ae3-基因工程-基因工程的基本操作程序1-文庫吧資料
2025-02-22 14:07本頁面
【正文】 落中是否有目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。 前三步的處理十分繁鎖，為保證目的基因得到有效利用，通常用大量的受體細(xì)胞來接受不多的目的基因。 步驟四：目的基因的檢測與鑒定 四環(huán)素 抗性基因 氨芐青霉 素抗性基因 不能，受體細(xì)胞必須表現(xiàn)出特定的性狀，才能說明目的基因完成了 表達(dá) 。 2）使含有目的基因的 重組質(zhì)粒進(jìn)入 受體細(xì)胞。 大腸桿菌細(xì)胞最常用的轉(zhuǎn)化方法是 : 首先用 Ca2+ 處理細(xì)胞 ,以 增大 細(xì)菌 細(xì)胞壁的通透性 ,使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中 DNA分子的生理狀態(tài) ,這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞 . 第二步是將重組表達(dá)載體 DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合 ,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收 DNA分子 ,完成轉(zhuǎn)化過程 . 第二步 目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)，隨其繁殖而 復(fù)制 ，由于細(xì)菌 繁殖的速度 非?？?，在很短的時(shí)間內(nèi)就能獲得 大量 的目的基因。 （ 2） λ噬菌體是一種細(xì)菌病毒，其環(huán)狀雙鏈 DNA可以作為目的基因的載體。 （ 1）質(zhì)粒是細(xì)菌染色體 DNA以外的環(huán)狀雙鏈 DNA分子，它能自我復(fù)制，也可整合到細(xì)胞染色體 DNA中與其一起表達(dá)。 （ 4）基因槍法：在金屬微粒上涂一層目的基因，然后發(fā)射到宿主細(xì)胞中。 （ 2）顯微注射法：利用微量注射器在顯微鏡下直接把目的基因注入宿主細(xì)胞。 步驟三：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ①直接導(dǎo)入法有電擊、顯微注射、直接吸收、基因槍等方法。 ? 常用的受體細(xì)胞： 有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動植物細(xì)胞等。 2）用 同一種 限制酶 切斷目的基因 ，使其產(chǎn)生 相同 的 黏性末端 。建立和使用基因文庫是分離高等真核生物基因的有效手段，對于基因定位和基因工程的研究都很有用。通過分子雜交
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