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2024-09-15 04:29本頁面
【正文】 PC R 技術(shù)的比較 比較 DNA復(fù)制 PCR技術(shù) 區(qū)別 解旋 方式 解旋酶催化 DNA在高溫作用下變性解旋 場所 細(xì)胞內(nèi) (主要在細(xì)胞核內(nèi) ) 細(xì)胞外 (主要在PCR擴(kuò)增儀內(nèi) ) 區(qū)別 酶 DNA解旋酶、普通的 DNA聚合酶等 耐熱的 DNA聚合酶(Taq聚合酶 ) 溫度 條件 細(xì)胞內(nèi)溫和條件 需控制溫度，在較高溫度下進(jìn)行 合成的 對象 DNA分子 DNA片段或基因 聯(lián)系 ① 模板：均需要脫氧核苷酸鏈作為模板進(jìn)行物質(zhì)合成 ② 原料：均為四種脫氧核苷酸 ③ 酶：均需要 DNA聚合酶進(jìn)行催化 ④ 引物：均需要引物，使 DNA聚合酶從引物的 3′端開始連接脫氧核苷酸 (1) 真核細(xì)胞的基因編碼區(qū)含有不 能表達(dá)的內(nèi)含子 ，因此，不能直接用于基因的擴(kuò)增和表達(dá)。 ( 2 )PCR 擴(kuò)增的過程： 目的基因 DNA 受熱變性后解鏈為單鏈 ， 引物與單鏈相應(yīng)的互補(bǔ)序列結(jié)合 ， 然后在 DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸 ， 如此重復(fù)循環(huán)多次。 典例研析 【典例 1 】 觀察分析如圖 ， 該圖表示的過程是 ( ) A ． 構(gòu)建基因組文庫 B ．構(gòu)建 cDNA 文庫 C ． 構(gòu)建基因表達(dá)載體 D ．構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工程 菌 解析： 分析圖解可知 ， 圖中將某種生物的基因組 DNA利用限制酶切割成一定大小的片段 ， 并與合適的載體重組后導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)行克隆。 答案： A 即時(shí)演練 1 ． 在已知某小片段基因堿基序列的情況下 ， 獲得該基因的最佳方法是 ( ) A ． 用 mRNA 為模板反轉(zhuǎn)錄合成 DNA B ． 以 4 種脫氧核苷酸為原料人工合成 C ． 將供體 DNA 片段轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞中 ， 再進(jìn)一步篩選 D ． 由蛋白質(zhì)的氨基酸序列推測 m RNA 解析： 現(xiàn)在已知的條件只是某小片段基因的堿基序列 ， 而沒有相應(yīng)的 mRN A 和蛋白質(zhì)的氨基酸序列 ， 所以只能以 4 種脫氧核苷酸為原料來人工合成。 答案： A 要點(diǎn)二 基因表達(dá)載體的構(gòu)建與將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的 方法比較 1 ． 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法有哪些？它們有何不同？ 2 ． 是直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞嗎？ 歸納提升 1 ．構(gòu)建目的：其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在 ， 并且可以遺傳給下一代 ， 同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。 3 ． 目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi) ， 并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程 ， 稱為轉(zhuǎn)化。受體細(xì)胞不同 ， 導(dǎo)入方法不同。 典例研析 【典例 2 】 目的基因與運(yùn)載體結(jié)合所需的條件有( ) ① 同一種限制酶 ② 具有抗性基因的質(zhì)粒 ③ RNA聚合酶 ④ 目的基因 ⑤ DNA 連接酶 ⑥ 四種脫氧核苷酸 A ． ①②③④⑤⑥ B ． ①②④⑤⑥ C ． ①②③④⑤ D ． ①②④⑤ 解析： (1) 目的基因與運(yùn)載體結(jié)合時(shí) ， 首先要用同一種限制酶切割目的基因和運(yùn)載體 ， 以形成相同的黏性末端 ， ① 正確； (2) 作為運(yùn)載體的質(zhì)粒要具有抗性基因作為標(biāo)記基因 ， 便于篩選 ， ② 正確； (3) 目的基因與運(yùn)載體結(jié)合需要 DNA 連接酶 ， 但不需要 R NA 聚合酶 ， ③ 錯誤；(4) 目的基因與運(yùn)載體結(jié)合當(dāng)然需要目的基因 ， ④ 正確； (5) 目的基因與運(yùn)載體結(jié)合 需要 D NA 連接酶 ， ⑤ 正確；(6) 目的基因與運(yùn)載體結(jié)合不需要四種脫氧核苷酸 ， ⑥ 錯誤。目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ， 該方法比較經(jīng)濟(jì) 有效 ， 還有基因槍法和花粉管
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