微生物限度檢驗操作規(guī)程(20xx年版)(編輯修改稿)
2024-08-21 16:21 本頁面
【文章內容簡介】 17517199312120303603131603038032093183603211503038032221030400323290909903302404099033146090198033211002004000333〉1100 結果判斷需氧菌總數是指胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數（包括真菌菌落數）；霉菌和酵母菌總數是指沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數（包括細菌菌落數）。若因沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的細菌使霉菌和酵母菌的計數結果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氯霉素、慶大霉素）的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基（如玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）進行霉菌和酵母菌總數測定。使用選擇性培養(yǎng)基時，應進行培養(yǎng)基適用性檢查。若采用MPN法，測定結果為需氧菌總數。若供試品的需氧菌總數、霉菌和酵母菌總數的檢查結果均符合該品種項上的規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若基中任何一項不符合該品種項下的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定?？刂凭鷻z查控制菌檢查法系用于在規(guī)定的試驗條件下，檢查供試品中是否存在物定的物生物。當本法用于檢查非無菌制劑及其原、輔料等是否符合相應的微生物限度標準時，應按下列規(guī)定進行檢驗、包括樣品取樣量和結果判斷等。供試品檢出控制菌或其他致病菌時，按一次檢出結果為準，不再復試。供試液制備及實驗環(huán)境要求同需氧菌總數、霉菌和酵母菌總數計數應為內容，這個羅列成子項。如果供試品具有抗菌活性，應盡可能去除或中種。供試品檢查時，若使用了中和劑或滅活劑，應確認有效性及對微生對無毒性。供試液制備如果使用了表面活性劑，應確認其對微生物無毒性以及與所使用中和劑或滅活劑的相容性。陽性對照試驗方法同供試品的控制菌檢查，對照菌的加量應不大于100cfu。陽性對照試驗應檢出相應的控制菌。陰性對照試驗：以稀釋劑代替供試液照相應控制菌檢查法檢查，陰性對照試驗應無菌生長，如陰性對照有菌生長，應進行偏差調查。 大腸埃希菌 設備、儀器及用具 設備微生物限度檢測室、陽性菌檢測室、生物安全柜、凈化工作臺、生化培養(yǎng)箱（30～350C、42～440C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、滅菌柜、紫外燈等。 儀器及器皿顯微鏡、托盤天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過濾器等。 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號筆、薄膜過濾膜等。 試液指示液、革蘭染色液、碘液、95%乙醇。 培養(yǎng)基 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱液體培養(yǎng)基等。 操作方法 供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“”制成1：10供試液。取相當于1g或1ml供試液，接種至適宜體積（經方法適用性試驗確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，在30～35℃培養(yǎng)18～24小時。 選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中， 42～44℃培養(yǎng)24～48小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72小時。 結果判斷 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應進行分離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應進行分離、純化及適宜的鑒定試驗。以接種針輕輕接觸單個疑似菌落的表面中心，沾取培養(yǎng)物，應挑選2～3個以上疑似菌落，分別接種營養(yǎng)瓊脂斜面，培養(yǎng)18～24小時，作以下檢查。 革蘭染色、鏡檢 以接種環(huán)沾取無菌水于潔凈載玻片上,取上述疑似菌落的營養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物少許,制成均勻涂片,自然或微溫干燥,再通過火焰2～3次(載玻片不燙手)固定。滴加結晶紫染液,染色1min,水洗,滴加碘液,媒染1min,水洗,以濾紙吸干余水。滴加95%乙醇,脫色20～30s,水洗。滴加沙黃染液,復染1min,待干后,鏡檢。 染色結果 革蘭陽性菌呈藍紫色。革蘭陰性菌呈紅色,大腸埃希菌為革蘭陰性短桿菌,或球桿菌狀,亦有桿菌狀。 注意事項 玻片必須潔凈，涂片菌量宜少，菌不可濃。否則，菌細胞成堆或連成片。染色反應難于判斷，菌細胞形態(tài)難于觀察。 培養(yǎng)物的菌齡以1624h
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