【正文】 rison. The experimental result indicated that the polysaccharide from mushroom, the auricularia auricula, the undaria pinnatifida has certain scavenging action to the hydroxyl free radical and the ultra oxygen anion free scavenging activity to hydroxyl free radical was represented by the content of scavenging 50% of all radicals(Ec50).The Ec50 of polysaccharide from mushroom to hydroxyl free radical was 199μg/ml ,and auricularia auricula for 149μg/ml, undaria pinnatifida for 263μg/ml. The same density polysaccharide solution eliminates the ultra oxygen anion free radical ability size is in turn the auricularia auricula thick polysaccharide, the shiitake mushroom thick polysaccharide, the undaria pinnatifida thick polysaccharide.Key words: edible fungi。 antioxidation。近年來，人們對食用菌的研究也越來越深入廣泛，人們研究發(fā)現(xiàn)食用菌具有抗腫瘤，抗病毒，抗衰老，抗氧化，降血脂，提高機體免疫力，減少各種放療化療的毒副作用等生理功能。有關(guān)文獻就曾經(jīng)報道，發(fā)現(xiàn)食用菌中提取的水溶性多糖可以抑制腫瘤的生長 [1]。多糖在機體內(nèi)具有特殊的活性和多種生物學功能。真菌多糖在國際上被稱為“生物反應調(diào)節(jié)劑” 簡稱 BRM，作為一種生物非特異性免疫促進劑，具有抗腫瘤，抗病毒，延緩衰老，講學質(zhì)，護肝排毒，促進核酸和蛋白質(zhì)生物合成等多種生物功效 [2]。?OH 是體內(nèi)最活躍的活性氧，可介異許多病理變化 [6]。以下從食用菌多糖的提取、抗氧化活性及作用機理等方面作了綜述。得到的粗多糖一般含有蛋白質(zhì)、色素、低聚糖等小分子雜質(zhì)。為解決這個問題我們在提取過程中可采用正交實驗方法通過排除或減少干擾因素，確定最佳提取方法，提高食用菌多糖的提取率。如果自由基的產(chǎn)生和清除失衡，就會對機體造成損傷，導致疾病。具體又可以分為兩種：①多糖直接作用于抗氧化酶。②多糖分子絡(luò)合產(chǎn)生活性氧所必需的金屬離子。對于脂質(zhì)過氧化而言，多糖分子可以直接捕獲脂質(zhì)過氧化鏈式反應中產(chǎn)生的活性氧，阻斷或減緩脂質(zhì)過氧化的進行；對于?OH 而言，多糖碳氫鏈上的氫原子可以與其結(jié)合成水，達到清除?OH 的目的，而多糖的碳原子則因此成為碳自由基，并進一步氧化形成過氧自由基，最后分解成對機體無害的產(chǎn)物；對于超氧陰離子自由基而言，多糖可與其發(fā)生氧化反應，達到清除的目的 [18]。測定?OH 的方法主要有電子自旋共振法，高效液相色譜法，化學發(fā)光法，熒光分析法和分光光度法 [33]。化學發(fā)光法操作簡便，不需要昂貴的儀器，測定快速。熒光分析法靈敏度同樣很高而且儀器也較化學發(fā)光法普及，徐向榮等 [25]采用 Ce3+熒光分析法測定 Fenton 反應產(chǎn)生的?OH，該法簡便實用，測定快速。其原理是 Fenton 反應是經(jīng)典的產(chǎn)生?OH 的體系，可認為能模擬人體內(nèi)產(chǎn)生?OH 的過程，該反應是以雙氧水為氧化劑，在亞鐵鹽作用下的氧化反應：Fe2+ + H2O2 → Fe 3+ + ?OH + OH—反應產(chǎn)生的羥基可以氧化番紅使其褪色，利用分光光度法檢測吸光度變化間接測定所產(chǎn)生的羥自由基。用番紅與羥自由基反應的光度測定法，李平等利用分光光度法測定過山茱萸多糖清除羥自由基的能力，但是由于反應體系中 H2O2 含量過高，使實驗結(jié)果誤差很大，為此我們通過試驗對該方法進行了改進，確定了最佳反應條件。測定?OH 的方法同樣適用于測定 O2?