人教版選修三12基因工程的基本操作程序-在線(xiàn)瀏覽
2025-02-13 17:04本頁(yè)面
【正文】 0 ～95℃ ,_______________ 。 如此重復(fù)循環(huán)多次 。 DNA解鏈為單鏈 55～ 60 想一想 1． PCR過(guò)程中 ， 需要解旋酶嗎 ？ 所需要的DNA聚合酶應(yīng)具有什么特點(diǎn) ？ 【 提示 】 PCR過(guò)程中， DNA雙鏈解開(kāi)是在高溫下完成的，不需要解旋酶；由于 PCR過(guò)程溫度較高，所以需要能耐高溫的 DNA聚合酶。 二 、 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 基因表達(dá)載體的組成：必須有啟動(dòng)子、____________、終止子以及標(biāo)記基因等。 (1)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：采用最多的方法是 ________轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法。 此方法的受體細(xì)胞多是 _________。 ②將重組表達(dá)載體 DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定溫度下完成轉(zhuǎn)化過(guò)程。 四 、 目的基因的檢測(cè)與鑒定 1..首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的 DNA上是否插入了 _________, 方 法 是 采 用______________技術(shù) 。 目的基因 DNA分子雜交 mRNA 分子雜交 ________,從 分 子 水 平 檢 測(cè) 的 方 法 是 采 用______________技術(shù) 。如需要做抗蟲(chóng)或抗病的接種實(shí)驗(yàn)等。 (1)反轉(zhuǎn)錄法，主要用于相對(duì)分子質(zhì)量較大而又不知其序列的基因，它是以目的基因的mRNA為模板，借助反轉(zhuǎn)錄酶合成堿基互補(bǔ)的單鏈 DNA，然后在 DNA聚合酶的作用下合成雙鏈 DNA，其過(guò)程如下： (2)化學(xué)合成法，即依照某一蛋白質(zhì)的氨基酸序列，通過(guò)密碼子推算出其基因序列，然后直接合成目的基因，其過(guò)程如下： (2023下面為形成 cDNA的過(guò)程和 PCR擴(kuò)增過(guò)程示意圖。 (2)③ 過(guò)程也稱(chēng)為 DNA的變性，此過(guò)程在溫度高達(dá) 90～ 95 ℃ 時(shí)才能完成，說(shuō)明 DNA分子具有 ________性。 (4)如果 RNA單鏈中有堿基 100個(gè)，其中 A占25%， U占 15%，則通過(guò)該過(guò)程合成的一個(gè)雙鏈 DNA片段中有胞嘧啶 ________個(gè)。中間體中的 RNA再經(jīng)過(guò) RNA酶 H水解，而以剩下的負(fù)鏈 DNA復(fù)制成雙鏈 DNA。②過(guò)程是以單鏈 DNA復(fù)制獲得雙鏈 DNA的過(guò)程需要 DNA聚合酶催化。⑤過(guò)程在 70～ 75 ℃ 環(huán)境下進(jìn)行，所需要的酶能夠耐高溫。 (2)無(wú)。 (2)PCR技術(shù)的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列 ,以便根據(jù)這一序列合成引物 。 (1)啟動(dòng)子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的 DNA片段，位于基因的首端。 (2)目的基因：編碼相關(guān)蛋白質(zhì) ， 形成基因工程產(chǎn)品或產(chǎn)生新的生物性狀 。 (4)標(biāo)記基因：一般為抗生素抗性基因或熒光基因等，其作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因 (目的基因是否導(dǎo)入成功 )。 特別提醒 (1)用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含目的基因的 DNA分子的目的是產(chǎn)生相同的黏性末端 ， 便于兩者完成拼接 。 (2023已知目的基因的兩端分別含有包括EcoRⅠ 、 BamHⅠ 在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。若要從這些連接物中分離出重組質(zhì)粒，需要對(duì)這些連接產(chǎn)物進(jìn)行______________________ ______________________________________。 (3)目的基因表達(dá)時(shí)， RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是 ________，其合成的產(chǎn)物是_____________________________________________________________________
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