【正文】 離心，然后于100ml的容量瓶定容，顯色測其吸光度。 黃酮類化合物的定性鑒定HClZn反應(yīng)：取少量所提取的樣品溶液，加入少量Zn粉，再加入12滴濃鹽酸，觀察實驗現(xiàn)象。表22標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定結(jié)果 V蘆丁溶液(ml) C蘆丁(μg/ml) 吸光度值0 0 01 8 2 16 3 24 4 32 5 40 6 48 7 56 8 64 由上表，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度C與吸光度A作圖，如圖22所示。（先對女貞子總黃酮提取的……等單因素進行了研究，然后在在單因素實驗的基礎(chǔ)上設(shè)計正交試驗，確定最佳的黃酮提取條件。植物界中的黃酮類化合物大部分已苷的形式存在，一部分已游離形式存在。所用儀器為紫外分光光度計、可見分光光度計。因此，在當(dāng)今人們渴望回歸大自然的潮流中，該提取方法倍受青睞，用超臨界二氧化碳提取銀杏葉黃酮類成分的方法，已受到人們的關(guān)注，在歐洲己有專利報道[19]。 超聲波法超聲波法的原理是利用超聲波產(chǎn)生的強烈震動、高的加速度、強烈的空話效應(yīng)、攪拌作用等加速藥物有效成分進入溶劑，從而提高提取率，縮短提取時間，并且免去高溫對提取成分的影響。黃酮類化合物成苷后，隨著引入羥基的增多，在水中的溶解度增加，在有機溶劑中溶解度相應(yīng)減小，黃酮苷類一般溶解于水，甲醇，乙醇等強極性的溶劑中[15]。此外黃酮類化合物還可降低血管內(nèi)皮細胞羥脯酸代謝，是內(nèi)壁的膠原或膠原纖維含量相對減少，利于防止血小板粘附凝集和血栓形成，有利于防治動脈粥樣硬化。自由基性質(zhì)活潑，有極強的氧化能力，對人體能造成極大的危害，在體內(nèi)自由基和脂質(zhì)過氧化作用下能使大分子成分發(fā)生氧化變性、DNA交聯(lián)和斷裂，導(dǎo)致細胞結(jié)構(gòu)改變，從而引起癌癥、衰老及心血管等退變性疾病[9]。 硼酸顯色反應(yīng)取1~2㎎樣品溶于去離子水中，加1ml 15%硼酸溶液，充分振蕩后，若溶液顏色呈現(xiàn)亮黃色，則示有5—羥基黃酮或2—羥基查耳酮，而其它黃酮類均為負反應(yīng)[7]。 黃酮類化合物的化學(xué)性質(zhì) 還原反應(yīng)1. 鹽酸—鋅粉反應(yīng)這是檢查是否有黃酮類化合物的最常用方法之一。2. 溶解性黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)(苷或苷元、單糖苷、雙糖苷或三糖苷)不同而有很大差異。由于這些助色團的存在，使該類化合物多顯黃色。”李時珍謂其“果實強陰健腰膝，變白發(fā)，明目”。葉對生、全緣、無毛、革質(zhì)、背面密披細小的透明腺點。 黃酮類化合物黃酮類化合物是一類重要的天然色素，也是中藥中一類重要的有效成分。黃酮類化合物多為黃色，其顏色深淺與其是否具有交叉共扼體系、助色團的多少有關(guān)，一般具有交叉共扼體系的黃酮類化合物(如黃酮、黃酮醇、查爾酮)多呈黃色或顏色較深，而不含有交叉共軛體系的黃酮類化合物(如二氫黃酮、二氫查爾酮、異黃酮)多無色或顏色較淺[4]。3. 酸堿性黃酮類化合物因分子中多具有酚輕基，故顯酸性，可溶于堿性水溶液、吡啶中。2. 四氫硼酸酸鈉(鉀)反應(yīng)該還原劑是對二氫黃酮類化合物專屬性較高的一種還原劑。因此，成為近幾年研究、開發(fā)、利用的熱點，其在醫(yī)藥、食品領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景[8]。許多黃酮類化合物具有抑制腫瘤細胞糖酵解、生長、線粒體琥珀酸氧化酶和磷脂肽肌醇激酶(卵巢癌細胞中)活性的功能，起到抗癌、防癌的作用。甘草總黃酮可以增強脾虛衰老小鼠SOD活性，減少體內(nèi)MDA含量，延緩衰老進程，提高生命力及生存等能力[14]。石灰水的優(yōu)點是使含有多羥基的蹂質(zhì)，或含有羧基的果膠、粘液質(zhì)等水溶性雜質(zhì)生成鈣鹽沉淀，有利于浸出液的純化。 