【正文】 感冒清膠囊（江西南昌制藥有限公司，規(guī)格：每粒 （含對(duì)乙酰氨基酚 24mg） ,執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)批件 2020ZFB0245，有效期： 36 個(gè)月，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 10 10 Z36020287，批號(hào)： 1212 13120 141127） 方法與結(jié)果 2代菌株，用 0． 9％無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋成 50～ 100Cfu//ml的菌懸液。 [18] 儀器與試藥 培養(yǎng)基與試劑 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 （批號(hào)： 3103443）、瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)： 3101627）、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批 號(hào)： 3102516）、 胰酪大豆胨瓊脂 培養(yǎng)基（批號(hào)： 3101005） 、改良馬丁培養(yǎng)基（批號(hào)： 3101022）、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)： 202009171）、膽鹽乳糖培養(yǎng)基（批號(hào)： 3104061）、膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基 (批號(hào)： 202007071）、 7． 0 氯化鈉．蛋白胨緩沖液 (批號(hào)： 3101597）、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)： 3102141）、 4— 甲基傘形酮葡糖甘酸培養(yǎng)基（批號(hào)： 3101426） 以上品種均購(gòu)自廣州微生物環(huán)凱科技公司。常規(guī)法適用于不含抑菌成分的藥材及制劑。 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 9 9 第二章中 感冒清膠囊 微生物限度檢查 方法驗(yàn)證 常規(guī)法最主要的特征是將制備好的供試品溶液 lml 加入培養(yǎng)皿后，直接加入相應(yīng)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)機(jī)體免疫功能或一般防御力下降，正常菌群相互制約作用失調(diào)時(shí)，則本菌大量繁殖并改變生長(zhǎng)形式 (芽生菌絲相 )，可侵入細(xì)胞引起疾病。生長(zhǎng)適溫 37℃，最低相對(duì)濕度為 88％，能引致水分較高的糧食霉變。 菌落初白色，后變黑。該菌在孢子狀態(tài)下穩(wěn)定性好，能耐氧化、耐擠壓、耐高溫 (能長(zhǎng)期耐 600C 高溫，在 1200C 溫度下能存活 20 分鐘 )和耐酸堿，在酸性胃環(huán)境中能保持活性，可以耐唾液和膽汁的攻擊，在適當(dāng)?shù)臈l件下能快速繁殖。金黃色葡萄球菌通常作為革蘭氏陽(yáng)性菌的代表。大腸埃希菌通常作為革蘭氏陰性菌的代表。其中金黃色葡萄球菌代表革蘭氏陽(yáng)性菌，大腸埃希菌代表革蘭氏陰性菌，枯草芽孢桿菌代表芽孢菌，白色念珠菌代表酵母菌，黑曲霉代表霉菌。菌落計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證通過(guò)驗(yàn)證個(gè)菌 株的回收率來(lái)確認(rèn)，而控制菌的檢查則通過(guò)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照的生長(zhǎng)情況來(lái)確定。 藥品中微生物的檢驗(yàn)主要有三大類型：包括無(wú)菌試驗(yàn)、菌落計(jì)數(shù)和控制菌的檢查。所以，藥品中微生物檢驗(yàn)時(shí)，只有在各檢測(cè)條件均適宜，即在該檢驗(yàn)條件下的樣品濃度不足以抑陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 7 7 制污染微生物的生長(zhǎng)，使供試品中污染的微生物狀況得以真實(shí)的反映，從而才能保證檢驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。它主要的特征是將制各好的供試品溶液 lml加入培養(yǎng)皿后，直接加入相應(yīng)培養(yǎng)基進(jìn)行培 養(yǎng)。例如：某些藥品供試品本身具有抑菌活性的成分、酊劑中有所含乙醇、合劑中所含的防腐劑山梨醇甲脂等，若使用簡(jiǎn)單的常規(guī)法，很可能會(huì)出現(xiàn)假陰性的情況，這對(duì)于藥物安全性的控制是不利的。