【正文】 脂中的用途 52 材料與方法 6 實(shí)驗(yàn)儀器 6 6表22 實(shí)驗(yàn)材料與方法 6 實(shí)驗(yàn)方法（國(guó)標(biāo)方法GB/） 6 實(shí)驗(yàn)操作流程 6 實(shí)驗(yàn)操作預(yù)處理 7 TBHQ標(biāo)準(zhǔn)品預(yù)處理 7 色譜柱條件 7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 7 標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制 7 標(biāo)品進(jìn)樣檢測(cè) 7 樣品含量測(cè)定 8 樣品預(yù)處理優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 8 提取溶劑選擇 8 提取條件優(yōu)化 8 單因素實(shí)驗(yàn) 9 實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)定 10 精密度測(cè)定 10 采用國(guó)標(biāo)方法精密度測(cè)定 10 采用優(yōu)化后方法精密度測(cè)定 10 回收率測(cè)定 10 采用國(guó)標(biāo)方法測(cè)定回收率 10 采用優(yōu)化處理方法測(cè)定回收率 113結(jié)果與分析 11（TBHQ）的標(biāo)準(zhǔn)曲線 11 樣品中含量的測(cè)定 12 優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件 13 提取溶劑的優(yōu)化 13 提取條件優(yōu)化 14 單因素實(shí)驗(yàn) 14 精密度測(cè)定 17 國(guó)標(biāo)方法精密度測(cè)定 17 優(yōu)化處理方法精密度測(cè)定 17 回收率的測(cè)定 19 國(guó)標(biāo)方法測(cè)定回收率 19 優(yōu)化處理交表回收率測(cè)定 204 討論和結(jié)論 21參考文獻(xiàn) 22致 謝 24附錄 25 摘 要TBHQ（叔丁基對(duì)苯二酚）是抗氧化劑中的一種，且廣泛添加于食用植物油中，具有較強(qiáng)的抗氧化能力。本文研究了利用乙醇對(duì)植物油中的叔丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）進(jìn)行提取，并對(duì)溶劑的使用量、混合時(shí)間、提取次數(shù)、水浴溫度等條件對(duì)GC分析測(cè)定TBHQ的影響，通過(guò)正交試驗(yàn)，得出最優(yōu)的預(yù)處理?xiàng)l件為溶劑使用量為6mL、混合時(shí)間為2min、提取次數(shù)為2次、水浴溫度為80℃，利用氣相色譜方法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定。該方法具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用廣泛，具有很大的研究意義。 Tertbutyl hydroquinone。 Gas chromatographyII 1引言 研究意義在日常生活中，油脂是我們的必需品，它富含不飽和脂肪酸，對(duì)我們身體健康有益。油脂為什么會(huì)發(fā)生這種狀況，這是因?yàn)橛椭l(fā)生氧化酸敗的結(jié)果。水解酸敗是指低碳脂肪酸的油脂在水分或酶的作用下發(fā)生水解使油脂中游離脂肪酸含量增加，并產(chǎn)生惡臭的氣味。如何防止油脂不被氧化，這就需要添加抗氧化劑。這些都是酚類的抗氧化劑，毒性比較小，與油脂氧化變質(zhì)的危害性相比，這些毒害作用就會(huì)小很多了。 抗氧化劑的概述 抗氧化劑在添加劑中占有很大一部分，它的作用和地位也是不容小覷的，抗氧化劑能防止或延緩食品當(dāng)中的成分因氧化而導(dǎo)致變質(zhì)以及由氧化而導(dǎo)致的褪色、褐變、維生素破壞等。