sopyz00107微生物限度檢驗方法驗證方案(編輯修改稿)
2024-11-15 09:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 JiLinGuoYuan 微生物限度檢驗方法 驗證方案 第 7/16 頁 試驗組的菌回收率＝ 稀釋劑對照組平均菌落數(shù) 100% 菌液組的平均菌落數(shù) 計數(shù)方法驗證至少應(yīng)進(jìn)行 3 次獨立平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。 結(jié)果判斷 在 3 次獨 立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率（稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率） ≥70%。若試驗組的菌回收率（試驗組的平均菌落數(shù)減去供試品對照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率） ≥70%。照該供試液制備方法和計數(shù)法測定供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)；若任一次試驗中試驗組的菌回收率低于 70%，應(yīng)采用自然沉降法、培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗證，使試驗組菌回收率大于 70%。 當(dāng)建立藥品的微 生物限度檢查時，應(yīng)進(jìn)行控制菌檢查方法的驗證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該藥品的的控制菌檢查方法測定。若藥品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變可能影響檢驗結(jié)果時，檢驗方法應(yīng)進(jìn)行重新驗證。驗證試驗也可與供試品的控制菌檢查同時進(jìn)行。 驗證用菌株 大腸埃希菌（ Esherichia coli）【 CMCC(B) 44102】、金黃色葡萄球菌（ Staphylococcus）【 CMCC(B)26003】、乙型付傷寒沙門菌（ Salmonella paratyphi B）【 CMCC(B) 50094】、銅綠假單胞菌（ Pseudomonas aeruginosa）【 CMCC (B) 10104】 驗證實驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過 5 代 （從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為0 代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。 菌液制備 大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型付傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至 10ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中， 35～ 37℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時；分別取培養(yǎng)液 1ml 加 %無菌氯化鈉溶液，采用 10 倍遞增稀釋法，稀釋至 105～ 107，制成每 1ml 含菌數(shù) 10～ 100cfu 的菌懸液。 陰性菌對 照組 設(shè)立陰性菌對照組是為了驗證該控制菌檢查方法的專屬性。方法同試驗組，驗證大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌檢查法時的陰性對照菌采用金黃色葡萄球菌；驗證銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌檢查法時的陰性對照菌采用大腸埃希菌。陰性對照菌不得檢出。 試驗組 常規(guī)法 方案編號： JiLinGuoYuan 微生物限度檢驗方法 驗證方案 第 8/16 頁 大腸埃希菌 取相當(dāng)于 1g 或 1ml 供試品的供試液至 100ml 膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，陽性菌對照加入大腸埃希菌 10～ 100cfu，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10～ 100cfu， 35～ 37℃培養(yǎng) 18～ 24 小時，取此培養(yǎng)物按《微生物限度檢查 SOP》大腸埃希菌項下規(guī)定檢查。 大腸菌群 取含適量（不少于 10ml）的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管 3 支，分別加入含供試品 1g 或 1ml 、 或 、含供試品 或 的供試液，陽性菌對照加入大腸埃希菌 10～ 100cfu，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10～ 100cfu， 35～ 37℃ 培養(yǎng) 18～ 24小時，按《微生物限度檢查 SOP》大腸菌群項下規(guī)定檢查。 沙門菌 取供試品 10g 或 10ml，直接或處理后接種至適量（不少于 200ml）的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，用勻漿儀或其他適宜方法混勻，陽性菌對照加入沙門菌 10～ 100cfu，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10～ 100cfu， 35～ 37℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時。按《微生物限度檢查SOP》沙門菌項下規(guī)定檢查。 銅綠假單胞菌 取相當(dāng)于 1g或 1ml 供試品的供試液至 100ml 膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，陽性菌對照加入銅綠假單胞菌 10～ 100cfu，陰性菌對照加入大腸埃希菌 10～ 100cfu， 35～ 37℃培養(yǎng) 18～ 24 小時。按《微生物限度檢查 SOP》沙門菌項下規(guī)定檢查。 金黃色葡萄球菌 取相當(dāng)于 1g 或 1ml 供試品 的供試液至 100ml 膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，陽性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10～ 100cfu，陰性菌對照加入大腸埃希菌 10～ 100cfu， 35～37℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時。按《微生物限度檢查 SOP》金黃色葡萄球菌項下規(guī)定檢查。 培養(yǎng)基稀釋法 供試品有抑菌作用，放大培養(yǎng)基量，由 1： 100 放大到 1： 300、 1：500 或 1： 1000，由于容器體積限制，一般放大到 500ml 或 1000ml，本法適用于抑菌作用不強的樣品。 薄膜過濾法 采用薄膜過濾法時，取規(guī)定量供試液，過濾，沖洗，試驗菌應(yīng)加在最后一次沖 洗液中，過濾后，注入培養(yǎng)基或取出濾膜接入增菌培養(yǎng)基中。 離心沉淀集菌法 取規(guī)定量供試液，如供試液含許多藥渣，先以 50
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