微生物限度檢驗操作規(guī)程(20xx年版)-文庫吧
2025-07-10 16:21 本頁面
【正文】 15ml，以順時針或反時針方向快速轉動平皿（勿使培養(yǎng)基溢出）使供試液與培養(yǎng)基混勻，放置，待凝。 培養(yǎng)和計數(shù)需氧菌總數(shù)計數(shù)平板倒置于30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5天。霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)平板倒置于20～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5～天，必要時可延長至7天。觀察菌落生長情況，點計平板上生長的所有菌落數(shù)，計數(shù)并報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數(shù)。點計菌落數(shù)后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報告規(guī)則報告菌數(shù)。若同稀釋級兩個平板的菌落平均數(shù)不小于15，則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。 菌數(shù)報告規(guī)則需氧菌總數(shù)測定宜選取平均菌落數(shù)小于300cfu的稀釋級、霉菌和酵母菌總數(shù)測定宜選取平均菌數(shù)小于100cfu的稀釋級，作為菌數(shù)報告的依據(jù)。以最高的平均菌落數(shù)，計算1g、1ml或10cm2供試品中所含的微生物，取兩位有效數(shù)字報告。如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數(shù)小于1時，以＜1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。 薄膜過濾法 ，直徑約為50mm，若采用其他直徑的濾膜，沖洗量應進行相應的調整。選擇濾膜材質時應保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應采用適宜的方法滅菌。使用時，應保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml。總沖洗量不得超過1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。 取相當于每張濾膜含1g或1ml供試品的供試液，加至適量的稀釋劑中，混勻，過濾。若供試品所含的菌數(shù)較多時，可取適宜稀釋級的供試液1ml,過濾。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜。濾膜貼于平板上是不得有空隙或氣泡，否則影響微生物的生長。 陰性對照 取試驗用的稀釋液1ml照上述薄膜過濾法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。 培養(yǎng)和計數(shù) 培養(yǎng)條件和計數(shù)方法同平皿法，每片濾膜上的菌落數(shù)應不超過100cfu。 菌數(shù)報告規(guī)則 以相當于1g或1ml供試品的菌落數(shù)報告菌數(shù)；若濾膜上無菌落生長，以1報告菌數(shù)（每張濾膜過濾1g或1ml供試品），或1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。 MPN法MPN法的精密度和準確度不及薄膜過濾法和平皿法，僅在供試品需氧菌總數(shù)沒有適宜計數(shù)方法的情況下使用，本法不適用霉菌計數(shù)。取供試液至少3個連續(xù)稀級，每一稀釋級取3份1ml分別接種至3管裝有9～10ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。必要時可在培養(yǎng)基中加入表面活性劑、中和劑或滅活劑。接種管置30～35℃培養(yǎng)3天，逐日觀察各管微生物生長情況。如果由于供試品的原因使得結果難以判斷，可將該管培養(yǎng)物轉種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，在相同條件下培養(yǎng)1～2天，觀察是否有微生物生長。根據(jù)微生物生長的管數(shù)從表1查被測供試品每1g或1ml中需氧菌總數(shù)的最可能數(shù)。 表1 微生物最可能數(shù)檢索表生長管數(shù)需氧菌總數(shù)最可能數(shù)95﹪置信限每管含樣品的g或ml數(shù)MPN/g或ml下限上限000〈3000130103100111702017030351001710117102114351102011111435120114351211553813016538200352011443520220538210154382112053821227994220215402212899422235994230299942313699430023594301389104302641618131043918131
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