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ae3-基因工程-基因工程的基本操作程序1(已改無錯字)

2023-03-09 14:07:47 本頁面
  

【正文】 細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中 DNA分子的生理狀態(tài) ,這種細胞稱為感受態(tài)細胞 . 第二步是將重組表達載體 DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合 ,在一定的溫度下促進感受態(tài)細胞吸收 DNA分子 ,完成轉(zhuǎn)化過程 . 第二步 目的基因在受體細胞內(nèi),隨其繁殖而 復制 ,由于細菌 繁殖的速度 非???,在很短的時間內(nèi)就能獲得 大量 的目的基因。 1)將細菌用 CaCl2處理 ,以 增大 細菌 細胞壁的通透性 。 2)使含有目的基因的 重組質(zhì)粒進入 受體細胞。 3)目的基因在受體細胞內(nèi),隨其繁殖而復制 ,由于細菌 繁殖的速度 非??欤诤芏痰臅r間內(nèi)就能獲得 大量 的目的基因。 步驟四:目的基因的檢測與鑒定 四環(huán)素 抗性基因 氨芐青霉 素抗性基因 不能,受體細胞必須表現(xiàn)出特定的性狀,才能說明目的基因完成了 表達 。 ? 受體細胞攝入 DNA分子后就說明目的基因完成了表達嗎? 若不能表達,要對抗蟲基因再進行 修飾 。 前三步的處理十分繁鎖,為保證目的基因得到有效利用,通常用大量的受體細胞來接受不多的目的基因。這樣,處理的受體細胞中真正攝入了目的基因的很少,必須將它從中檢測出來。 無表達產(chǎn)物 無表達產(chǎn)物 有表達產(chǎn)物 無表達產(chǎn)物 細菌的檢測,將每個受體細胞單獨培養(yǎng)形成菌落,檢測菌落中是否有目的基因的表達產(chǎn)物。淘汰無表達產(chǎn)物的菌落,保留有表達產(chǎn)物的進一步培養(yǎng)、研究。 多細胞生物的檢測,將每個受體細胞單獨培養(yǎng)并誘導發(fā)育成完整個體,檢測這些個體是否攝入目的基因,攝入的基因是否表達(是否表現(xiàn)出相應的性狀)。淘汰無變化的個體,保留有相應變化的個體進一步培養(yǎng)、研究。 例:用棉鈴飼喂棉鈴蟲,如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀,說明未攝入目的基因或攝入目的基因未表達。如蟲吃后中毒死亡,則說明攝入了抗蟲基因并
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