【正文】 檢查 。 微生物限度標(biāo)準(zhǔn)在我國的發(fā)展 我國開展藥品微生 物檢驗(yàn)始于 1972年，至今已有三十多年的歷史。微生物限度標(biāo)準(zhǔn)也已頒布實(shí)施了三十年。 1978 年國家衛(wèi)生部、化工部、商業(yè)部聯(lián)合頒發(fā)了我國第一個(gè)《藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》 [1][3]，該標(biāo)準(zhǔn)主要為中藥和化學(xué)藥，并按丸劑、片劑、散劑、沖劑及糖漿、合劑、水劑等劑型規(guī)定了微生物限度，包括細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)的不同規(guī)定。其中：口服藥品 lg或 lml 不得檢出大腸埃希菌、沙門菌；外用藥品 lg 或 lml 不得檢出銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌；口服藥品不得檢出活螨。上世紀(jì) 70 年代中后期，國內(nèi)先后在武漢、宜昌等地因使用中藥散劑治療宮頸糜爛發(fā)生了多起 事故，經(jīng)查證為藥物污染破傷風(fēng)梭菌所致。在調(diào)查研究并積累大量數(shù)據(jù)后， 1980 年版的《藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》增補(bǔ)了破傷風(fēng)梭菌檢查法，并對(duì)用于深部組織、創(chuàng)傷、潰瘍及陰道的用藥開始檢查破傷風(fēng)梭菌。 1986 年衛(wèi)生部頒發(fā)了經(jīng)修改的《藥品衛(wèi)牛標(biāo)準(zhǔn)》， 1989 年又下達(dá)了《藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)補(bǔ)充規(guī)定和說明》。這兩個(gè)文件載有與國際上基本一致的微生物限度檢查法和 20個(gè)化學(xué)藥品種的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，并收載于《中國藥典》 1990 年版 [4]第二增補(bǔ)本。之后的《中國藥典》 1995年版 [5]收載了微生物限度檢查法，并對(duì)少數(shù)劑型收載了微生物限度，但大多 數(shù)劑型仍未有微生物限度的規(guī)定。在《中國藥典》 2020 年版 [6]中重新對(duì)丸劑、片劑、散劑、膠囊劑以及以含發(fā)酵類藥材為原料的制劑修訂了微生物限度標(biāo)準(zhǔn)。未列入標(biāo)準(zhǔn)的劑型，則根據(jù)用藥途徑，參照同類劑型的微生物限度作了補(bǔ)充，如滴耳劑、滴鼻劑等。 2020 年版的《中國藥典》 [7]根據(jù)用藥途徑又修訂了藥品微陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 3 3 生物修訂標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)新增訂了方法驗(yàn)證以及含藥材原粉、豆豉和神曲等發(fā)酵成分制劑的限度標(biāo)準(zhǔn)，不僅要控制細(xì)菌、霉菌和酵母菌數(shù)，而且要控制大腸菌群數(shù)，使我國藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)實(shí)現(xiàn)接軌。 由此可見，藥品的微生物檢查是 隨著人們對(duì)藥品污染問題認(rèn)識(shí)的提高，在吸取了事故甚至是生命的教訓(xùn)后建立起來，并不斷補(bǔ)充完善的藥品質(zhì)量控制科目，而且必將繼續(xù)得到發(fā)展。 微生物限度檢查的主要內(nèi)容 微生物限度檢查主要包括染菌量的檢查和控制菌的檢查兩個(gè)方面： 定量檢查 染菌量的檢查測(cè)定單位重量 (g)、單位容積 (m1)和單位面積 (cm2)藥品中的細(xì)菌數(shù)及真菌數(shù) (霉菌和酵母菌數(shù) )。 細(xì)菌數(shù)測(cè)定 藥品細(xì)菌數(shù)測(cè)定是微生物的定量檢查，是用來判斷藥品被細(xì)菌污染程度和衛(wèi)生質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)，也是檢測(cè)中藥藥品質(zhì)量的指標(biāo)之一。細(xì)菌計(jì)數(shù)是指在 一定條件下 (如需氧情況、營養(yǎng)條件、 pH值、培養(yǎng)溫度和時(shí)間等 )每 lg、 lml、 10cm2 供試品液經(jīng)培養(yǎng)后所生長(zhǎng)的菌落數(shù)。按我國藥典規(guī)定，細(xì)菌計(jì)數(shù)是在需氧的條件下，溫度 30～ 35℃，一般培養(yǎng)48 小時(shí)，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落數(shù)。