中國藥科大學(xué)本科畢業(yè)論文金線蓮總黃酮測定方法的研究(編輯修改稿)
2025-06-30 08:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 量為橫坐標(biāo)（ X）、峰面積 為縱坐標(biāo)（ Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見圖 3。槲皮素、山柰酚、異鼠李素的線性范圍分別為： ~。 ~； ~。 圖 3 混合對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線 中國藥科大學(xué)本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 9 中國藥科大學(xué)本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 10 B 第三章 紫外法測定總黃酮含量 對(duì)照品的確定 對(duì)續(xù)濾液的 NaNO2Al(NO3)3NAOH 的顯色處理后顏色比未顯色續(xù)濾液淺，且發(fā)現(xiàn)金線蓮相關(guān)文獻(xiàn)內(nèi)未有有蘆丁的記載，故對(duì)槲皮素、山柰酚、異鼠李素進(jìn)行紫外 200nm800nm 的波長掃描， 60%乙醇作為空白，三者波形相似，在 256nm 左右和 375nm 左右波長有最大吸收峰，處于易獲得和低成本的考慮，選用槲皮素作為對(duì)照品。 測定波長的選擇 精密稱取適量的槲皮素對(duì)照品， 60%乙醇溶解，作為對(duì)照品溶液；精密稱取 金線蓮粉末，用 60%乙醇 50mL 水浴回流 3 小時(shí)，在 205~550nm 波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，并導(dǎo)出測定波長的選擇，結(jié)果見圖 5。 圖 4 對(duì)照品零階（ A）、一階（ B）、二階（ C）導(dǎo)數(shù)光譜圖 圖 5 供試品零階（ A）、一階（ B）、二階（ C）導(dǎo)數(shù)光譜圖 由圖 4 可知，對(duì)照品在對(duì)照品在 256nm 和 375nm 處零階圖譜有最大值，一階圖譜過零點(diǎn)，二階圖譜分別有過零點(diǎn)和最小值，且振動(dòng)有規(guī)律，得 對(duì)照品在 256nm 和 375nm 處有最大吸收波長；由圖 5 可知供試品在 256nm 和 375nm 處零階導(dǎo)數(shù)圖譜有最大吸收值，一階導(dǎo)數(shù)圖譜分別有過零點(diǎn)A C B 中國藥科大學(xué)本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 11 和最小值，二階圖譜都有最小值但 256nm 點(diǎn)無振動(dòng)規(guī)律， 375nm 點(diǎn)振動(dòng)有規(guī)律，且 256nm 波長處檢測波不穩(wěn)定，故選擇 375nm 作為最佳吸收波長。 不同提取方法的考察 不同提取方法對(duì)含量的影響 精密稱取金線蓮粉末 ,加 60%乙醇提取，結(jié)果見表 1和圖 6。 表 1 不同提取方法對(duì)含量的影響 方法 索氏提取法 回流法 超聲提取法 溫浸法 冷浸漬法 取樣量 /g WL375 WL256 溶劑含量 60% 60% 60% 60% 60% 提取時(shí)間 3 小時(shí) 3 小時(shí) 小時(shí) 6 小時(shí) 24 小時(shí) 料液比 100 50 50 50 50 提取溫度 每秒 23 滴回流 .95176。 C 每秒 23 滴回流 ,95176。 C 20176。 C 60176。 C 20176。 C 圖 6 不同提取方法的吸光度比較 由表 1 和圖 3可知，在不同提取方法提取條件達(dá)到較好的情況下，回流法的提取效果最佳，且從提取時(shí)間實(shí)際情況考慮，可作為實(shí)驗(yàn)室提取金線蓮黃酮類成分的首選方法。 中國藥科大學(xué)本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 12 溶劑類型和溶劑含量對(duì)吸光度影響的考察 精密稱取金線蓮粉末 ，置錐形瓶中，加濃度不等的乙醇和甲醇 95176。 C水浴回流2 小時(shí)，放冷過濾，取續(xù)濾液 3mL在 25mL 容量瓶中， 60%乙醇稀釋至刻度線，在紫外375nm 和 256nm 測定吸收值 ,結(jié)果見表 圖 7和表 圖 8。 