【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 液復(fù)染1min，水洗。(6)用吸水紙吸掉水滴，待標(biāo)本片干后置顯微鏡下，用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后用油鏡觀察，注意細(xì)菌細(xì)胞的顏色。(7)鏡檢 。 ～24小時(shí)菌齡的細(xì)菌為宜。簡(jiǎn)單染色 ：金黃色葡萄球菌和枯草桿菌染成紅色。革蘭氏染色（大腸桿菌與枯草桿菌）分別染成紅色和紫色。 酵母菌大小的測(cè)定和細(xì)胞計(jì)數(shù)學(xué)會(huì)測(cè)微尺和血球計(jì)數(shù)板的使用方法，建立對(duì)微生物大小的概念。：顯微鏡、物鏡測(cè)微尺、目鏡測(cè)微尺、血球計(jì)數(shù)板、載玻片、吸管和吸水紙等。：麥芽汁培養(yǎng)基、酵母菌。 先用絕對(duì)長(zhǎng)度的物鏡測(cè)微尺來(lái)校正不表示絕對(duì)長(zhǎng)度的目鏡測(cè)微尺，計(jì)算后者每格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度，然后放上待測(cè)的標(biāo)本，用目鏡測(cè)微尺測(cè)定標(biāo)本上微生物細(xì)胞占目鏡測(cè)微尺的格數(shù)，就可計(jì)算該微生物的大小。 微生物常用的計(jì)數(shù)方法有兩種，即直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。前者利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)，能立即得到數(shù)值。后者是在乎板上長(zhǎng)成菌落后再計(jì)數(shù)，反應(yīng)較真實(shí)，但費(fèi)時(shí)太長(zhǎng)。(1)測(cè)微尺的構(gòu)造和使用方法①目鏡測(cè)微尺的構(gòu)造 目鏡測(cè)微尺是一塊圓形玻片，其中央刻有精確的刻度，用前必須用物鏡測(cè)微尺來(lái)標(biāo)定。②物鏡測(cè)微尺的構(gòu)造 物鏡測(cè)微尺為一塊特制的載玻片，其中央有一小圓圈。圓圈內(nèi)刻有分度。(2)目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定①取下接目鏡，旋下目鏡上的目透鏡，將目鏡測(cè)微尺放人接目鏡的中隔板上，使有刻度的一面朝下，再旋上目透鏡，并裝入鏡筒內(nèi)。②將物鏡測(cè)微尺置于顯微鏡的載物臺(tái)上，使有刻度的一面朝上，同觀察標(biāo)本一樣，使具有刻度的小圓圈位于視野中央。③先用低倍鏡觀察，對(duì)準(zhǔn)焦距，待看清物鏡測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺的刻度與物鏡測(cè)微尺的刻度相平行，并使兩尺的左邊第一條線相重合，再向右尋找兩尺的另外一條重合線。④記錄二條重合線間的目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和物鏡測(cè)微尺的格數(shù)。 (3)計(jì)算方式①目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度=兩個(gè)重疊刻度間物鏡測(cè)微尺格數(shù)10/兩個(gè)重疊刻度間目鏡測(cè)微尺格數(shù)②以同樣方法，分別在不同倍率的物鏡下測(cè)定測(cè)微尺上每格的實(shí)際長(zhǎng)度。目鏡測(cè)微尺( )格=物鏡測(cè)微尺( )格目鏡測(cè)微尺每格=( )③如此測(cè)定后的目鏡測(cè)微尺的尺度，僅適用于測(cè)定時(shí)所用的顯微鏡的目鏡和物鏡的放大倍數(shù)。若更換物鏡、目鏡的放大倍數(shù)時(shí)，必須再進(jìn)行校正標(biāo)定。 (4)酵母菌大小的測(cè)定①取下物鏡測(cè)微尺，換上酵母菌水浸制片。②測(cè)量菌體的長(zhǎng)度和寬度各占目鏡測(cè)微尺幾格，然后換算出菌體的實(shí)際長(zhǎng)度。③在同一標(biāo)本上測(cè)定5～10個(gè)菌體，求其平均值。 (1)血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造 血球計(jì)數(shù)板是由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四條下凹的槽，構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面?zhèn)€刻有一個(gè)方格網(wǎng)。方格網(wǎng)上刻有9個(gè)大方格，其中只有中間的一個(gè)大方格為計(jì)數(shù)室，供微生物計(jì)數(shù)用。 計(jì)數(shù)室通常有兩種規(guī)格。一種是大方格內(nèi)分為16中格，每一中格又分為25小格；另一種是大方格內(nèi)分為25中格，每一中格又分為16小格。(2)血球計(jì)數(shù)板的使用①用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)酵母菌懸液的酵母菌個(gè)數(shù)。②樣品稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計(jì)數(shù)，以每小方格內(nèi)含有4～5個(gè)酵母細(xì)胞為宜。 ③將血球計(jì)數(shù)板用擦鏡紙擦凈，在中央的計(jì)數(shù)室上加蓋專用的厚玻片。④將稀釋后的酵母菌懸液，用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣，使菌液緩緩滲入，多余的菌液用吸水紙吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球計(jì)數(shù)室內(nèi)。⑤計(jì)數(shù)時(shí)，如果使用16格25格規(guī)格的計(jì)數(shù)室，要按對(duì)角線位，取左上、右上、左下、右下4個(gè)中格（即100個(gè)小格）的酵母菌數(shù)。如果規(guī)格為25格16格的計(jì)數(shù)板，除了取其4個(gè)對(duì)角方位外，還需再數(shù)中央的一個(gè)中格(即80個(gè)小方格)的酵母菌數(shù)。 ⑥當(dāng)遇到位于大格線上的酵母菌，一般只計(jì)數(shù)大方格的上方和右方線上的酵母細(xì)胞(或只計(jì)數(shù)下方和左方線上的酵母細(xì)胞)。⑦對(duì)每個(gè)樣品計(jì)數(shù)三次，取其平均值，按下列公式計(jì)算每1ml菌液中所含的酵母菌個(gè)數(shù)。 (3)計(jì)算公式①16格25格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式： 酵母細(xì)胞數(shù)/ml=100小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/100400104稀釋倍數(shù)②25格x16格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式： 酵母細(xì)胞數(shù)/ml=80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/80400104稀釋倍數(shù)(4)血球計(jì)數(shù)板的清潔 血球汁數(shù)板使用后，用自來(lái)水沖洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，或用95％的乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑脫水使其干燥。食品中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定學(xué)習(xí)活菌的計(jì)數(shù)方法；掌握食品細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定報(bào)告方式。：電熱恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、恒溫水浴鍋、托盤天平、電爐、吸管、廣口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、試管、試管架、酒精燈、均質(zhì)器或乳缽、滅菌刀或剪刀、滅菌鑷子、75％酒精棉球、玻璃蠟筆、登記?。?5％乙醇、生理鹽水、15％氫氧化鈉溶液、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、檢驗(yàn)方法菌落總數(shù)檢驗(yàn)程序：檢樣→做成幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液→選擇2～3個(gè)適宜稀釋度各以1ml之量分別入滅菌平皿內(nèi)→每皿內(nèi)加入46℃適量營(yíng)養(yǎng)瓊脂→菌落數(shù)→報(bào)告(1)以無(wú)菌操作，將檢樣25g（或25ml）剪碎以后，放于含有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)預(yù)先置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。 (2)用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液，下同），振搖試管混合均勻，做成1：100的稀釋液。(3)另取1ml的滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1ml滅菌吸管。(4)根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇2～3個(gè)適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿。(5)稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至46℃營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基[可放置在（46177。1）℃]水浴鍋內(nèi)保溫]注入平皿15ml～20mL，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻，同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置（36177。1）℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)（48177。2）h取出，計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目乘以倍數(shù)，即得1g（1mL）樣品所含菌落總數(shù)。 (1)菌落計(jì)數(shù)方法 做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀查，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。(2)菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告①平板菌落數(shù)的選擇 選取菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)（菌落之間無(wú)明顯界線），若僅有一條鏈，可視為一個(gè)菌落數(shù)；如果有不同來(lái)源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)。 ②稀釋度的選擇 應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。若有兩個(gè)以上稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在30～300之間，則視兩者之比如何來(lái)決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；若大于2則報(bào)告其中較小的數(shù)字。③菌落數(shù)的報(bào)告 菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來(lái)表示。食品中大腸菌群的測(cè)定學(xué)習(xí)食品中大腸菌群檢測(cè)程序、方法；掌握食品中大腸菌群檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告方式。溫箱、水浴鍋、天平、顯微鏡、均質(zhì)器或乳缽、溫度計(jì)、平皿、試管、發(fā)酵管、吸管、載玻片、接種針乳糖—膽鹽發(fā)酵管、乳糖發(fā)酵管、蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑、麥康凱、伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）、遠(yuǎn)騰氏瓊脂、革蘭氏染色液(1)以無(wú)菌操作將檢樣25g（或25ml）放于含有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用無(wú)菌均質(zhì)器，以800r/min～1000r/min的速度處理1min，做成1：10的稀釋液。(2)用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖混勻，做成1：100的稀釋液，換用1支1ml滅菌吸管，按上述操作依次作10倍遞增稀釋液(3)根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)z驗(yàn)樣品污染情況估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3管。也可直接用樣