12基因工程的基本操作程序_2-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識(shí)，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？ 有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價(jià)結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。 （一）檢測(cè) 基因探針 ： 是一段帶有檢測(cè)標(biāo)記，且序列已知的，與目的基因互補(bǔ)的核酸序列。 是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。 （二）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 1 2 3 4 5 22 55 72 94 時(shí)間（ min） 溫度 （ ℃ ） 適溫延伸 高溫變性 低溫復(fù)性 重復(fù) 1～ 3步 30輪 DNA復(fù)制的方向： DNA的合成方向總是從子鏈的 5’端向 3’端 延伸 變性 → 復(fù)性（退火） → 延伸 （二） PCR的反應(yīng)過(guò)程： ? 過(guò)程： 變性、退火、延伸三步曲 ?變性： 加熱至 90～95℃ 雙鏈 DNA解鏈成為單鏈 DNA ?退火： 冷卻至 55～60℃ 部分引物與模板的單鏈 DNA的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合 ?延伸： 加熱至 70～75℃ 以目的基因?yàn)槟０?，合成互補(bǔ)的新 DNA鏈 變性 退火 延伸 PCR的基本反應(yīng)步驟 變性 9095?C 延伸 7075?C 退火 5560?C PCR總結(jié)： PCR技術(shù)擴(kuò)增與 DNA復(fù)制的比較 堿基互補(bǔ)配對(duì) 四種脫氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高溫下變性解旋 解旋酶催化 體外復(fù)制 細(xì)胞內(nèi) 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細(xì)胞內(nèi)的 DNA聚合酶 大量的 DNA片段 形成整個(gè) DNA分子 ? 從基因文庫(kù)中獲取 ? 利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增 ? 利用化學(xué)方法人工合成 歸納：獲取目的基因的方法 用一定的 _________切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切 口，露出 ____________。 轉(zhuǎn)錄開(kāi)始后， RNA聚合酶沿 DNA分子移動(dòng)，并以 DNA分子的一條鏈為模板合成 RNA。 獲取方法： （ 1）從 基因文庫(kù) 中獲取目的基因； （ 2）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因； （ 3）通過(guò) DNA合成儀用化學(xué)方法直接合成 （一）從基因文庫(kù)中獲取目的基因 ？ 將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到 受體菌的群體 中，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫(kù)?？茖W(xué)家又在有啟動(dòng)子、抗蟲(chóng)基因
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1