分子生物學要點-文庫吧資料
2025-04-13 03:17本頁面
【正文】 酸二酯鍵，因此，正在延伸的DNA鏈不能繼續(xù)延伸。（十一）SANGER雙脫氧鏈終止法的原理？答DNA 鏈中核苷酸以3’,5’磷酸二酯鍵連接，合成DNA所用的底物是 2’脫氧核苷三磷酸。如果在 多克隆位點上插入外源DNA片段，將使lac Z基因滅活，不能生成半乳糖苷酶，結果菌落出現(xiàn)白色。（十）、藍白篩選的原理？答:某些質粒帶有大腸桿菌的半乳糖苷酶基因片段，在半乳糖苷酶基因的 基因區(qū)外又另外引入了一段含多種單一限制酶位點的DNA序列。 （2）、良好載體的條件依賴DNA的RNA聚合酶:識別特異性啟動子，RNA轉錄。末端脫氧核糖核酸轉移酶:將脫氧核糖核酸加到DNA的3末端。DNA聚合酶:催化單核苷酸鏈延伸。（九）、分子克隆中常用的工具酶及良好載體的條件？答:（1）、常用的工具酶限制性核酸內切酶:是細菌產生的一類能識別和切割雙鏈DNA分子內特定的堿基順序的核酸水解酶。 vIP3 使鈣通道打開，細胞內Ca2+升高 v活化后的G蛋白激活PLC PLC水解PIP2生成IP3 和DGv v受體活化G蛋白 信號分子與受體結合，引起受體構象變化 v v受體活化G蛋白 途徑:轉錄因子的磷酸化及轉錄調控作用:活化的ERK可以轉至細胞核內，使某些轉錄調控因子發(fā)生磷酸化，從而影響基因的轉錄。Raf是MAPK級聯(lián)反應的第一個分子，由此啟動了MAPK的三級激活過程。低分子量G蛋白Ras的活化:SOS可促進Ras釋放GDP，結合GTP的反應，使Ras激活。Grb2是作為接頭蛋白結合到受體上。 （3）、mRNA運輸?shù)目刂疲ㄎ澹?、受體的特點？答:高度專一性；高度親和性；可逆性；可飽和性；特定的作用模式（六）、表皮生長因子介導的信號傳導途徑？答:表皮生長因子受體是一個典型的蛋白酪氨酸激酶受體，這個信號轉導途徑的主要步驟是:受體二聚化的形成及其磷酸化:表皮生長因子與受體的結合使受體發(fā)生二聚化，從而改變受體構象，使蛋白酪氨酸激酶活性增強，受體自身的幾個蛋白酪氨酸殘基在激酶的作用下發(fā)生磷酸化。⑷反式作用因子的組合式調控作用:每一種反式作用因子結合順式作用元件后雖然可以發(fā)揮促進或抑制作用，但反式作用因子對基因調控不是由單一因子完成的而是幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。⑵反式作用因子與順式作用元件的結合:反式作用因子被激活后，即可識別并結合上游啟動子元件和增強子中的保守性序列，對基因轉錄起調節(jié)作用。反式作用因子:一般具有三個功能域（DNA識別結合域、轉錄活性域和結合其他蛋白結合域）；能識別并結合上游調控區(qū)中的順式作用元件；對基因的表達有正性或負性調控作用。轉 錄起始復合物的形成過程為:TFⅡD結合TATA盒；RNA聚合酶識別并結合TFⅡDDNA復合物形成一個閉合的復合物；其他轉錄因子與RNA聚合酶結 合形成一個開放復合物。（三）、真核生物轉錄水平的調控機制？答:真核生物在轉錄水平的調控主要是通過反式作用因子、順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用來完成的，主要是反式作用因子結合順式作用元件后影響轉錄起始復合物的形成過程。 