【正文】 黃石理工學(xué)院 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）女貞子中總黃酮含量的測(cè)定畢業(yè)論文目 錄摘 要 IABSTRACT II1 前 言 1 1 1 ....................... 2.......................... 3.......................... 4 4 4 4.......................... 4 抗癌作用 5 抗病毒作用 6 6 7.................................. 7.......................... 7.................................. 7........................................ 7(Supercritical fluid extraction，SFE) .. 8 8 9........................................ 9............................ 意義及主要內(nèi)容 10............................... 10............................... 112 材料與實(shí)驗(yàn)方法 1試劑與儀器設(shè)備 11....................................... 11 試劑.......................................... 12 主要儀器設(shè)備.................................. 12 實(shí)驗(yàn)方法 13 女貞子中黃酮類化合物含量的測(cè)定................ 13 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 13 最佳波長(zhǎng)的選擇 13 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程的確立 13 女貞子總黃酮提取物的制備 14 樣品中黃酮含量的測(cè)定 15 黃酮類化合物的定性鑒定........................ 15 對(duì)比試驗(yàn)...................................... 15 女貞子不同部位中總黃酮的含量 15 單因素試驗(yàn) 16 提取不同的時(shí)間 16 不同的提取溫度 16 不同料液提取比 16 不同濃度乙醇的提取 16....................... 16 顯色反應(yīng)穩(wěn)定性試驗(yàn)............................ 17 精密度試驗(yàn).................................... 17 方法重現(xiàn)性試驗(yàn)................................ 173 試驗(yàn)結(jié)果與分析 17 17 對(duì)比實(shí)驗(yàn) 18 18 單因素實(shí)驗(yàn) 19 提取不同時(shí)間.................................. 19 不同溫度提取.................................. 20 不同料液比提取................................ 20 不同濃度乙醇提取.............................. 21 正交試驗(yàn) 22 顯色反應(yīng)穩(wěn)定性試驗(yàn) 23 精密度實(shí)驗(yàn) 24 方法重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 244 總結(jié) 25致謝 26參考文獻(xiàn) 27281 前 言女貞子又稱女貞實(shí)、冬青子、白蠟樹(shù)子，系木犀科女貞屬植物女真(學(xué)名Ligustrum lucidum)的果實(shí)。女貞子樹(shù)為常綠喬木，樹(shù)皮光滑不裂。葉對(duì)生、全緣、無(wú)毛、革質(zhì)、背面密披細(xì)小的透明腺點(diǎn)。女貞原生于我國(guó)長(zhǎng)江流域及南方各地、河南、陜西、甘肅等地，作為園林綠化植物，北方不太寒冷的地方也有引種，在朝鮮南方、印度也有分布。女貞子是一味傳統(tǒng)的扶正固本藥物，《神農(nóng)本草經(jīng)》列之為上品，謂其“味苦平，主補(bǔ)中，安五臟，養(yǎng)精神，除百病?！崩顣r(shí)珍謂其“果實(shí)強(qiáng)陰健腰膝，變白發(fā)，明目”?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，女貞子具有補(bǔ)腰膝、壯筋骨、強(qiáng)陰腎、烏須發(fā)、治療神經(jīng)衰弱和風(fēng)熱赤眼等作用，是一種兼具營(yíng)養(yǎng)和藥理作用值得開(kāi)發(fā)的植物資源[1]。 