微生物限度檢驗(yàn)操作規(guī)程(20xx年版)(編輯修改稿)
2024-08-21 16:21 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 17517199312120303603131603038032093183603211503038032221030400323290909903302404099033146090198033211002004000333〉1100 結(jié)果判斷需氧菌總數(shù)是指胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的總菌落數(shù)（包括真菌菌落數(shù)）；霉菌和酵母菌總數(shù)是指沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的總菌落數(shù)（包括細(xì)菌菌落數(shù)）。若因沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌使霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)結(jié)果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氯霉素、慶大霉素）的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基（如玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）進(jìn)行霉菌和酵母菌總數(shù)測(cè)定。使用選擇性培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。若采用MPN法，測(cè)定結(jié)果為需氧菌總數(shù)。若供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的檢查結(jié)果均符合該品種項(xiàng)上的規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若基中任何一項(xiàng)不符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定?？刂凭鷻z查控制菌檢查法系用于在規(guī)定的試驗(yàn)條件下，檢查供試品中是否存在物定的物生物。當(dāng)本法用于檢查非無(wú)菌制劑及其原、輔料等是否符合相應(yīng)的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)按下列規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)、包括樣品取樣量和結(jié)果判斷等。供試品檢出控制菌或其他致病菌時(shí)，按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn)，不再?gòu)?fù)試。供試液制備及實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求同需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)應(yīng)為內(nèi)容，這個(gè)羅列成子項(xiàng)。如果供試品具有抗菌活性，應(yīng)盡可能去除或中種。供試品檢查時(shí)，若使用了中和劑或滅活劑，應(yīng)確認(rèn)有效性及對(duì)微生對(duì)無(wú)毒性。供試液制備如果使用了表面活性劑，應(yīng)確認(rèn)其對(duì)微生物無(wú)毒性以及與所使用中和劑或滅活劑的相容性。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)方法同供試品的控制菌檢查，對(duì)照菌的加量應(yīng)不大于100cfu。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。陰性對(duì)照試驗(yàn)：以稀釋劑代替供試液照相應(yīng)控制菌檢查法檢查，陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，如陰性對(duì)照有菌生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。 大腸埃希菌 設(shè)備、儀器及用具 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室、陽(yáng)性菌檢測(cè)室、生物安全柜、凈化工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱（30～350C、42～440C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、滅菌柜、紫外燈等。 儀器及器皿顯微鏡、托盤天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過(guò)濾器等。 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過(guò)濾膜等。 試液指示液、革蘭染色液、碘液、95%乙醇。 培養(yǎng)基 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱液體培養(yǎng)基等。 操作方法 供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“”制成1：10供試液。取相當(dāng)于1g或1ml供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，在30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)。 選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中， 42～44℃培養(yǎng)24～48小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72小時(shí)。 結(jié)果判斷 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長(zhǎng)，或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗(yàn)。以接種針輕輕接觸單個(gè)疑似菌落的表面中心，沾取培養(yǎng)物，應(yīng)挑選2～3個(gè)以上疑似菌落，分別接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，培養(yǎng)18～24小時(shí)，作以下檢查。 革蘭染色、鏡檢 以接種環(huán)沾取無(wú)菌水于潔凈載玻片上,取上述疑似菌落的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物少許,制成均勻涂片,自然或微溫干燥,再通過(guò)火焰2～3次(載玻片不燙手)固定。滴加結(jié)晶紫染液,染色1min,水洗,滴加碘液,媒染1min,水洗,以濾紙吸干余水。滴加95%乙醇,脫色20～30s,水洗。滴加沙黃染液,復(fù)染1min,待干后,鏡檢。 染色結(jié)果 革蘭陽(yáng)性菌呈藍(lán)紫色。革蘭陰性菌呈紅色,大腸埃希菌為革蘭陰性短桿菌,或球桿菌狀,亦有桿菌狀。 注意事項(xiàng) 玻片必須潔凈，涂片菌量宜少，菌不可濃。否則，菌細(xì)胞成堆或連成片。染色反應(yīng)難于判斷，菌細(xì)胞形態(tài)難于觀察。 培養(yǎng)物的菌齡以1624h
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