專(zhuān)題基因工程的基本操作程序-文庫(kù)吧資料
2024-09-24 20:30本頁(yè)面
【正文】 ，不能發(fā)育為一個(gè)新個(gè)體。 提示： 需要。 提示： 限制酶、 DNA連接酶。 ② 方法：感受態(tài)細(xì)胞法，即用 處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周?chē)h(huán)境中 DNA分子的生理狀態(tài) (這種細(xì)胞稱(chēng)為 )。 ② 常用受體細(xì)胞： 。 ③ 花粉管通道法：目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。 夯基礎(chǔ) ] 1．基因表達(dá)載體的構(gòu)建 (1)目的：使目的基因在受體細(xì)胞中 ，并且可以遺傳和 。 (3)熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 (Taq聚合酶 )能在高溫下保持其活性，是 PCR技術(shù)關(guān)鍵的工具之一。 解疑難 ] 1．提取目的基因方法的比較 方 法 基因文庫(kù)的構(gòu)建 PCR技術(shù) 擴(kuò)增 人工合成 基因組文庫(kù) 部分基因文庫(kù) (如cDNA文庫(kù) ) 過(guò) 程 供體細(xì)胞中的DNA ↓ 限制酶 許多 DNA片段 ↓ 連接 表達(dá)載體 ↓ 導(dǎo)入 受體細(xì)胞 ↓ 外源 DNA 擴(kuò)增，產(chǎn)生 特定性狀 ↓ 分離 目的基因 目的基因的 mRNA ↓ 反轉(zhuǎn)錄 單鏈 DNA ↓ 合成 雙鏈 DNA ↓ 插入 載體 ↓ 導(dǎo)入 受體菌群 (cDNA文庫(kù) ) ↓ 分離 目的基因 目的基因 DNA 高溫 解鏈 單鏈 DNA 與引 物結(jié)合 、 DNA 聚合 酶 大量目 的基因 蛋白質(zhì)的氨 基酸序列 ↓ 推測(cè) mRNA的核 苷酸序列 ↓ 推測(cè) 基因的核 苷酸序列 化學(xué) 合成 目的基因 方 法 基因文庫(kù)的構(gòu)建 PCR技術(shù) 擴(kuò)增 人工合成 基因組文庫(kù) 部分基因文 庫(kù) (如 cDNA 文庫(kù) ) 優(yōu) 點(diǎn) 操作簡(jiǎn)單 專(zhuān)一性強(qiáng) 可在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因 專(zhuān)一性強(qiáng)，可產(chǎn)生自然界中不存在的新基因 缺 點(diǎn) 工作量大、盲目性大、專(zhuān)一性差 操作過(guò)程較麻煩，技術(shù)要求過(guò)高 需要嚴(yán)格控制溫度、技術(shù)要求高 適用范圍小 2． PCR技術(shù)與生物體內(nèi) DNA復(fù)制的比較 DNA復(fù)制 PCR技術(shù) 區(qū)別 解旋方式 解旋酶催化 DNA在高溫作用下變性解旋 場(chǎng)所 細(xì)胞內(nèi) (主要在細(xì)胞核內(nèi) ) 細(xì)胞外 (主要在 PCR擴(kuò)增儀內(nèi) ) 酶 DNA解旋酶、普通的 DNA聚合酶等 耐熱的 DNA聚合酶 (Taq聚合酶 ) 溫度條件 細(xì)胞內(nèi)溫和條件 需控制溫度，在較高溫度下進(jìn)行 合成的對(duì)象 DNA分子 DNA片段或基因 聯(lián)系 ① 模板：均需要脫氧核苷酸鏈作為模板進(jìn)行物質(zhì)合成 ② 原料：均為四種脫氧核苷酸 ③ 酶：均需要 DNA聚合酶進(jìn)行催化 ④ 引物：均需要引物，使 DNA聚合酶從引物的 3′ 端開(kāi)始連接脫氧核苷酸 [特別提醒 ] (1)基因工程操作中，只有
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