基因工程的基本操作程序ppt課件-文庫(kù)吧資料
2024-08-18 04:29本頁(yè)面
【正文】 法不同。 受體細(xì)胞 方法 植物細(xì)胞(體細(xì)胞 ) ① 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：目的基因插入 Ti質(zhì)粒的 TDNA→ 農(nóng)桿菌 → 導(dǎo)入植物細(xì)胞→ 穩(wěn)定維持和表達(dá) ② 基因槍法：是單子葉植物中常用的一種基因轉(zhuǎn)化方法，但是成本較高 ③ 花粉管通道法：這是我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的一種方法，是一種十分簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)的方法 動(dòng)物細(xì)胞 (受精卵 ) 顯微注射法：含有目的基因的表達(dá)載體提純 → 取卵(受精卵 )→ 顯微注射 → 受精卵發(fā)育 → 獲得具有新性狀的動(dòng)物 微生物細(xì)胞 (原核細(xì)胞 ) Ca2＋ 處理細(xì)胞 → 感受態(tài)細(xì)胞 → 表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合 → 感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子 → 目的基因隨受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制 以上幾種方法 ， 在導(dǎo)入受體細(xì)胞之前 ， 都必須進(jìn)行目的基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ， 也就是說(shuō)導(dǎo)入受體細(xì)胞的必須是重組 DNA 分子 ， 而不能直接導(dǎo)入目的基因。基因工程中常用的受體細(xì)胞有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。 2 ． 構(gòu)建的 基因表達(dá)載體的組成： 目的基因、啟動(dòng)子、終止子、 標(biāo)記基因 ( 如圖 ) 。 答案： B 2 ． 以下關(guān)于 PCR 技術(shù)的說(shuō)法 ， 不正確的是 ( ) A ． 生物體內(nèi) DNA 的復(fù)制也稱為 PCR B ． 該技術(shù)操作過(guò)程中要遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 C ． PCR 過(guò)程中 DNA 的數(shù)量呈指數(shù)形式擴(kuò)增 D ． 可在 PCR 擴(kuò)增儀中自動(dòng)完成 解析： PC R 是在生物體外復(fù)制特定 DNA 的技術(shù) ， 生物體內(nèi) DNA 的自我復(fù)制不叫 PCR 技術(shù)。這些存在于所有重組體內(nèi)的基因組 DNA 片段的集合 ， 即基因組文庫(kù) ， 它包含了該生物的所有基因。由于延伸后得到的產(chǎn)物同樣可以和引物結(jié)合 ， 因而每一次循環(huán)后目的基因的量可以增加一倍 ， 即成指數(shù)形式擴(kuò)增 ( 約為 2n， 其中 n 為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù) ) 。獲得真核細(xì)胞中目的基因時(shí)，一般用人工合成的方法。 3 ． 人工合成 如果基因比較小 ， 核苷酸序列又是已知的 ， 可以人工合成目的基因 ， 該法主要有兩種：反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。 2 ． P CR 技術(shù)擴(kuò)增 PCR 技術(shù)是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的 DNA 的核酸合成技術(shù)。 如果基因文庫(kù)中含有一種生物的一部分基因 ， 這個(gè)文庫(kù)就叫做部分基因 文庫(kù)：如以某生物的 mRNA 反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ) DN A( cDNA ) 片段 ， 并與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中的 cDN A 文庫(kù)。 ( √ ) 要點(diǎn)一 目的基因的獲取 1 ． 有哪些方法可以獲取目的基因 ， 各有什么優(yōu)缺點(diǎn)？ 2 ． PC R 擴(kuò)增目的基因的原理是什么？ 歸納提升 獲取目的基因是基因工程實(shí)施的第一步 ， 有三 種途徑可以獲取目的基因，如下圖所示： 1 ． 從基因文庫(kù)獲取 建立基因文庫(kù)的目的就是為獲得大量的目的基因做準(zhǔn)備。 ( √ ) 5 ． 基因工程常用的受體細(xì)胞都是動(dòng)植物的體細(xì)胞。 3 ． 標(biāo)記基因的作用是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因 ， 從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。 ( ) 2 ． 基因工程操作程序 的核心步驟是目的基因的獲取。 四、目的基因的檢測(cè)與鑒定 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的 染色體 上的目的基因 ， 采用方法是 DNA 分子雜交法 ；檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出 mRNA ，采用的方法是 分子雜交法 ；檢測(cè)目的基因是否翻譯成 蛋白質(zhì) ， 采用的方法是 抗原 — 抗體雜交法 ；個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定 ， 如抗蟲、抗病的 接種 實(shí)驗(yàn)等。 2 ． 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞的常用方法為 顯微注射法 。 5 ． 標(biāo)記基因： 鑒別 受體細(xì)胞中是否含有
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