12-基因工程的基本操作程序-在線瀏覽
2025-04-10 14:57本頁面
【正文】 ℃ 65℃ ）：系統(tǒng)溫度降低，引 物與 DNA模板結(jié)合，形成局部 ________。 才能確定目的基因是否真正在受體細胞中穩(wěn)定遺傳和正確表達。 基因工程的基本操作程序 目的基因的獲取 基因表達載體的構(gòu)建 將目的基因?qū)胧荏w細胞 目的基因的檢測與鑒定 基因工程基本操作的四個步驟 有了目的基因，我們才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性。 使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并可進行遺傳、表達和發(fā)揮作用 載體進入受體細胞穩(wěn)定表達，才能實現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物中的轉(zhuǎn)化。 一、目的基因的獲取 (一 )、目的基因主要是 ______________________ 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 請舉出三個以上的例子 （二）、獲取目的基因的常用方法有哪些 ? 從基因文庫中獲取 利用 PCR技術(shù)擴增 人工合成 請閱讀 P9第一和二兩段 一、目的基因的獲取 （一）從基因文庫中直接獲取 ： 概念見 P9 :按外源 DNA片段的來源分類 種類 基因組 DNA文庫： 含有一種生物的 全部 基因 部分基因文庫： 只包含了一種生物的 部分 基因， 如： cDNA文庫 為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得所需的目的基因。 c、延伸 （ 70℃ 75℃ ）：在 Taq酶的作用下， 合成與模板互補的 ________。 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列 目的基因 推測 推測 化學(xué)合成 2）根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 ： 人工合成的目的基因 二、基因表達載體的構(gòu)建 —— 基因工程的核心 目的： 所需物質(zhì)： 使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。表達載體在載體基礎(chǔ)上增加了 目的基因、啟動子、終止子 三部分結(jié)構(gòu) ② 用到的工具酶： 既用到限制酶切割載體，又用到 DNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵 ③ 啟動子、終止子 對于目的基因表達必不可少 ④ 目的基因不能單獨進入受體細胞， 必需以表達載體的方式攜帶進去。 ③過程： ④優(yōu)點 （ 2） 基因槍法 （ 3） 花粉管通道法 將目的基因?qū)雱游锛毎? ① 方法：顯微注射法 ② 程序： 目的基因表達載體提純 取卵（受精卵） 顯微注射 受精卵 新性狀動物 將目的基因?qū)胛⑸锛毎? ① 原核生物特點：繁殖快、單細胞、遺傳物質(zhì)少 ② 方法： 用 Ca2+處理細胞 感受態(tài)細胞 表達載體與感受態(tài)細胞混合 感受態(tài)細胞吸收 DNA分子
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