05版藥典微生物限度檢查法操作要點(diǎn)-文庫(kù)吧
2025-03-20 23:00 本頁(yè)面
【正文】 希菌，金黃色葡萄球菌，枯草桿菌3個(gè)菌株的回收率均達(dá)到70%以上時(shí)，細(xì)菌計(jì)數(shù)用該驗(yàn)證的方法檢驗(yàn)。當(dāng)白色念珠菌和黑曲霉2個(gè)菌株的回收率均達(dá)到70%以上時(shí)，霉菌計(jì)數(shù)用該驗(yàn)證的方法檢驗(yàn)。2．培養(yǎng)基稀釋法取規(guī)定量的供試液，至較大量的培養(yǎng)基中，使單位體積內(nèi)的供試品含量減少，至不含抑菌作用。測(cè)定細(xì)菌、霉菌及酵母菌的菌數(shù)時(shí)，取同稀釋級(jí)的供試液2ml，每lml供試液可等量分注多個(gè)平皿，傾注瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。每lml供試液所注的平皿中生長(zhǎng)的菌數(shù)之和即為lml的菌落數(shù)，計(jì)算每1ml供試液的平均菌落數(shù)，按平皿法計(jì)數(shù)規(guī)則報(bào)告菌數(shù)；控制菌檢查時(shí)，可加大增菌培養(yǎng)基的用量。具體操作：（以1ml分至5個(gè)皿為例）就是取1:10的供試液1ml均勻分注到5個(gè)平皿中，每株試驗(yàn)菌平行制備2ml的平皿數(shù)，然后加入相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)，計(jì)算各菌株的回收率。用該法做一個(gè)樣品的細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證試驗(yàn)，需要多少個(gè)平皿呢？試驗(yàn)組：510=50個(gè)，即每個(gè)菌株做2ml共需50個(gè)；菌液組：52=10個(gè)，即每個(gè)菌株的加菌量，每株2個(gè)皿。 共80個(gè)本底菌組：10個(gè)細(xì)菌計(jì)數(shù)，10個(gè)霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)。3．離心沉淀集菌法取一定量的供試液，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘(供試液如有沉淀，先以500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取全部上清液再離心) ,棄去上清液，留底部集菌液約2ml，加稀釋液補(bǔ)至原量。然后用此稀釋液進(jìn)行檢驗(yàn)。4．薄膜過(guò)濾法取相當(dāng)于每張濾膜含1g或lml供試品的供試液，加至適量的稀釋劑中，混勻，過(guò)濾。若供試品每1g或lml所含的菌數(shù)較多時(shí)，可取適宜稀釋級(jí)的供試液lml，過(guò)濾。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或真菌瓊脂培養(yǎng)上。每種菌株至少制備一張濾膜。即每個(gè)驗(yàn)證樣品至少制備7個(gè)膜。（5個(gè)試驗(yàn)組和2個(gè)本底菌）（二）控制菌檢查方法的驗(yàn)證 驗(yàn)證時(shí)，依各品種項(xiàng)下微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)驗(yàn)證的菌株，驗(yàn)證大腸菌群檢查法時(shí)，應(yīng)采用大腸埃希菌作為驗(yàn)證菌株。驗(yàn)證試驗(yàn)按供試液的制備和控制菌檢查法的規(guī)定及下列要求進(jìn)行。菌種 對(duì)試驗(yàn)菌種的要求同細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證。 大腸埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44 102] 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(CMCC(B)26 003) 乙型付傷寒沙門菌(Salmonella paratyphi B)(CMCC(B)50 094) 銅綠假單胞菌(Pseudomonas aerugmosa)(CMCC(B)10 104)生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)(CMCC(B)64 941) 菌液制備 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型付傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24小時(shí)。％無(wú)菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)為10~l00cfu的菌懸液。 驗(yàn)證
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