在添加抗氧化劑時(shí)，往往加入多種抗氧化劑的混合物，這是由于多種混合物抗氧化效果要明顯強(qiáng)于單一的活性成分。因此，現(xiàn)在抗氧化劑的發(fā)展趨勢(shì)是朝著復(fù)合抗氧化劑的趨勢(shì)發(fā)展。1977年，美國(guó)FDA( Food and Drug Administration)宣布食品中禁止使用2，6一二叔丁基對(duì)甲酚 (BHT) ，日本厚生省也曾在1982年宣布禁用丁基羥基回香醚 ( BHA)及叔丁基對(duì)苯酚 (TBHQ)因此尋找高 效、無(wú)毒、安全的天然抗氧化劑十分重要[2]。 油溶性抗氧化劑 此類抗氧化劑多用于含油脂食品類，主要有丁基羥基苯甲醚、二丁基羥基甲苯、沒(méi)食子酸丙酯、維生素E等。自由基清除劑能借助鍵的均裂，釋放出體積小、親合性很強(qiáng)的氫自由基，被鏈反應(yīng)生成的自由基俘獲而生成分子態(tài)化合物，將高勢(shì)能的極活潑的自由基轉(zhuǎn)變?yōu)檩^穩(wěn)定的分子，從而中斷了鏈反應(yīng)的傳遞速度，阻止了油脂被進(jìn)一步氧化。苯多酚(PT)能將氫自由基提供給不飽和脂肪酸過(guò)氧游離基形成氫過(guò)氧化物，阻止脂肪酸形成新的自由基[4]，就屬于這類自由基清除劑。抗氧化劑形成半醌式自由基前后的生成熱之差(ΔHOF)是最好的衡量其活性的理論參數(shù)。通過(guò)槲皮素、兒茶素及桑色素等黃酮化合物的理論計(jì)算，證實(shí)與實(shí)際事實(shí)相吻合。這些金屬離子的來(lái)源，一是含金屬的活化酶或其分解產(chǎn)物；二是在食油煉制、食油氫化及食品加工中接觸金屬容器、重金屬特別是那些具有兩價(jià)或更高價(jià)態(tài)且在它們之間有合適的氧化還原電勢(shì)(例如鈷、銅、鐵、鎂等)的金屬[6]，可縮短鏈反應(yīng)引發(fā)期的時(shí)間，加快脂類化合物氧化的速度。那些含氧配位原子的絡(luò)合劑可作為抗氧化劑，因它們與金屬離子絡(luò)合后可降低氧化還原電勢(shì)，穩(wěn)定金屬離子的氧化態(tài)，有效地抑制金屬離子的促氧化效應(yīng)。 抗氧化劑的檢測(cè)方法 比色法此法適用于含有BHT和PG的樣品。測(cè)定油中的PG是利用乙醚溶解利用乙酸銨溶液提取，沒(méi)食子酸丙酯與亞鐵酒石酸鹽發(fā)生顏色反應(yīng)，在波長(zhǎng)540nm處測(cè)定其吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，測(cè)定PG含量。 電分析法利用微分脈沖伏安法同時(shí)測(cè)定脫水馬鈴薯片中BHA和BHT含量，二者在碳纖維電極上氧化峰電位差為300mv，利用電分析法輔以化計(jì)量技術(shù)同時(shí)測(cè)定食用油和調(diào)味粉同時(shí)測(cè)定和調(diào)味粉中BHA、BHT、PG和TBHQ。 氣相色譜質(zhì)譜法 樣品經(jīng)乙腈提取后，進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜分析，采用外標(biāo)法定量。 液相色譜法 以甲醇水乙酸體系為流動(dòng)相，采用梯度洗脫，使用對(duì)稱C柱為固定相，檢測(cè)限為2mg/Kg，回收率92%98%,%%[8]。 氣相色譜法 一般傳統(tǒng)氣相色譜法測(cè)定食用油中抗氧化劑程序時(shí)先將油脂溶解于己烷，用乙腈和80%乙醇進(jìn)行混合反復(fù)萃取，除去溶劑，然后經(jīng)硅烷化處理 [9]。本文在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，直接利用乙醇對(duì)樣品進(jìn)行萃取，取上清液蒸干用二硫化碳定容，然后采用氣相色譜法自動(dòng)進(jìn)樣，所用溶劑簡(jiǎn)單易配且無(wú)毒，操作簡(jiǎn)單且大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，比較方便而且有效。