感冒清膠囊微生物限度檢查方法驗證畢業(yè)論文-預(yù)覽頁
【正文】 1980 年版的《藥品衛(wèi)生檢驗方法》增補了破傷風梭菌檢查法，并對用于深部組織、創(chuàng)傷、潰瘍及陰道的用藥開始檢查破傷風梭菌。微生物限度標準也已頒布實施了三十年。由于中藥在藥材種植、采集、炮制的過程中都有可能受到微生物的污染，因此在其質(zhì)量檢驗中山大學(xué)碩士學(xué)位論文中成藥中微生物限度檢查的方法學(xué)研究中，進行有關(guān)微生物檢驗是保證其安全性的必要環(huán)節(jié)。 中藥是我國人民廣泛使用的醫(yī)藥產(chǎn)品，并且已經(jīng)走出了國門。 20世紀 60年代， 瑞典從匈牙利、丹麥進口了一批甲狀腺粉，由于污染了沙門菌，結(jié)果先后引起 237人罹患沙門菌病。在藥品質(zhì)量控制的范疇里，除了確保其有效性以外，安全性的控制更應(yīng)具有特殊意義。 關(guān)鍵詞： 微生物限度檢查；中成藥；常規(guī)法。 本課題以感冒清膠囊中成藥品種為研究對象，結(jié)合藥品處方和工藝的特點，闡述中成藥微生物限度檢查的四種方法 (常規(guī)法、培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法和薄膜過濾法 )中常規(guī)法的特點和操作步驟，同時對其適用性以及影響因素進行考察。因此，藥品質(zhì)量的重要性不言而喻。事實上，由于藥品染菌引起使用者感染以至造成嚴重后果的事件屢有報道。因 此，藥品的染菌程度檢查和安全性評價應(yīng)當?shù)玫饺藗兊闹匾?，而藥品微生物檢驗就是藥品染菌程度和安全性評價的重要技術(shù)手段之一。 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 2 2 中藥安全性問題究其來源是多方面的，主要與中藥本身特性、應(yīng)用環(huán)境、辨證論治、種植和炮 制的管理、患者體質(zhì)和藥品受污染程度等相關(guān) [2]。 微生物限度標準在我國的發(fā)展 我國開展藥品微生 物檢驗始于 1972年，至今已有三十多年的歷史。上世紀 70 年代中后期，國內(nèi)先后在武漢、宜昌等地因使用中藥散劑治療宮頸糜爛發(fā)生了多起 事故，經(jīng)查證為藥物污染破傷風梭菌所致。之后的《中國藥典》 1995年版 [5]收載了微生物限度檢查法，并對少數(shù)劑型收載了微生物限度，但大多 數(shù)劑型仍未有微生物限度的規(guī)定。 由此可見，藥品的微生物檢查是 隨著人們對藥品污染問題認識的提高，在吸取了事故甚至是生命的教訓(xùn)后建立起來，并不斷補充完善的藥品質(zhì)量控制科目，而且必將繼續(xù)得到發(fā)展。按我國藥典規(guī)定，細菌計數(shù)是在需氧的條件下，溫度 30～ 35℃，一般培養(yǎng)48 小時，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上生長的細菌菌落數(shù)。受到真菌污染的藥品不僅可能導(dǎo)致變質(zhì)，還可能因其產(chǎn)生的代謝物以及各種真 菌毒素，使服用該藥品的患者產(chǎn)生急性或慢性的中毒病癥，有的真菌毒素甚至可導(dǎo)致或誘發(fā)癌癥 [8]。 《中國藥典》的控制菌包括以下幾種： 大腸埃希菌 口服制劑、眼部給藥制劑、鼻及呼吸道給藥制劑以及直腸給藥制劑都需要控制大腸埃希菌，每 lg 或 lml 或 10cm2 均不得檢出。中國藥典采用 MUG— Indole 法 [9][10]進行大腸埃希菌的檢查。大腸菌群不僅可指示大腸埃希菌等受外界環(huán)境影響較大的近期污染細菌是否存在，而且能反映如產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌等受外界影響較小的遠期污 染細菌是否存在。因此，藥典規(guī)定，含動物組織 (包括提取物 )及動物類原材料 (蜂蜜、王漿、動物角及阿膠除外 )的口服制劑每 10g 或 10ml 不得檢出沙門氏菌。