基因工程基本操作程序-文庫(kù)吧資料
2025-01-11 17:52本頁(yè)面
【正文】 ,對(duì)大多數(shù)單子葉植物無(wú)感染能力Ti質(zhì)粒 的 T—DNA 可 轉(zhuǎn)移 至受體細(xì)胞并 整合 到其染色體上轉(zhuǎn)化過(guò)程:Ti質(zhì)粒目的基因構(gòu)建表達(dá)載體導(dǎo)入 植物細(xì)胞整合 植物細(xì)胞染色體 DNA表達(dá) 新性狀轉(zhuǎn)入 農(nóng)桿菌整合 到染色體上轉(zhuǎn)移 至受體細(xì)胞（ 2）基因槍法 基因槍法又稱(chēng)微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體 DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是 ：（ 1） 生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動(dòng)子才能比較有利于基因的表達(dá)；（ 2） 通過(guò) cDNA文庫(kù)獲得的目的基因沒(méi)有啟動(dòng)子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無(wú)法轉(zhuǎn)錄；（ 3） 目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；（ 4） 為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等；（ 5） 有時(shí)需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要加上可以標(biāo)識(shí)存在部位的基因（或做成目的基因與標(biāo)識(shí)基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等① 載體 與 表達(dá)載體 的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分 DNA片段。C重組體 載體自連 目的基因 自連目的基因與運(yùn)載體結(jié)合基因表達(dá)載體的構(gòu)建 —— 核心質(zhì)粒 DNA分子一個(gè) 切口兩個(gè)黏性末端兩個(gè) 切口獲得目的基因DNA 連接酶重組 DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種 限制酶：它們所處的位置和有什么作用？a、目的基因b、啟動(dòng)子c、終止子d、標(biāo)記基因位于基因的 首端位于基因的 末端 ,終止轉(zhuǎn)錄檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞基因表達(dá)載體的作用a使目的基因在受體細(xì)胞中 穩(wěn)定存在 并 遺傳 給子代b、同時(shí)使目的基因能 表達(dá)和發(fā)揮作用思考： 作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？不可以。（ 2）用 ___________切斷目 的基因，使其產(chǎn)生 _____ ____________。，引物與模板末端結(jié)合，在 DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最后合成 2個(gè) DNA分子，此過(guò)程中的原料 ，遵循的原則是 。 c、延伸 （ 70℃75℃ ）：在Taq酶 的作用下，合成與模板互補(bǔ)的 ________。如：根據(jù)基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色體上的位置 基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 mRNA 基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性（ 4）從基因文庫(kù)中得到目的基因的方法——直接分離法 (鳥(niǎo)槍法 )直接分離法供體細(xì)胞中的 DNA許多 DNA片段運(yùn)載體限制酶受體細(xì)胞 產(chǎn)生特定性狀導(dǎo)入外源 DNA擴(kuò)增目的基因分離(鳥(niǎo)槍法 )回顧必修課中目的基因的獲取方法有哪些？多用于原核生物某生物體內(nèi)全部 DNA 許多 DNA片段受體菌群體限制酶與運(yùn)載體連接導(dǎo)入基因組文庫(kù)cDNA反轉(zhuǎn)錄受體菌群體與運(yùn)載體連接導(dǎo)入部分基因文庫(kù)（ cDNA文庫(kù)）基因組 DNA文庫(kù)與 cDNA文庫(kù)的比較某種生物某個(gè)時(shí)期的 mRNA基因組 DNA文庫(kù)與 cDNA文庫(kù)的比較利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因① 概念： PCR全稱(chēng)為 _______________，是一項(xiàng) 在生物 ____復(fù)制 ___________的核酸合成技術(shù)。即不含 非編碼區(qū)和 內(nèi)含子（ 3）構(gòu)建基因文庫(kù)的目的 怎樣從基因文庫(kù)中得到我們所需的目的基因呢 ? 便于在 不知道目的基因核苷酸序列的情況下，獲得所需的目的基因。：編碼蛋白質(zhì) ,連續(xù)不間斷編碼區(qū)非編碼區(qū)原核細(xì)胞的 基因結(jié)構(gòu) ② 調(diào)控遺傳信息表達(dá) ,上 游的 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn) :真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū) 非編碼區(qū)內(nèi)含子 外顯子 啟動(dòng)子 終止子編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 真核細(xì)胞的 基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用 ,上游有 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn) (啟動(dòng)子 )。從基因文庫(kù)中獲取目的基因（ 1） .基因文庫(kù) 將含有某種生物不同基因的許多 DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱(chēng)為基因文庫(kù)?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蚰康幕虻墨@取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測(cè)與鑒定基因工程基本操作的四個(gè)步驟一、目的基因的獲取(一 )、目的基因主要是 ______________________編碼蛋白質(zhì)的基因（二）、獲取目的基因的常用方法有哪些 ?從基因文庫(kù)中獲取利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增人工合成閱讀教材 P811如：與生物抗性相關(guān)的基因、與優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因、與生物藥物和保健品相關(guān)的基因、與毒物降解相關(guān)的基因、與工業(yè)用酶相關(guān)的基因、具調(diào)控作用的因子等。種類(lèi)基因組文庫(kù)： 含有一種生物的 全部 基因部分基因文庫(kù)： 只包含了一種生物的 部分 基因，如： cDNA文庫(kù)非編碼區(qū) 非編碼區(qū)編碼區(qū)RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)外顯子 內(nèi)含子 終止子基因的結(jié)構(gòu)啟動(dòng)子原核真核原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū) 非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 與 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)子 終止子① 不編碼蛋白質(zhì)。非編碼序列： 包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子與 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)原核細(xì)胞 真核細(xì)胞不同點(diǎn)編碼區(qū)是 _____的，邊 _________邊 _________編碼區(qū)是間隔的、_____的，先 _____后 _____相同點(diǎn) 都由能夠編碼蛋白質(zhì)的 ______和具有調(diào)控作用的 ______區(qū)組成的原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)非編碼轉(zhuǎn)錄翻譯轉(zhuǎn)錄翻譯1．下列關(guān)于基因結(jié)構(gòu)的認(rèn)識(shí)中，正確的是 （ ）A．大豆基因中內(nèi)
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