【正文】 陜西科技大學畢業(yè)論文 13 13 第三章 結(jié) 論 本試驗采用口服中成藥的常見劑型膠囊制劑 感冒清膠囊 做微生物限度檢查方法驗證， 感冒清膠囊中穿心蓮 [15]都具有抑制細菌生長的作用。 回收率 (％ )=[(試驗組菌數(shù)．供試品對照組菌數(shù) )／菌液組菌數(shù) ] 100％ [大于 70％ ]結(jié)果果見表 21 表 2— 1 細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)回收率 (％ ) 品名 批號 金黃色葡萄球菌 大腸埃希氏菌 枯草芽孢桿菌 白色念珠菌 黑曲霉 感冒清膠囊 121230 131202 陜西科技大學畢業(yè)論文 11 11 141127 控制菌檢查的方法驗證 本次驗證的均為口服制劑，需進行大腸埃希菌的檢查。 [18] 儀器與試藥 培養(yǎng)基與試劑 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 （批號： 3103443）、瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號： 3101627）、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批 號： 3102516）、 胰酪大豆胨瓊脂 培養(yǎng)基（批號： 3101005） 、改良馬丁培養(yǎng)基（批號： 3101022）、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基（批號： 202009171）、膽鹽乳糖培養(yǎng)基（批號： 3104061）、膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基 (批號： 202007071）、 7． 0 氯化鈉．蛋白胨緩沖液 (批號： 3101597）、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基（批號： 3102141）、 4— 甲基傘形酮葡糖甘酸培養(yǎng)基（批號： 3101426） 以上品種均購自廣州微生物環(huán)凱科技公司。生長適溫 37℃，最低相對濕度為 88％，能引致水分較高的糧食霉變。大腸埃希菌通常作為革蘭氏陰性菌的代表。所以，藥品中微生物檢驗時，只有在各檢測條件均適宜，即在該檢驗條件下的樣品濃度不足以抑陜西科技大學畢業(yè)論文 7 7 制污染微生物的生長，使供試品中污染的微生物狀況得以真實的反映，從而才能保證檢驗結(jié)果的科學性和準確性。但是，由于待測供試品往往不易全分散成單個細胞，所以，長成的一個單菌落也可能來自供試品中的 2~3或更多個細胞。不同特性的供試品溶液，應采取不同的制備方法。細菌數(shù)的檢查方法有多種，如平皿法、薄膜過濾法、涂抹法、 MPN 法。 梭菌 梭菌屬是在自然界分布廣泛的一類微生物，主要存在于土壤、海水和淡水的沉積物中。 [12]如金黃色葡萄球菌，可引起多種嚴重感染，通常作為革蘭氏陽性菌的代表。我國藥典采用 MPN(Most Probable Number)測定法檢查大腸菌群。該菌常作為糞便污染的指示菌，它是腸桿科系各族細菌中從各種溫血動物的腸道檢出率最高的菌種。藥品細菌數(shù)測定是活菌計數(shù)，最常用也是我國藥典收載的使用的方法是平板法。在《中國藥典》 2020 年版 [6]中重新對丸劑、片劑、散劑、膠囊劑以及以含發(fā)酵類藥材為原料的制劑修訂了微生物限度標準。微生物限度標準也已頒布實施了三十年。 中藥是我國人民廣泛使用的醫(yī)藥產(chǎn)品，并且已經(jīng)走出了國門。在藥品質(zhì)量控制的范疇里，除了確保其有效性以外，安全性的控制更應具有特殊意義。 