—，另外還有脈沖輻射法、比色法、單掃描極譜法 [31]、氧電極法 [32]等一些間接測定方法。一般是利用分光光度法檢測鄰苯三酚自氧化產(chǎn)物從而間接測定反應產(chǎn)生的 O2?—，進而研究 O2?—清除劑的清除 O2?—能力。鄰苯三酚在弱堿性（TrisHClEDTA 緩沖液 PH=⒏2）環(huán)境中自氧化分解產(chǎn)生 O2?—的反應 鄰苯三酚 O2?— + 其他產(chǎn)物隨著反應的進行，O 2?—在體系中不斷積累，致使反應液在320nm，325nm，440nm 波長的吸光度在反應開始一段時間內(nèi)隨時間變化而線性增長，通過測定鄰苯三酚自氧化系統(tǒng)的吸收光譜，確定自氧化速率最大值及最大吸收波長為 325nm[29]，在此條件下，測定加入自由基清除劑反應的吸收光譜確定自氧化速率，各系統(tǒng)的自氧化速率為 S，清除率為 E。2 實驗部分 材料與試劑香菇（新鮮市售），東北黑木耳（干，市售），裙帶菜（干，市售），真姬菇（市售），真姬菇純化多糖（ZJ2），番紅為生化試劑，乙醇，丙酮，鄰苯三酚，L—抗壞血酸（Vc ），雙氧水，三羥甲基胺基甲烷，磷酸鹽， EDTANaFe（ Ⅱ）等試劑均為國產(chǎn)分析純。將新鮮香菇撕碎烘干，稱取 9g，粉碎，置于燒杯中加入 20 倍體積的蒸餾水混勻，在 80℃恒溫水浴鍋中攪拌浸取 5h，減壓抽濾，提取液置于燒杯中，濃縮至原來體積的三分之一，將濃縮液加入三倍體積的無水乙醇醇沉 24h，減壓抽濾，用無水乙醇洗滌，將沉淀于 60℃烘箱中干燥稱重，得香菇粗多糖。稱取裙帶菜 10g，粉碎，置于燒杯中加 20 倍體積的蒸餾水煎煮 1h，共煎煮三次，合并濾液，置于燒杯中，提取液置于燒杯中，濃縮至原體積的三分之一，將濃縮液加入三倍體積的無水乙醇醇沉 24h，減壓抽濾，用無水乙醇洗滌，將沉淀于 60℃烘箱中干燥稱重，得裙帶菜粗多糖。在加入 H2O2 前加入羥基自由基清除劑，F(xiàn)enton 反應產(chǎn)生的羥自由基被清除或部分清除，體系在 520nm 波長處的吸光度降低程度相應減少，采用固定反應時間法，在 520nm 波長處測量被測物反應液的吸光度并與空白液比較，從而測定被測物對?OH 的清除作用。反應體系（2）中加入 PH=⒎4 的磷酸緩沖液⒉0ml，番紅（520μg/ml） l ，EDTANaFe（Ⅱ）（∕L ），再加入不同濃度的樣品溶液 ，%的 H2O2 ，用蒸餾水定容至 10ml，振蕩搖勻后于 37℃水浴中保溫 30min，在 520nm 波長處測吸光度 A值?？瞻捉M以等體積的重蒸水代替樣品溶液，對照組以等體積的重蒸水代替樣品溶液和 EDTANaFe（ Ⅱ）溶液，實驗結(jié)果以清除率 E 表示： 10%???空 白 吸 光 度 值對 照 組 吸 光 度 值 空 白 吸 光 度 值樣 品 組 吸 光 度 值EEc50 表示清除率為 50%時的樣品濃度 清除超氧陰離子自由基（O 2?—）活性的分析方法利用鄰苯三酚自氧化反應，測定加入自由基清除劑對產(chǎn)生的 O2?—清除作用。]，在此條件下，測定加入自由基清除劑反應的吸收光譜確定自氧化速率，各系統(tǒng)的自氧化速率為 S，清除率為 E。實驗中抑制率在 060%范圍內(nèi)與樣品濃度成線性關(guān)系，自氧化速率應控制在（177。）/min [29]，計算公式為： %10???空 白 樣 品空 白清 除 率 SE3 結(jié)果與討論 清除羥基自由基實驗研究 Fenton 體系（1）?OH 清除條件試驗（1） 番紅用量對?OH 清除率的影響按本文所述的實驗方法，固定其它量不變，用 Vc 做陽性對照（Vc 濃度為500μg/ml，取樣量為 ），改變番紅用量，分別取，測的在 520nm 波長處測吸光度 A值，根據(jù)公式求清除率，測定結(jié)果如下表所示：表 1 番紅用量與?OH 清除率的關(guān)系番紅量/mL A 空白 A 對照 A 樣品 E% / 圖 1 番 紅 用 量 對 ?OH清 除 率 的 影 響0204060800 番 紅 用 量 （ ml）E%從上圖可知，番紅作的用量對測定結(jié)果影響很大，隨著番紅用量的增大，相同用量的 VC 對?OH 的清除率逐漸減少。（2） H2O2 用量對?OH 清除率的影響 按本文所述的實驗方法，固定其它量不變，用 Vc 做陽性對照（Vc 濃度為500μg/ml，取樣量為 ,反應溫度為模擬人體溫度 37℃，反應時間為 30min ）改變 H2O2 用量，分別取 H2O2（%），在 520nm 處測吸光度 A 值，根據(jù)公式求清除率，測定結(jié)果如下表所示：表 2H2O2 用量與?OH 清除率的關(guān)系H2O2/mL A 空白 A 對照 A