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向 使用茵落形成單位 (cfu)，而不以絕對(duì)菌落數(shù)來(lái)表示供試品的活菌含量。但是，由于待測(cè)供試品往往不易全分散成單個(gè)細(xì)胞，所以，長(zhǎng)成的一個(gè)單菌落也可能來(lái)自供試品中的 2~3或更多個(gè)細(xì)胞。其原理主要為：將待測(cè)供試品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微牛物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液至平皿中，再加入一定量的培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原供試品中的一個(gè)單細(xì)胞。 平板菌落計(jì)數(shù)法是活菌計(jì)數(shù)的方法之一，也是目前國(guó)內(nèi)外微生物限度檢查中最常用的方法。 《中國(guó)藥典》 2020 年版規(guī)定，細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)除另有規(guī)定外均采用平板菌落計(jì)數(shù)法 (平皿法 )。不同特性的供試品溶液，應(yīng)采取不同的制備方法。但在適合的 pH、營(yíng)養(yǎng)充足等合適的條件下，微生物可能復(fù)蘇，從而危害人體健康。然而無(wú)論具體的操作步驟有什么不同，對(duì)于含抑菌成分的原料或制劑，最先需要處理的是消除其抑菌作用。霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)也采取相同的檢查方法。細(xì)菌數(shù)的檢查方法有多種，如平皿法、薄膜過(guò)濾法、涂抹法、 MPN 法。中國(guó)藥典對(duì)用于陰道和尿道的制劑進(jìn)行梭菌檢查時(shí)，采用生孢梭菌作為陽(yáng)性對(duì)照菌。本菌為革蘭氏染色陽(yáng)性菌，大多數(shù)為專性厭氧。本菌多數(shù)為腐物寄生菌，對(duì)環(huán)境的抵抗力極強(qiáng) [13]。 梭菌 梭菌屬是在自然界分布廣泛的一類微生物，主要存在于土壤、海水和淡水的沉積物中。與金黃色葡萄球菌相似，中國(guó)藥典規(guī)定局部給藥制劑都需控制該菌。本菌廣泛分布于自然界中，對(duì)人和動(dòng)物植物均可造成危害。中國(guó)藥典規(guī)定局部給藥制劑，包括表皮或黏膜給藥，耳、鼻及呼吸道吸入給藥，陰道、尿道給藥制劑都需檢查金黃色葡萄球菌。 [12]如金黃色葡萄球菌，可引起多種嚴(yán)重感染，通常作為革蘭氏陽(yáng)性菌的代表。葡萄球菌大部分是不致病的，但是人群中陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 5 5 有 20％ 39。 金黃色葡萄球菌 葡萄球菌是最常見(jiàn) 的化膿性球菌， 80％的化膿性感染由它引起。沙門氏菌可以在環(huán)境中長(zhǎng)期生存，有的可以存活數(shù)年，可通過(guò)人、畜、禽的糞便或與帶菌者接觸，直接或間接地污染藥品原料、輔料等藥品生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，所以來(lái)源于動(dòng)物的藥品受污染的機(jī)率較高。我國(guó)藥典采用 MPN(Most Probable Number)測(cè)定法檢查大腸菌群。中國(guó)藥典規(guī)定口服制劑中含藥材原粉的以及含豆豉、神曲等發(fā)酵成分的都需檢查大腸菌群。 大腸菌群 大腸菌群是指在 37℃生長(zhǎng)時(shí)能發(fā)酵乳糖， 24 小時(shí)內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性、氧化酶陰性、需氧或厭氧的無(wú)芽孢桿菌。因而檢查藥品、食品、飲水、環(huán)境水中有無(wú)大腸埃希菌及數(shù)量多少，則可判斷樣品是否被糞便污染及受污染 的程度。該菌常作為糞便污染的指示菌，它是腸桿科系各族細(xì)菌中從各種溫血?jiǎng)游锏哪c道檢出率最高的菌種。 控制菌的檢查 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 4 4 測(cè)定單位重量 (g)、單位容積 (m1)和單位面積 (cm2)藥品中糞便污染的指示菌，如：大腸埃希菌、大腸菌群、沙門氏菌，以及某些特定菌 (包括：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、梭菌、活螨等 )， 在樣品中不得檢出或不超過(guò)某限度。霉菌及酵母菌測(cè)定的方法很多，最常用的是平板菌落計(jì)數(shù)法。 霉菌和酵母菌數(shù)測(cè)定 霉菌和酵母菌均屬于真菌。藥品細(xì)菌數(shù)測(cè)定是活菌計(jì)數(shù)，最常