12基因工程的基本操作程序_2-在線瀏覽
2025-02-05 02:48本頁面
【正文】 槍法： 供體細胞中的 DNA 許多 DNA片段 運載體 限制酶 與載體連接 受體細胞 產(chǎn)生特定性狀 導(dǎo)入 外源 DNA擴增 目的基因 分離 (直接分離法 ) 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的 信使 RNA為模板，再 反轉(zhuǎn)錄酶 的催化下反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈DNA，然后在 DNA聚合酶的作用下合成雙鏈DNA，即 cDNA，從而獲得所需的基因。 （二）利用 PCR技術(shù)擴增目的基因 1 2 3 4 5 22 55 72 94 時間（ min） 溫度 （ ℃ ） 適溫延伸 高溫變性 低溫復(fù)性 重復(fù) 1～ 3步 30輪 DNA復(fù)制的方向： DNA的合成方向總是從子鏈的 5’端向 3’端 延伸 變性 → 復(fù)性（退火） → 延伸 （二） PCR的反應(yīng)過程： ? 過程： 變性、退火、延伸三步曲 ?變性： 加熱至 90～95℃ 雙鏈 DNA解鏈成為單鏈 DNA ?退火： 冷卻至 55～60℃ 部分引物與模板的單鏈 DNA的特定互補部位相配對和結(jié)合 ?延伸： 加熱至 70～75℃ 以目的基因為模板，合成互補的新 DNA鏈 變性 退火 延伸 PCR的基本反應(yīng)步驟 變性 9095?C 延伸 7075?C 退火 5560?C PCR總結(jié)： PCR技術(shù)擴增與 DNA復(fù)制的比較 堿基互補配對 四種脫氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高溫下變性解旋 解旋酶催化 體外復(fù)制 細胞內(nèi) 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細胞內(nèi)的 DNA聚合酶 大量的 DNA片段 形成整個 DNA分子 ? 從基因文庫中獲取 ? 利用 PCR技術(shù)擴增 ? 利用化學(xué)方法人工合成 歸納：獲取目的基因的方法 用一定的 _________切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切 口，露出 ____________。 將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的 ______處， 再加入適量 ___________，形成了一個重組 DNA分子（重組質(zhì)粒） 限制酶 黏性末端 同一種限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA連接酶 : 二、構(gòu)建 表達 載體 —— 核心 從細胞中分離出 DNA 從大腸桿菌中提取質(zhì)粒 限制 酶 提取目的基因 限制酶 目的基因與運載體結(jié)合 DNA連 接酶 目的基因?qū)胧荏w細胞 目的基因的表達與檢測 基因工程操作的基本步驟 科學(xué)家在培育抗蟲棉時，經(jīng)歷了多次失敗，才獲得成功。
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