50％的人可攜帶致病性葡萄球菌。 銅綠假單胞菌 銅綠假單胞菌為假單胞菌屬的模式菌，習慣稱為綠 膿桿菌。本菌除在硝酸鹽培養(yǎng)基以外都是專性好氧。其芽孢體可耐高溫及干燥，有些菌的芽孢體 可在土壤中存活數(shù)十年。 微生物限度檢查的方法 微生物限度檢查方法按其研究內(nèi)容的不同，方法也不盡相同。控制菌則根據(jù)所需檢查菌種的不同而采取不同的檢查方法。 微生物檢測時，首先要進行供試品溶液的制備。該方法測定結(jié)果只反映在規(guī)定的條件下所生長的細菌 (嗜中溫、需氧和兼性厭氧 )、霉菌和酵母菌的菌落數(shù)，不包括對營養(yǎng)、氧氣、溫度、 pH 值和其他因素有特殊要求的細菌、霉菌和酵母菌。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出供試品中的含菌數(shù)。 由于供試品本身的性質(zhì)、所采用的輔料、賦形劑以及劑型的不同，所使用的微生物限度檢查法也不盡相同。 微生物限度檢查方法驗證的內(nèi)容 微生物的生長受許多因素的影響，特別是藥品污染中的微生物尤為如此。其中，菌落計數(shù)和控制菌檢查屬于微生物限度檢查的內(nèi)容。 大腸埃希菌 (Escherichiacoli)[CMCC(B)44 1 02] 前面控制菌檢查中已經(jīng)提及，所以不再贅述。 枯草 芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 50 1] 枯草芽孢桿菌是芽孢桿菌屬的一種，廣泛分布在土壤及腐敗的有機物中，因易在枯草浸汁中繁殖而得名。分生孢子頭褐黑色呈放射狀；分生孢子梗長短不一，頂囊球形，雙層小梗；分生孢子褐色球形。本菌細胞呈卵圓形，很象酵母菌， 比葡萄球菌大 5～ 6倍，革蘭氏染色陽性，但著色不均勻。常規(guī)法不需要特殊的儀器，是微牛物限度檢查最簡單便捷的方法。 供試品溶液的制備 感冒清膠囊：稱取供試品 10g，加無菌 pH7． 0 氯化鈉．蛋白胨緩沖溶液至 100ml，45℃水浴溫熱至全部溶解，制成 l： lO均勻的供試液。 菌液組 測定加入的試驗菌數(shù) 供試品對照組 按試驗組的方法，不加菌液，測定供試品菌數(shù) (本底菌 )。 陽性對照 取大腸埃希菌菌懸液 lml，加入相應(yīng)規(guī)定量的增菌培養(yǎng)基 (檢查大腸埃希菌用膽鹽乳糖培養(yǎng)基，大腸菌群用膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基中 )，按藥典方法檢查。 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 12 12 結(jié)論 感冒清膠囊細菌、霉菌及酵母菌、控制菌可采用常規(guī)法做微生物限度檢查。經(jīng)實驗證明其抑菌作用小， 所以可采用常規(guī)法進行微生物限度檢查 。某些菌絲在生長發(fā)育到一定階段后產(chǎn)生孢子 [12]。 建議 ： 了解藥品的處方組成是微生物限度檢查的前提。 [16]雙香豆素類、醌類、葸醌類、黃酮類、揮發(fā)油、生物堿等物質(zhì)對細菌都有一定的抑制作用。具有上述這些結(jié)構(gòu)的中藥材很多，中成藥中含有的連翹、大黃、黃芩、冰片、天花粉、知母、丹參、甘草 等。所以在做樣品預(yù)試驗的時候，可先選用這 兩種菌進行驗證。對于口服制劑來說，大多數(shù)中成藥的抑菌作用是有限的，一般可采用常規(guī)平皿法或培養(yǎng)基稀釋法： 為節(jié)約成本，創(chuàng)造良好的經(jīng)濟效益，可用簡單的常規(guī)法或培養(yǎng)基稀釋法進行檢查的供試品，就不需要用到消耗量較大的薄膜過濾法。同時我還要感謝我的指導(dǎo)老師 余展旺 老師對此次畢業(yè)設(shè)計的精心安排和耐心指導(dǎo)。 謝謝！
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