x312基因工程的基本操作程序-文庫(kù)吧資料
2024-09-24 18:16本頁(yè)面
【正文】 技術(shù)擴(kuò)增過(guò)程 a、 DNA變性（ 90℃ 95℃ ）：雙鏈 DNA模板 在熱作用下， 斷裂，形成 。 第二步：將反應(yīng)體系降溫至 55～ 60 ℃ ，使 兩種引物分別與模板 DNA鏈配對(duì)結(jié)合 ，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為復(fù)性。 原理： DNA雙鏈復(fù)制 原料：模板 DNA； DNA引物；四種脫氧核苷酸；熱穩(wěn)定 DNA聚合酶（ Taq酶）；離子 13 ?模板 DNA （ 已知堿基序列 ） ? 特異性引物（ DNA） ?耐熱 DNA聚合酶（ Taq酶） ? dNTPs （ 4種脫氧核苷酸 ） ?Mg+(促進(jìn) dNTP與核酸骨架作用 ) PCR體系基本組成成分 14 PCR的基本反應(yīng)步驟 變性 9095?C 延伸 7075?C 退火 5560?C 第三步：將反應(yīng)體系升溫至 70～ 75 ℃ ，在耐高溫的DNA聚合酶催化作用下，將與模板互補(bǔ)的單個(gè)核苷酸加到引物所提供的 3OH上，使 DNA鏈延伸合成 ，產(chǎn)生一條與模板鏈互補(bǔ)的DNA鏈。 9 基因文庫(kù)的分類(lèi) 按照外源 DNA片段的來(lái)源： ?從特定組織提取的染色體基因組 DNA 基因組 DNA文庫(kù) （總） ?mRNA反轉(zhuǎn)錄成的 cDNA拷貝 cDNA文庫(kù) （部分） 基因文庫(kù)的目的 為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得所需的目的基因。1 基因工程的基本操作程序 專(zhuān)題 1 基因工程 2 3 基因工程的基本操作程序 ?目的基因的獲取 ?基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ?將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ?目的基因的檢測(cè)與鑒定 4 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 終止子 啟動(dòng)子 與 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn) 補(bǔ)： 原核 細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) 編碼區(qū) ： 非編碼區(qū) ： 編碼蛋白質(zhì) ， 連續(xù)不間斷 不編碼蛋白質(zhì)，有調(diào)控作用 5 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 終止子 啟動(dòng)子 與 RNA聚酶結(jié)合位點(diǎn) 補(bǔ)： 真 核 細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) 外顯子 內(nèi)含子 不編碼蛋白質(zhì)，有調(diào)控作用 編碼區(qū) ： 非編碼區(qū) ： 外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列 內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列 6 結(jié)構(gòu)基因 外顯子 內(nèi)含子 轉(zhuǎn)錄、加工修飾 成熟 mRNA 7 關(guān)于內(nèi)含子和外顯子的說(shuō)法正確的是 （ ） A. 內(nèi)含子和外顯子在轉(zhuǎn)錄的過(guò)程中都能夠轉(zhuǎn)錄成成 熟的 mRNA B. 只有外顯子能夠轉(zhuǎn)錄成 mRNA， tRNA， rRNA C. 原核細(xì)胞基因中也有內(nèi)含子和外顯子 D. 由于內(nèi)含子不能編碼蛋白質(zhì)，故它屬于非編碼區(qū) B 8 從基因文庫(kù)中提取目的基因 1 基因文庫(kù) (gene library)概念 ? 又稱(chēng) DNA文庫(kù)，是指某個(gè)生物的基因組 DNA或 cDNA片段與適當(dāng)?shù)妮d體在體外重組后，轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，并通過(guò)一定的選擇機(jī)制篩選后得到大量的陽(yáng)性菌落 (或噬菌體 )，所
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