溶于乙醇、乙醚，在油脂中有一定的溶解度，幾乎不溶于水，高溫下?lián)]發(fā)小，與鐵、銅不變色，但如有堿存在可轉(zhuǎn)化為粉紅色。 1972年，美國(guó)率先批準(zhǔn)使用，F(xiàn)AO/WHO也在1995年批準(zhǔn)在26種油脂類食品中添加應(yīng)用。 TBHQ不但作為安全高效的食用油脂抗氧化劑，應(yīng)用于動(dòng)、植物油以及油脂類食品中，防止油脂的氧化裂變，而且具有很好的抗細(xì)菌、霉菌和酵母菌的作用，以增強(qiáng)高油水食品的防腐保鮮效果及延長(zhǎng)貨架期。 TBHQ在植物油脂中的用途植物油脂中含有油酸、亞油酸、亞麻酸等不飽和脂肪酸，且含量較高，在空氣中容易被氧化生成不利于人體健康的物質(zhì)。姚云游等[12]利用強(qiáng)制氧化法對(duì)比研究了TBHQ與茶多酚在花生油、花生大豆調(diào)和油中的抗氧化效果，研究結(jié)果表明TBHQ無(wú)論對(duì)壓榨花生油、還是花生大豆調(diào)和油都有很好的抗氧化效果。核桃油是一種珍貴的營(yíng)養(yǎng)保健油,趙聲蘭等研究了TBHQ等常用抗氧化劑在核桃油中的抗氧化效果，結(jié)果表明TBHQ對(duì)核桃油的抗氧化效果較其他幾種常用抗氧化劑很好，而且與TBHQ與檸檬酸或抗壞血酸配合使用時(shí)，效果更明顯。由此可見(jiàn)，TBHQ的抗氧化效果是很強(qiáng)的。再用1mL的無(wú)水乙醇洗滌燒杯后，加入少量的二硫化碳，清洗液一并倒入容量瓶中，最后用二硫化碳稀釋至100mL。 樣品預(yù)處理 ，加入5mLL80%的乙醇溶液，振搖1min，靜止片刻，放在90℃左右的水浴鍋中加熱30s，促其分層。在蒸發(fā)皿中加入二硫化碳，用小玻璃棒少量多次洗滌蒸發(fā)皿中殘留物，轉(zhuǎn)移到2mL容量瓶中，試液作為試樣測(cè)定液。檢測(cè)器溫度：250℃，汽化室溫度：160℃，柱溫：250℃。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制 （1mg/mL），用二硫化碳定容，、50ug/mL、 ug/mL、150 ug/mL、200 ug/mL、250 ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用一次性吸管將上述不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液裝入樣品瓶中，放入氣相色譜的滑槽中，準(zhǔn)備進(jìn)樣。打開(kāi)氣相色譜儀開(kāi)關(guān)，并打開(kāi)軟件工作站，聯(lián)機(jī)進(jìn)行開(kāi)始進(jìn)樣。老化的方法多采用氣體流動(dòng)法,將柱入口與進(jìn)樣室相連,出口勿接檢測(cè)器,通小流量(一般為510mL/min)的載氣,以(24)℃/min程序升溫至低于固定液最高使用溫度2030℃,老化1224h,獲得平穩(wěn)基線,待基線穩(wěn)定后，便可以開(kāi)始進(jìn)樣。根據(jù)不同濃度的標(biāo)品即可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)上述的標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)出峰的保留時(shí)間和出峰的面積，即可得出樣品中TBHQ的含量。 提取溶劑選擇 本實(shí)驗(yàn)是在國(guó)標(biāo)方法中采用乙醇作為提取溶劑的基礎(chǔ)上，研究再采用有機(jī)溶劑甲醇、乙腈分別對(duì)植物油中的TBHQ進(jìn)行提取，并采用加標(biāo)回收的方法確定三種溶劑對(duì)植物油的提取效果。 提取條件優(yōu)化在上述得出最佳的提取溶劑后，在本實(shí)驗(yàn)可能影響到抗氧化劑的因素有提取溶劑的總體積、混勻時(shí)間、溶劑提