表 2 乙醇濃度對(duì)吸光度影響測試結(jié)果 乙醇濃度 /% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 取樣量 /g 吸光值 375nm 吸光值 256nm 圖 7 乙醇濃度對(duì)吸光度影響測試結(jié)果圖 表 3 甲醇濃度對(duì)吸光度影響測試結(jié)果 甲醇濃度 /% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 取樣量 /g 吸光度 256nm 吸光度 375nm 中國藥科大學(xué)本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 13 圖 8 甲醇濃度對(duì)吸光度影響測試結(jié)果圖 由表 圖 4 和表 圖 5 可知，甲醇、乙醇濃度對(duì)提取液吸光度影響較大，乙醇濃度 060%和甲醇濃度 60100%供試品吸光值基本保持不變， 80%乙醇的最大吸收值和 40%甲醇最大吸收值相近，而乙醇無毒易得，相比較下，乙醇比甲醇更適合作提取溶劑。 料液比對(duì)含量影響的考察 精密稱取金線蓮粉末 ，用 80%乙醇 25mL 水浴 95176。 C回流 2 小時(shí)，放冷過濾，取續(xù)濾液 3mL 置 25mL 容量瓶中， 80%乙醇定容至刻度線。 375nm 和 256nm 紫外分光光度法測定 ,結(jié)果見表 4和圖 9。 表 4 料液比對(duì)含量影響的測試結(jié)果 溶劑體積 /mL 10 20 30 40 50 60 取樣量 /g 吸光度 375nm 吸光度 256nm 圖 9 料液比對(duì)含量影響的測試結(jié)果圖 中國藥科大學(xué)本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 14 由表 4 和圖 6可知，隨著料液比的增大，吸光度也在增大。料液比在 50200 之間，吸光度在逐漸上升，而其在 200300 之間，吸光度保持基本不變。 提取溫度對(duì)含量的影響 精密稱取金線蓮粉末 ，用 80%乙醇 25mL 加熱回流 2 小時(shí)，放冷過濾，取續(xù)濾液 3mL 置 25mL 容量瓶中， 80%乙醇定容至刻度線。 375nm 和 256nm 紫外分光光度法測定，結(jié)果見表 4 和圖 10。 表 4 提取溫度對(duì)含量影響的測試結(jié)果 提取溫度 /176。 C 70176。 C 80176。 C 90176。 C 100176。 C 取樣量 /g 吸光度 375nm 吸光度 256nm 圖 10 提取溫度對(duì)含量影響的測試結(jié)果圖 由表 4 和圖 7可知，溫度從 7080176。 C 呈現(xiàn)下降的趨勢，而溫度從 80100176。 C 呈現(xiàn)的是上升的趨勢， 因此溫度在 70176。 C 為四個(gè)值中的最佳提取溫度。 提取時(shí)間對(duì)含量的影響 精密稱取金線蓮粉末 ，加 80%乙醇 25mL 在 100176。 C水浴回流不等時(shí)間，在375nm 和 256nm 紫外下檢測吸光值，結(jié)果見表 5和圖 11。 中國藥科大學(xué)本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 15 表 5 提取時(shí)間對(duì)含量影響測試結(jié)果 時(shí)間 /h 1 2 3 4 取樣量 /g 吸光度 375nm 吸光度 256nm 圖 11 提取時(shí)間對(duì)含量影響測試結(jié)果圖 由表 5 和圖 8可知，隨著時(shí)間的變化 小時(shí)吸光值在下降， 值在逐漸上升，在 小時(shí)處，為提取值最低點(diǎn)，提取時(shí)間和吸光度并未成比例關(guān)系。從表看來，提取時(shí)間越久越好，但從實(shí)驗(yàn)室的效益和可行性來看， 1小時(shí)為最佳提取時(shí)間。 對(duì)照品的制備 精密稱取 槲皮素對(duì)照品 置 25mL 量瓶中，用 60%乙醇溶解并定容，得對(duì)照品儲(chǔ)備液（槲皮素 ）， 精密吸取上述溶液 1mL，置于 25mL 量瓶中，加 60%乙醇至刻度，即得 對(duì)照品溶液（ 槲皮素 ）。
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