然后在在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，確定最佳的黃酮提取條件。結(jié)合題目中提取工藝研究，文中描述是做相應(yīng)改變。）2 材料與實(shí)驗(yàn)方法（實(shí)驗(yàn)材料與方法）、試劑與儀器設(shè)備女貞子采自黃石理工學(xué)院內(nèi)，洗凈瀝干后與烘箱中55℃烘干，粉碎后果80目篩備用。 試劑蘆丁對照品(中國藥品生物精品檢定所)無水乙醇、甲醇、丙酮、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、硼酸、三氯化鐵、濃鹽酸、鋅粉、石油醚、硫酸銅、氯化鈉、檸檬酸(均為分析純)蒸餾水(實(shí)驗(yàn)室自制) 主要儀器設(shè)備表21主要儀器設(shè)備一覽表儀器及型號 生產(chǎn)廠家FZ10植物粉碎機(jī) 齊家務(wù)科學(xué)儀器廠電子天平 梅特勒托利多儀器(上海)有限公司旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE52CS 上海亞榮生化儀器廠恒溫水浴鍋B220 上海亞榮生化儀器廠SHZD(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵 鞏義市予華儀器有限公司PH030A干燥箱 上海恒科學(xué)儀器有限公司DF101B集熱式恒溫加熱磁力攪拌器 鞏義市予華儀器有限公司W(wǎng)X2無憂真空泵 臨海市譚氏真空設(shè)備有限公司TDL40B臺(tái)式低速大容量離心機(jī) 湖南星科科學(xué)儀器有限公司722S分光光度計(jì) 上海精密儀器有限公司UV1880紫外分光光度計(jì) SHIMADZU CORDORATIONSB5200DT超聲波清洗機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司 實(shí)驗(yàn)方法 女貞子中黃酮類化合物含量的測定天然藥用植物中總黃酮含量的測定方法主要有鋁鹽顯色可見分光光度法和高效液相色譜法等。本文女貞子總黃酮含量的測定采用鋁鹽顯色可見分光光度法。 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立，置于100ml的燒杯中，先加入20ml 30%乙醇水溶液在水浴鍋中加熱使其溶解，然后轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，定容至刻度。 最佳波長的選擇、置于25ml容量瓶中，分別加入30%，% NaNO2，搖勻，放置6min， 10% Al(NO3)3溶液，放置6min，再加入5ml 4%NaOH溶液，混勻，用30%乙醇稀釋至刻度，10min后，2000r/min 離心10min，同時(shí)作空白對照，按參考文獻(xiàn)[19]，用紫外分光光度計(jì)掃描400nm~600nm波長范圍，確定最佳測定波長。 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程的確立、、用30%， 5% NaNO2，搖勻，放置6min后， 10% Al(NO3)3溶液，搖勻，放置6min，加入5ml 4%NaOH溶液，混勻，用30%乙醇稀釋至刻度搖勻，放置10min后，2000r/min 離心10min，取上清液于波長506nm處測定吸光度，測得不同濃度下的吸光度。表22標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定結(jié)果 V蘆丁溶液(ml) C蘆丁(μg/ml) 吸光度值0 0 01 8 2 16 3 24 4 32 5 40 6 48 7 56 8 64 由上表，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度C與吸光度A作圖，如圖22所示。以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度C與吸光度A作圖得：圖22蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作曲線用最小二乘法作線性回歸，得蘆丁濃度C(mg/ml)與吸光度A的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程式:，相關(guān)系數(shù)R2=。表明本方法線性關(guān)系良好，可作為女貞子中總黃酮含量的測定方法。 女貞子總黃酮提取物的制備 (80目)的女貞子粉末，置于索氏提取器中用乙醇提取至提取液呈無色為止。將提取液抽濾，3500r/min離心20min，上清液轉(zhuǎn)至100ml容量瓶，用30%乙醇定容至刻度，備用待測。 樣品中黃酮含量的測定、分別用30%，% NaNO2溶液，搖勻，% Al(NO3)3溶液，搖勻，放置6min后再加入5ml 4% NaOH溶液，再加入30%乙醇至刻度，搖勻放置10min后離心10min，于波長506nm處冊吸光度。