x312基因工程的基本操作程序-在線瀏覽
2024-10-22 18:16本頁面
【正文】 23小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。 b、 復性（ 55℃ 60℃ ）：系統溫度降低，引物 與 DNA模板結合，形成局部 。 氫鍵 單鏈 DNA雙鏈 DNA鏈 隨堂闖關隨堂闖關34 ? 從基因文庫中獲取 ? 利用 PCR技術擴增 ? 利用化學方法人工合成 歸納：獲取目的基因的方法 DNA合成儀 DNA序列自動測序儀 PCR擴增儀 35 基因表達載體的構建 —— 核心 質粒 DNA分子 一個 切口 兩個 黏性末端 兩個 切口 獲得目的基因 DNA 連接酶 重組 DNA分子（重組質粒） 同一種 限制酶 目的基因與運載體的結合過程，實際上是不同來源的基因重組的過程。 復制原點 插入基因 終止子 抗生素抗性基因 表達載體 啟動子 37 將目的基因導入植物細胞 ? 農桿菌轉化法 ? 基因槍法 ? 花粉管通道法 38 將目的基因導入動物細胞 ? 顯微注射法 （將基因表達載體提純，用顯微儀注射到受精卵中） 39 將目的基因導入微生物細胞 Ca2＋ 處理受體細胞成為感受態(tài)細胞，再進行混合。 40 目的基因的檢測與鑒定 ? 檢測 : ? 是否插入目的基因 ? 是否轉錄 ? 是否翻譯 ? 鑒定 : ? 功能活性鑒定 ? 抗性鑒定 41 DNA分子雜交技術 DNARNA分子雜交技術 抗原 — 抗體雜交技術 檢驗受體細胞染色體的 DNA上是否插入了目的基因 檢驗目的基因是否轉錄出了 mRNA 檢驗目的基因是否表達出了蛋白質 個體生物學檢驗 個體生物學性狀觀察 42 DNA 附著在膜上 硝化纖維素 加探針 報告基因（含熒光素分子） 變性 DNA雜交 （如檢測 SARS病毒等） a b c d 43 ①檢測是否插入 目的基因 ，利用 DNA分子雜交技術 ，目的基因DNA一條鏈（作探針）與受體細胞中提取的 DNA雜交，看是否有雜交帶。 ③檢測目的基因是否翻譯成 蛋白質 。 ④還可以進行 個體水平 的鑒定，根據其 性狀 。 44 大量的受體細胞接受不多的目的基因。 將每個受體細胞單獨培養(yǎng)形成菌落，檢測菌落中是否有目的基因的表達產物。 無表達產物 無表達產物 有表達產物 無表達產物 45 歸納 : 基因工程的基本操作程序 1. 獲取目的基因 ? 從基因文庫 ? 利用 PCR ? 化學方法人工合成 2. 構建基因表達載體 ? 目的基因、啟動子、終止子、標記基因 3. 將目的基因導入受體細胞 ? 農桿菌轉化法、顯微注射法 4. 目的基因的檢測與鑒定 ? 檢測：是否插入、轉錄、翻譯 46 的名詞及對應的內容，正確的組合是 下列屬于獲取目的基因的方法的是 ① 利用 mRNA反轉錄形成 ②從基因組文庫中提取 ③
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