12基因工程的基本操作程序_2-免費閱讀
【正文】 DNA分子雜交示意圖 采用一定的技術手段，將兩種生物的 DNA分子的單鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補的堿基序列，那么，互補的堿基序列就會結合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。 ? 將目的基因?qū)胧荏w細胞的原理： 借鑒 細菌或病毒侵染細胞 的途徑。 將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的 ______處， 再加入適量 ___________，形成了一個重組 DNA分子（重組質(zhì)粒） 限制酶 黏性末端 同一種限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA連接酶 : 二、構建 表達 載體 —— 核心 從細胞中分離出 DNA 從大腸桿菌中提取質(zhì)粒 限制 酶 提取目的基因 限制酶 目的基因與運載體結合 DNA連 接酶 目的基因?qū)胧荏w細胞 目的基因的表達與檢測 基因工程操作的基本步驟 科學家在培育抗蟲棉時，經(jīng)歷了多次失敗，才獲得成功。 ①不能轉錄為信使 RNA，不能 編碼蛋白質(zhì)。 ：能轉錄相應的信使 RNA，能 編碼蛋白質(zhì) 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 原核細胞的 基因結構 ②有調(diào)控遺傳信息表達的核 苷酸序列，在該序列中， 最重要的是位于編碼區(qū)上 游的 RNA聚合酶結合位點。 起初把蘇云金芽孢桿菌的 抗蟲基因 插入載體質(zhì)粒中，然后導入棉花的受精卵中，結果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達。 （一）轉化： 目的基因進入 _________內(nèi)，并且在 受體細胞內(nèi)維持 _____和 _____的過程 受體細胞 穩(wěn)定 表達 （二）方法 將目的基因?qū)? 植物細胞 將目的基因?qū)? 動物細胞 將目的基因?qū)? 微生物細胞 農(nóng)桿菌轉化法 基因槍法 花粉管通道法 —— 顯微注射法 —— 感受態(tài)細胞 ? 農(nóng)桿菌轉化法 ? 基因槍法 ? 花粉管通道法 （ 1）農(nóng)桿菌轉化法 ①特點： 易感染雙子葉植物和裸子植物，對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力 ②原理： Ti質(zhì)粒上的 TDNA可以轉移到受體細胞，并整合到受體細胞染色體的 DNA上。 （二）鑒定（個體生物學水平） 檢測目的基因是否轉錄出了 mRNA 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等 ① 方法 : 分 子 雜 交 方法 : 抗原 抗體雜交 ②過程 :用上述探針和轉基因生物的 mRNA雜交 ,若出現(xiàn)雜交帶 ,表明
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