CAP的正性調節(jié):在啟動子上游有CAP結合位點，當大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時，cAMP濃度升高，與CAP結合，使 CAP發(fā)生變構，CAP結合于乳糖操縱子啟動序列附近的CAP結合位點，激活RNA聚合酶活性，促進結構基因轉錄，調節(jié)蛋白結合于操縱子后促進結構基因的 轉錄，對乳糖操縱子實行正調控，加速合成分解乳糖的三種酶。 阻遏蛋白的負性調節(jié):沒有乳糖存在時，I基因編碼的阻遏蛋白結合于操縱序列O處，乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài)，不能合成分解乳糖的三種酶；有乳糖存在時，乳糖 作為誘導物誘導阻遏蛋白變構，不能結合于操縱序列，乳糖操縱子被誘導開放合成分解乳糖的三種酶。真核基因組的特點:① 真核生物基因組遠大于原核生物基因組，結構復雜，基因數(shù)龐大，具有多個復制起點；②基因組DNA與蛋白質結合成染色體，儲存于細胞核內；③真核基因為單順 反子，而細菌和病毒的結構基因多為多順反子；④基因組中非編碼區(qū)多于編碼區(qū)；⑤真核基因多為不連續(xù)的斷裂基因，由外顯子和內含子鑲嵌而成；⑥存在大量的重 復序列；⑦功能相關的基因構成各種基因家族；⑧存在可移動的遺傳因素；⑨體細胞為雙倍體，而精子和卵子為單倍體。 種類單一；②單倍體基因組:每個基因組在病毒中只出現(xiàn)一次；③形式多樣；④大小不一；⑤基因重疊；⑥動物/細菌病毒與真核/原核基因相似:內含子；⑦具有不規(guī)則的結構基因；⑧基因編碼區(qū)無間隔:通過宿主及病毒本身酶切；⑨無帽狀結構；⑩結構基因沒有翻譯起始序列。4CAP:是大腸桿菌分解代謝物基因活化蛋白，這種蛋白可將葡萄糖饑餓信號傳遞個許多操縱子，使細菌在缺乏葡萄糖時可以利用其他碳源。核酸探針是指能識別特異堿基順序的帶有標記的一段DNA或RNA分子。4反義核酸技術:是通過合成一種短鏈且與DNA或RNA互補的，以DNA或RNA為目標抑制翻譯的反義分子，干擾目的基因的轉錄、剪接、轉運、翻譯等過程的技術。4 細胞全能性:指同一種生物的所有細胞都含有相同的DNA，即基因的數(shù)目和種類是一樣的，但在不同階段，同一個體的不同組織和器官中基因表達的種類和數(shù)目是不同的。相同長度的單鏈DNA，如果堿基序列不同，形成的構象就不同，這樣就形成了單鏈構象多態(tài)性。4三鏈DNA:當某一DNA或RNA寡核苷酸與DNA高嘌呤區(qū)可結合形成三鏈，能特異地結合在DNA的大溝中，并與富含嘌呤鏈上的堿基形成氫鍵?？梢宰鳛橐环N調控特定基因表達的手段。3基因治療:一般是指將限定的遺傳物質轉入患者特定的靶細胞，以最終達到預防或改變特殊疾病狀態(tài)為目的治療方法。3 RFLP:即限制性片段長度多態(tài)性，個體之間DNA的核苷酸序列存在差異，稱為DNA多態(tài)性。它不編碼病毒結構成分，對病毒無復制作用，但是當受到外界的條件激活時可產生誘導腫瘤發(fā)生的作用。在正常細胞內未激活的細胞癌基因叫原癌基因，當其受到某些條件激活時，結構和表達發(fā)生異常，能使細胞發(fā)生惡性轉化。包括病毒癌基因和細胞癌基因。3癌基因:是細胞內控制細胞生長的基因，具有潛在的誘導細胞惡性轉化的特性。3同義突變:堿基對的取代并不都是引起錯義突變和翻譯終止，有時雖然有堿基被取代，但在蛋白質水平上沒有
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