超臨界流體萃取法(Supercritical fluid extraction，SFE)近10年來，隨著超臨界流體提取(SFE)技術(shù)的迅速發(fā)展，在天然藥用植物有效成分提取中應(yīng)用越來越廣泛。在實際生產(chǎn)和科研過程中，考慮到方法的簡便、快捷以及可行性，對總黃酮的測定，多采用NaNO2—Al鹽—NaOH絡(luò)合法[21]：該法主要以蘆丁為對照品，先用NaNO2還原黃酮，再用Al鹽絡(luò)合，最后加NaOH溶液顯色，產(chǎn)生紅色化合物進行比色測定，是使用最廣泛的中草藥、中藥制劑總黃酮類化合物的測定方法，在黃酮類化合物溶液中加入Al3+試劑后，黃酮類化合物中的酚羥基與Al3+生成絡(luò)合物，控制適宜的PH值，所生成的絡(luò)合物在可見區(qū)能獲得特征吸收峰，其質(zhì)量濃度與吸光度符合比爾定律，其顏色的深淺與黃酮類化合物的量成一定的比例關(guān)系，可以定量測定。自然界中存在許多抗癌中藥成分，特別是黃酮類化合物，其抗癌作用以逐漸受到人們的關(guān)注[24]。對女貞子中的總黃酮的測定及提取的研究將進一步挖掘女貞子的藥用價值，充分利用我國的植物資源，將選擇性能好，操作簡單的提取，以提高產(chǎn)品的質(zhì)量，是一項有意義的工作。 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立，置于100ml的燒杯中，先加入20ml 30%乙醇水溶液在水浴鍋中加熱使其溶解，然后轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，定容至刻度。 樣品中黃酮含量的測定、分別用30%，% NaNO2溶液，搖勻，% Al(NO3)3溶液，搖勻，放置6min后再加入5ml 4% NaOH溶液，再加入30%乙醇至刻度，搖勻放置10min后離心10min，于波長506nm處冊吸光度。 單因素試驗 提取不同的時間分別用100ml，80%、4小時，將濾液抽濾、離心，然后于100ml容量瓶定容，顯色測其吸光度。 方法重現(xiàn)性試驗，用100ml80%的乙醇提取3小時，顯色并測其吸光度值，算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。乙醇的濃度越大，極性越小，增大極性小的黃酮溶出，從而在一定乙醇濃度范圍內(nèi)，提取含量呈上升趨勢；當(dāng)乙醇濃度超過一定范圍，極性過大，減少了黃酮糖苷類等的溶出，從而提取含量呈下降趨勢。表39提取液顯色穩(wěn)定性實驗結(jié)果顯色時間 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 吸光度 由表39中根據(jù)顯色反應(yīng)在不同時間內(nèi)所測的吸光度值可以看出，該顯色反應(yīng)所產(chǎn)生的有色物穩(wěn)定，在較長時間內(nèi)基本上不會發(fā)生改變，說明分光光度法測定黃酮結(jié)果穩(wěn)定可靠，適宜做定量分析。通過單因素試驗確定了正交試驗各個影響因素的設(shè)定范圍，然后對影響黃酮類化合物的因素進行了正交試驗和影響因素分析，結(jié)果表明乙醇提取女貞子中黃酮類化合物的最佳工藝條件為：乙醇濃度80%，料液比1:40，提取溫度90℃，通過顯色穩(wěn)定性試驗、精密度試驗和方法重現(xiàn)性試驗證明了可見分光光度法測定總黃酮方案的可靠性和索氏提取法的重現(xiàn)性很好。阿尤甫，阿不都拉在本論文的寫作過程中，我的指導(dǎo)老師徐老師傾注了大量的心血，從選題到開題報告，從寫作提綱，到一邊又一遍的指出初稿中的具體問題，嚴(yán)格把關(guān)，循循善誘在此我表示衷心感謝。結(jié)果見下表：表310精密度實驗序號 1 2 3 4 5吸光度 黃酮含量% 平均值 相對偏差% 標(biāo)準(zhǔn)差 變異系數(shù)(%) 從上表結(jié)果看出，用分光光度法測定女貞子中總黃酮含量，結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)變偏差和變異系數(shù)均較小，說明該方法的精密性、準(zhǔn)確性良好，切測定條件易控制，測定結(jié)果較滿意。 正交試驗(80目)女貞子粉末于索氏提取器的恒壓漏斗中，根據(jù)預(yù)實驗進行