本課題以感冒清膠囊中成藥品種為研究對象，結(jié)合藥品處方和工藝的特點，闡述中成藥微生物限度檢查的四種方法 (常規(guī)法、培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法和薄膜過濾法 )中常規(guī)法的特點和操作步驟，同時對其適用性以及影響因素進行考察。事實上，由于藥品染菌引起使用者感染以至造成嚴重后果的事件屢有報道。 陜西科技大學畢業(yè)論文 2 2 中藥安全性問題究其來源是多方面的，主要與中藥本身特性、應用環(huán)境、辨證論治、種植和炮 制的管理、患者體質(zhì)和藥品受污染程度等相關(guān) [2]。上世紀 70 年代中后期，國內(nèi)先后在武漢、宜昌等地因使用中藥散劑治療宮頸糜爛發(fā)生了多起 事故，經(jīng)查證為藥物污染破傷風梭菌所致。 由此可見，藥品的微生物檢查是 隨著人們對藥品污染問題認識的提高，在吸取了事故甚至是生命的教訓后建立起來，并不斷補充完善的藥品質(zhì)量控制科目，而且必將繼續(xù)得到發(fā)展。受到真菌污染的藥品不僅可能導致變質(zhì)，還可能因其產(chǎn)生的代謝物以及各種真 菌毒素，使服用該藥品的患者產(chǎn)生急性或慢性的中毒病癥，有的真菌毒素甚至可導致或誘發(fā)癌癥 [8]。中國藥典采用 MUG— Indole 法 [9][10]進行大腸埃希菌的檢查。因此，藥典規(guī)定，含動物組織 (包括提取物 )及動物類原材料 (蜂蜜、王漿、動物角及阿膠除外 )的口服制劑每 10g 或 10ml 不得檢出沙門氏菌。 銅綠假單胞菌 銅綠假單胞菌為假單胞菌屬的模式菌，習慣稱為綠 膿桿菌。其芽孢體可耐高溫及干燥，有些菌的芽孢體 可在土壤中存活數(shù)十年?？刂凭鷦t根據(jù)所需檢查菌種的不同而采取不同的檢查方法。該方法測定結(jié)果只反映在規(guī)定的條件下所生長的細菌 (嗜中溫、需氧和兼性厭氧 )、霉菌和酵母菌的菌落數(shù)，不包括對營養(yǎng)、氧氣、溫度、 pH 值和其他因素有特殊要求的細菌、霉菌和酵母菌。 由于供試品本身的性質(zhì)、所采用的輔料、賦形劑以及劑型的不同，所使用的微生物限度檢查法也不盡相同。其中，菌落計數(shù)和控制菌檢查屬于微生物限度檢查的內(nèi)容。 枯草 芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 50 1] 枯草芽孢桿菌是芽孢桿菌屬的一種，廣泛分布在土壤及腐敗的有機物中，因易在枯草浸汁中繁殖而得名。本菌細胞呈卵圓形，很象酵母菌， 比葡萄球菌大 5～ 6倍，革蘭氏染色陽性，但著色不均勻。 供試品溶液的制備 感冒清膠囊：稱取供試品 10g，加無菌 pH7． 0 氯化鈉．蛋白胨緩沖溶液至 100ml，45℃水浴溫熱至全部溶解，制成 l： lO均勻的供試液。 陽性對照 取大腸埃希菌菌懸液 lml，加入相應規(guī)定量的增菌培養(yǎng)基 (檢查大腸埃希菌用膽鹽乳糖培養(yǎng)基，大腸菌群用膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基中 )，按藥典方法檢查。經(jīng)實驗證明其抑菌作用小， 所以可采用常規(guī)法進行微生物限度檢查 。 建議 ： 了解藥品的處方組成是微生物限度檢查的前提。具有上述這些結(jié)構(gòu)的中藥材很多，中成藥中含有的連翹、大黃、黃芩、冰片、天花粉、知母、丹參、甘草 等。對于口服制劑來說，大多數(shù)中成藥的抑菌作用是有限的，一般可采用常規(guī)平皿法或培養(yǎng)基稀釋法： 為節(jié)約成本，創(chuàng)造良好的經(jīng)濟效益，可用簡單的常規(guī)法或培養(yǎng)基稀釋法進行檢查的供試品，就不需要用到消耗量較大的薄膜過濾法。 謝謝！