藥品細(xì)菌數(shù)測(cè)定是活菌計(jì)數(shù)，最常用也是我國藥典收載的使用的方法是平板法。細(xì)菌計(jì)數(shù)以菌落數(shù)為單位，即cfu(colony forming units)。 霉菌和酵母菌數(shù)測(cè)定 霉菌和酵母菌均屬于真菌。受到真菌污染的藥品不僅可能導(dǎo)致變質(zhì)，還可能因其產(chǎn)生的代謝物以及各種真 菌毒素，使服用該藥品的患者產(chǎn)生急性或慢性的中毒病癥，有的真菌毒素甚至可導(dǎo)致或誘發(fā)癌癥 [8]。霉菌及酵母菌測(cè)定的方法很多，最常用的是平板菌落計(jì)數(shù)法。我國藥典采用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行各種制劑的霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)測(cè)定，當(dāng)制劑中含有蜂蜜和王漿時(shí)，需采用酵母浸出粉胨葡萄糖 (YPD)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行酵母菌計(jì)數(shù)測(cè)定。 控制菌的檢查 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 4 4 測(cè)定單位重量 (g)、單位容積 (m1)和單位面積 (cm2)藥品中糞便污染的指示菌，如：大腸埃希菌、大腸菌群、沙門氏菌，以及某些特定菌 (包括：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、梭菌、活螨等 )， 在樣品中不得檢出或不超過某限度。 《中國藥典》的控制菌包括以下幾種： 大腸埃希菌 口服制劑、眼部給藥制劑、鼻及呼吸道給藥制劑以及直腸給藥制劑都需要控制大腸埃希菌，每 lg 或 lml 或 10cm2 均不得檢出。該菌常作為糞便污染的指示菌，它是腸桿科系各族細(xì)菌中從各種溫血?jiǎng)游锏哪c道檢出率最高的菌種。大腸埃希菌隨糞便排出體外，在土壤和水中如未被裂解可存活數(shù)天，在沃土表層則可存活更長(zhǎng)時(shí)間，有可能污染水、食品、藥品等。因而檢查藥品、食品、飲水、環(huán)境水中有無大腸埃希菌及數(shù)量多少，則可判斷樣品是否被糞便污染及受污染 的程度。中國藥典采用 MUG— Indole 法 [9][10]進(jìn)行大腸埃希菌的檢查。 大腸菌群 大腸菌群是指在 37℃生長(zhǎng)時(shí)能發(fā)酵乳糖， 24 小時(shí)內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性、氧化酶陰性、需氧或厭氧的無芽孢桿菌。它不僅包括埃希菌屬中的某些細(xì)菌，還包括腸桿菌屬、枸櫞酸菌屬及克雷伯菌屬中的某些細(xì)菌 [11]。中國藥典規(guī)定口服制劑中含藥材原粉的以及含豆豉、神曲等發(fā)酵成分的都需檢查大腸菌群。大腸菌群不僅可指示大腸埃希菌等受外界環(huán)境影響較大的近期污染細(xì)菌是否存在，而且能反映如產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌等受外界影響較小的遠(yuǎn)期污 染細(xì)菌是否存在。我國藥典采用 MPN(Most Probable Number)測(cè)定法檢查大腸菌群。 沙門氏菌 沙門菌屬是腸桿菌科的重要致病菌。沙門氏菌可以在環(huán)境中長(zhǎng)期生存，有的可以存活數(shù)年，可通過人、畜、禽的糞便或與帶菌者接觸，直接或間接地污染藥品原料、輔料等藥品生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，所以來源于動(dòng)物的藥品受污染的機(jī)率較高。因此，藥典規(guī)定，含動(dòng)物組織 (包括提取物 )及動(dòng)物類原材料 (蜂蜜、王漿、動(dòng)物角及阿膠除外 )的口服制劑每 10g 或 10ml 不得檢出沙門氏菌。 金黃色葡萄球菌 葡萄球菌是最常見 的化膿性球菌， 80％的化膿性感染由它引起。廣泛分布于自然界，也存在于人和動(dòng)物皮膚及與外相通的腔道中。葡萄球菌大部分是不致病的，但是人群中陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 5 5 有 20％ 39。50％的人可攜帶致病性葡萄球菌。 [12]如金黃色葡萄球菌，可引起多種嚴(yán)重感染，通常作為革蘭氏陽性菌的代表。葡萄球菌屬是無芽孢細(xì)菌中抵抗力最強(qiáng)的細(xì)菌，耐干燥，對(duì)多種消毒劑不敏感。中國藥典規(guī)定局部給藥制劑，包括表皮或黏膜給藥，耳、鼻及呼吸道吸入給藥，陰道、尿道給藥制劑都需檢查金黃色葡萄球菌。 銅綠假單胞菌 銅綠假單胞菌為假單胞菌屬的模式菌，習(xí)慣稱為綠 膿桿菌。本菌廣泛分布于自