分子生物學(xué)要點(diǎn)-文庫吧資料
2025-04-13 03:17本頁面
【正文】 酸二酯鍵，因此，正在延伸的DNA鏈不能繼續(xù)延伸。（十一）SANGER雙脫氧鏈終止法的原理？答DNA 鏈中核苷酸以3’,5’磷酸二酯鍵連接，合成DNA所用的底物是 2’脫氧核苷三磷酸。如果在 多克隆位點(diǎn)上插入外源DNA片段，將使lac Z基因滅活，不能生成半乳糖苷酶，結(jié)果菌落出現(xiàn)白色。（十）、藍(lán)白篩選的原理？答:某些質(zhì)粒帶有大腸桿菌的半乳糖苷酶基因片段，在半乳糖苷酶基因的 基因區(qū)外又另外引入了一段含多種單一限制酶位點(diǎn)的DNA序列。 （2）、良好載體的條件依賴DNA的RNA聚合酶:識別特異性啟動子，RNA轉(zhuǎn)錄。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶:將脫氧核糖核酸加到DNA的3末端。DNA聚合酶:催化單核苷酸鏈延伸。（九）、分子克隆中常用的工具酶及良好載體的條件？答:（1）、常用的工具酶限制性核酸內(nèi)切酶:是細(xì)菌產(chǎn)生的一類能識別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定的堿基順序的核酸水解酶。 vIP3 使鈣通道打開，細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高 v活化后的G蛋白激活PLC PLC水解PIP2生成IP3 和DGv v受體活化G蛋白 信號分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化 v v受體活化G蛋白 途徑:轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用:活化的ERK可以轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi)，使某些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子發(fā)生磷酸化，從而影響基因的轉(zhuǎn)錄。Raf是MAPK級聯(lián)反應(yīng)的第一個分子，由此啟動了MAPK的三級激活過程。低分子量G蛋白Ras的活化:SOS可促進(jìn)Ras釋放GDP，結(jié)合GTP的反應(yīng)，使Ras激活。Grb2是作為接頭蛋白結(jié)合到受體上。 （3）、mRNA運(yùn)輸?shù)目刂疲ㄎ澹⑹荏w的特點(diǎn)？答:高度專一性；高度親和性；可逆性；可飽和性；特定的作用模式（六）、表皮生長因子介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)途徑？答:表皮生長因子受體是一個典型的蛋白酪氨酸激酶受體，這個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的主要步驟是:受體二聚化的形成及其磷酸化:表皮生長因子與受體的結(jié)合使受體發(fā)生二聚化，從而改變受體構(gòu)象，使蛋白酪氨酸激酶活性增強(qiáng)，受體自身的幾個蛋白酪氨酸殘基在激酶的作用下發(fā)生磷酸化。⑷反式作用因子的組合式調(diào)控作用:每一種反式作用因子結(jié)合順式作用元件后雖然可以發(fā)揮促進(jìn)或抑制作用，但反式作用因子對基因調(diào)控不是由單一因子完成的而是幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。⑵反式作用因子與順式作用元件的結(jié)合:反式作用因子被激活后，即可識別并結(jié)合上游啟動子元件和增強(qiáng)子中的保守性序列，對基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)節(jié)作用。反式作用因子:一般具有三個功能域（DNA識別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域和結(jié)合其他蛋白結(jié)合域）；能識別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中的順式作用元件；對基因的表達(dá)有正性或負(fù)性調(diào)控作用。轉(zhuǎn) 錄起始復(fù)合物的形成過程為:TFⅡD結(jié)合TATA盒；RNA聚合酶識別并結(jié)合TFⅡDDNA復(fù)合物形成一個閉合的復(fù)合物；其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶結(jié) 合形成一個開放復(fù)合物。（三）、真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制？答:真核生物在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控主要是通過反式作用因子、順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用來完成的，主要是反式作用因子結(jié)合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過程。 