基因工程的基本操作程序新-文庫吧資料
2024-09-24 21:09本頁面
【正文】 止子和標記基因等。科學家又在有啟動子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入 終止子 (抗蟲基因末端 )后，導入棉花受精卵，結果長成的植株，有了抗蟲能力。 起初把蘇云金芽孢桿菌的 抗蟲基因 插入載體質(zhì)粒中，然后導入棉花的受精卵中，結果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達。 ④ 目的基因不能單獨進入受體細胞， 必需以表達載體的方式攜帶進去。 ② 用到的 工具酶 ： 既用到 限制酶 切割載體、目的基因，又用到 DNA連接酶 將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學鍵都是磷酸二酯鍵。 ④方式：以 _____方式擴增，即 ____（ n為擴增循 環(huán)的次數(shù)） ⑤結果： 聚合酶鏈式反應 體外 特定 DNA片段 DNA復制和 DNA熱變性 四種脫氧核苷酸 DNA引物 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 指數(shù) 2n 使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴增 模板 DNA 要有一段已知目的基因的核苷酸序列 ? 過程： 變性、退火、延伸三步曲 ?變性： 加熱至 90～95℃ 雙鏈 DNA解鏈成為單鏈 DNA ?退火： 冷卻至 55～60℃ 引物與模板的單鏈 DNA的特定互補部位配對并結合 ?延伸： 加熱至 70～75℃ 以目的基因為模板，在 DNA聚合酶催化下，從引物開始延伸，合成互補的新 DNA鏈 變性 退火 延伸 Taq DNA聚合酶 (thermus aquaticus) 酶活性(%) 溫度 (℃) 40 50 60 70 80 90 100 100 80 60 40 20 美國黃石公園的熱泉 當然，除了 Taq，現(xiàn)在還發(fā)現(xiàn)了其他多種多樣的耐高溫的 DNA多聚酶 PCR的基本反應步驟 變性 9095?C 延伸 7075?C 退火 5560?C 整個過程可以在PCR儀中自動完成 循環(huán)30輪左右 PCR管 PCR技術擴增與 DNA復制的比較 PCR技術 DNA復制 相同點 原理 原料 條件 不同點 解旋方式 場所 酶 結果 堿基互補配對 四種脫氧核苷酸 模板、酶、 DNA在高溫下變性解旋 解旋酶催化 體外復制 細胞核內(nèi) 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細胞內(nèi)的 DNA聚合酶 大量的 DNA片段 形成整個 DNA分子 能量、引物 （ 3)人工合成 DNA測序； 根據(jù)已知的氨基酸序列推測 DNA序列； 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結構基因的核苷酸序列 推測 推測 目的基因 化學合成 DNA合成儀 (一般用于目的基因比較小，且序列又已知 ) 思考： 人工合成的目的基因 和 真正的基因 之間的序列是否是完全一致的？ 二、基因表達載體的構建 —— 基因工程的 核心 目的： 使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代 ，同時使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。 ③前提條件： _______________________； 反應體系： ___________、 ___________ 、 __________________、 ________________。 第五步，把該菌落挑選出來，從該菌落中再提取目的基因。 第三步，按 DNA雜交的方法進行雜交。
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