女貞子的形態(tài)特征女貞子為女貞的干燥成熟果實(shí)，呈卵形、橢圓形或腎形，長(zhǎng)6~㎜，~㎜，表面黑紫色或灰黑色，皺縮不平，基部有果梗痕或具宿萼及短梗。體輕，外果皮薄，中果皮較松軟，易剝離，內(nèi)果皮木質(zhì)，黃棕色，具縱棱，破開(kāi)后種子通常為1粒，腎形，紫黑色，斷面類白色，油性。氣微、味甘、微苦澀。 黃酮類化合物黃酮類化合物是一類重要的天然色素，也是中藥中一類重要的有效成分。其在植物界分布很廣，在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷類或碳糖基的形式存在，也有以游離形式存在的。天然黃酮類化合物母核上常含有羥基、甲氧基、烴氧基、異戊烯氧基等取代基。由于這些助色團(tuán)的存在，使該類化合物多顯黃色。又由于分子中γ—吡酮環(huán)上的氧原子能與強(qiáng)酸成鹽而表現(xiàn)為弱堿性，因此曾稱為黃堿素類化合物[2]。 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)與類型黃酮類化合物以前是指2—苯基色原酮為基本母核的化合物，現(xiàn)在是指兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)(A、B環(huán))通過(guò)中央3個(gè)碳原子連接而成的一系列化合物的總稱[3]。根據(jù)中央三碳鏈的氧化程度、是否成環(huán)以及B環(huán)在C環(huán)上的連接位置(2—或3—位)等特點(diǎn)，可將主要的天然黃酮類化合物分類，如表1—1所示。表1—1黃酮類化合物苷元的主要結(jié)構(gòu)類型類型 基本結(jié)構(gòu) 類型 基本結(jié)構(gòu) 黃酮類化合物的物理性質(zhì)1. 性狀黃酮類化合物大多數(shù)為結(jié)晶性固體，具有一定的結(jié)晶形狀，少數(shù)(如黃酮營(yíng)類)為無(wú)定形粉末。黃酮類化合物多為黃色，其顏色深淺與其是否具有交叉共扼體系、助色團(tuán)的多少有關(guān)，一般具有交叉共扼體系的黃酮類化合物(如黃酮、黃酮醇、查爾酮)多呈黃色或顏色較深，而不含有交叉共軛體系的黃酮類化合物(如二氫黃酮、二氫查爾酮、異黃酮)多無(wú)色或顏色較淺[4]。黃酮類化合物在紫外光下一般具有熒光，熒光顏色與分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。如C3—OH(黃酮醇)顯亮黃色或黃綠色熒光，但當(dāng)其甲基化或糖苔化后，或無(wú)輕基(黃酮類)時(shí)，僅顯暗淡的棕色[5]。2. 溶解性黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)(苷或苷元、單糖苷、雙糖苷或三糖苷)不同而有很大差異。一般游離試元難溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酷、乙醚等有機(jī)溶劑及稀堿中。其中黃酮、黃酮醇、查爾酮等平面型黃酮類化合物分子間引力較大，各分子層層重疊，難溶于水；而二氫黃酮、二氫黃酮醇及異黃酮等非平面型黃酮類化合物處于半椅式結(jié)構(gòu)，破壞可分子平面性，分子間引力較小，其水溶性大于上述平面型黃酮類化合物。黃酮類化合物糖苷化后，水溶性增加，脂溶性降低，一般易溶于熱水、甲醇、乙醇、稀堿溶液，而難溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚等親脂性有機(jī)溶劑。游離黃酮及黃酮苷一般都含酚經(jīng)基，故都可溶于堿中，加酸后又沉淀出來(lái)，可利用此性質(zhì)提取、分離黃酮類化合物[6]。3. 酸堿性黃酮類化合物因分子中多具有酚輕基，故顯酸性，可溶于堿性水溶液、吡啶中。由于黃酮類分子中有未共用的孤對(duì)電子，故又表現(xiàn)有堿性，可以與無(wú)機(jī)酸如硫酸、鹽酸等生成鹽，但生成的鹽不穩(wěn)定，遇水后即可分解。黃酮類化合物與硫酸反應(yīng)生成的鹽，常表現(xiàn)出特殊的顏色，由此可以鑒別黃酮類化合物[6]。 黃酮類化合物的化學(xué)性質(zhì) 還原反應(yīng)1. 鹽酸—鋅粉反應(yīng)這是檢查是否有黃酮類化合物的最常用方法之一。將樣品溶于甲醇或乙醇，加入少許鋅粉振搖，再滴加幾滴濃鹽酸，1—2分鐘內(nèi)(必要時(shí)微熱)即可出現(xiàn)顏色。多數(shù)黃酮、黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物顯橙紅、紫紅色，少數(shù)顯紫藍(lán)色，且B環(huán)上有—O或—OCH3取代時(shí)，顏色即隨之加深。但查耳酮、橙酮、兒茶素類則不顯反應(yīng)。異黃酮類除少數(shù)例外，均不顯色[7]。2. 四氫硼酸酸鈉(鉀)反應(yīng)該還原劑是對(duì)二氫黃酮類化合物專屬性較高的一種還原劑。反應(yīng)產(chǎn)物為紅色或紫色，其它黃酮類化合物均為無(wú)顏色反應(yīng)[7]。 絡(luò)合反應(yīng)黃酮類化合物分子可以與鋁鹽、鉛鹽、鎂鹽生成黃色并具有熒光的絡(luò)合物，可用于黃酮的定性或定量分析。 硼酸顯色反應(yīng)取1~2㎎樣品溶于去離子水中，加1ml 15%硼酸溶液，充分振蕩后，若溶液顏