CAP的正性調(diào)節(jié):在啟動子上游有CAP結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時，cAMP濃度升高，與CAP結(jié)合，使 CAP發(fā)生變構(gòu)，CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動序列附近的CAP結(jié)合位點(diǎn)，激活RNA聚合酶活性，促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的 轉(zhuǎn)錄，對乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)控，加速合成分解乳糖的三種酶。 阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié):沒有乳糖存在時，I基因編碼的阻遏蛋白結(jié)合于操縱序列O處，乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài)，不能合成分解乳糖的三種酶；有乳糖存在時，乳糖 作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu)，不能結(jié)合于操縱序列，乳糖操縱子被誘導(dǎo)開放合成分解乳糖的三種酶。真核基因組的特點(diǎn):① 真核生物基因組遠(yuǎn)大于原核生物基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大，具有多個復(fù)制起點(diǎn)；②基因組DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成染色體，儲存于細(xì)胞核內(nèi)；③真核基因?yàn)閱雾?反子，而細(xì)菌和病毒的結(jié)構(gòu)基因多為多順反子；④基因組中非編碼區(qū)多于編碼區(qū)；⑤真核基因多為不連續(xù)的斷裂基因，由外顯子和內(nèi)含子鑲嵌而成；⑥存在大量的重 復(fù)序列；⑦功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族；⑧存在可移動的遺傳因素；⑨體細(xì)胞為雙倍體，而精子和卵子為單倍體。 種類單一；②單倍體基因組:每個基因組在病毒中只出現(xiàn)一次；③形式多樣；④大小不一；⑤基因重疊；⑥動物/細(xì)菌病毒與真核/原核基因相似:內(nèi)含子；⑦具有不規(guī)則的結(jié)構(gòu)基因；⑧基因編碼區(qū)無間隔:通過宿主及病毒本身酶切；⑨無帽狀結(jié)構(gòu)；⑩結(jié)構(gòu)基因沒有翻譯起始序列。4CAP:是大腸桿菌分解代謝物基因活化蛋白，這種蛋白可將葡萄糖饑餓信號傳遞個許多操縱子，使細(xì)菌在缺乏葡萄糖時可以利用其他碳源。核酸探針是指能識別特異堿基順序的帶有標(biāo)記的一段DNA或RNA分子。4反義核酸技術(shù):是通過合成一種短鏈且與DNA或RNA互補(bǔ)的，以DNA或RNA為目標(biāo)抑制翻譯的反義分子，干擾目的基因的轉(zhuǎn)錄、剪接、轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯等過程的技術(shù)。4 細(xì)胞全能性:指同一種生物的所有細(xì)胞都含有相同的DNA，即基因的數(shù)目和種類是一樣的，但在不同階段，同一個體的不同組織和器官中基因表達(dá)的種類和數(shù)目是不同的。相同長度的單鏈DNA，如果堿基序列不同，形成的構(gòu)象就不同，這樣就形成了單鏈構(gòu)象多態(tài)性。4三鏈DNA:當(dāng)某一DNA或RNA寡核苷酸與DNA高嘌呤區(qū)可結(jié)合形成三鏈，能特異地結(jié)合在DNA的大溝中，并與富含嘌呤鏈上的堿基形成氫鍵?？梢宰鳛橐环N調(diào)控特定基因表達(dá)的手段。3基因治療:一般是指將限定的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)入患者特定的靶細(xì)胞，以最終達(dá)到預(yù)防或改變特殊疾病狀態(tài)為目的治療方法。3 RFLP:即限制性片段長度多態(tài)性，個體之間DNA的核苷酸序列存在差異，稱為DNA多態(tài)性。它不編碼病毒結(jié)構(gòu)成分，對病毒無復(fù)制作用，但是當(dāng)受到外界的條件激活時可產(chǎn)生誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生的作用。在正常細(xì)胞內(nèi)未激活的細(xì)胞癌基因叫原癌基因，當(dāng)其受到某些條件激活時，結(jié)構(gòu)和表達(dá)發(fā)生異常，能使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。包括病毒癌基因和細(xì)胞癌基因。3癌基因:是細(xì)胞內(nèi)控制細(xì)胞生長的基因，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的特性。3同義突變:堿基對的取代并不都是引起錯義突變和翻譯終止，有時雖然有堿基被取代，但在蛋白質(zhì)水平上沒有
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