基因工程的基本操作程序最終-文庫吧資料
2025-01-11 17:53本頁面
【正文】 酶： 既用到限制酶切割載體，又用到 DNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵 ③ 啟動子、終止子 對于目的基因表達(dá)必不可少 ④ 目的基因不能單獨進(jìn)入受體細(xì)胞， 必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。 氫鍵 單鏈 DNA 雙鏈 DNA鏈 d、循環(huán) 目的： 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用 。 循環(huán) 變性 退火 延伸 ① 概念： PCR全稱為 _______________，是一項 在生物 ____復(fù)制 ___________的核酸合成技術(shù) ③ 條件： _______________________ 前提條件 _______________、 ___________ 、 ___________. ② 原理： __________ ④ 方式： 以 _____方式擴增，即 ____（ n為擴增循 環(huán)的次數(shù)） ⑤ 結(jié)果： 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 體外 特定 DNA片段 DNA復(fù)制 一段已知目的基因的核苷酸序列 四種脫氧核苷酸 一對引物 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶（ Taq酶） 指數(shù) 2n 使目的基因的片段在 短時間 內(nèi)成百萬倍地擴增 (二 )利用 PCR技術(shù)擴增目的基因 ⑥ 過程： a、 DNA變性 （ 90℃ 95℃ ）：雙鏈 DNA模板 在熱作用下， _____斷裂，形成 ___________ b、退火 （ 復(fù)性 55℃ 60℃ ）：系統(tǒng)溫度降低，引 物與 DNA模板結(jié)合，形成局部 ________。 已知 目的基因序列時 人工合成： 基因比較小，核苷酸序列已知 DNA合成儀 PCR技術(shù)擴增目的基因： PCR—— 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 是一項生物 體外復(fù)制 特定 DNA片段的核酸合成 技術(shù) 。 目的基因的 mRNA 單鏈 cDNA 反轉(zhuǎn)錄酶 雙鏈 DNA （即目的基因／雙鏈 cDNA） DNA聚合酶 (1)反轉(zhuǎn)錄法 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列 目的基因 推測 化學(xué)合成 推測 (2)化學(xué)合成法：根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 合成的基因中均無內(nèi)含子和啟動子 雜交雙鏈（ RNADNA) 核酸酶 H ? 上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點？ 優(yōu)點 缺點 鳥槍法 反轉(zhuǎn)錄法 根據(jù)已知氨基酸合成 DNA法 操作簡便廣泛使用 工作量大，盲目，分離出來的有時并非一個
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