【正文】 藥品的組分發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)。 ，綜合整個(gè)驗(yàn)證過程，得出驗(yàn)證結(jié)論。 試驗(yàn)組 常規(guī)法 方案編號(hào)： JiLinGuoYuan 微生物限度檢驗(yàn)方法 驗(yàn)證方案 第 8/16 頁 大腸埃希菌 取相當(dāng)于 1g 或 1ml 供試品的供試液至 100ml 膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，陽性菌對(duì)照加入大腸埃希菌 10～ 100cfu，陰性菌對(duì)照加入金黃色葡萄球菌 10～ 100cfu， 35～ 37℃培養(yǎng) 18～ 24 小時(shí)，取此培養(yǎng)物按《微生物限度檢查 SOP》大腸埃希菌項(xiàng)下規(guī)定檢查。至少要一張膜。取此培養(yǎng)液 1ml 加 %無菌氯化鈉溶液 9ml，采用 10 倍遞增稀釋法，稀釋至106~107，制成每 1ml含菌數(shù) 50～ 100cfu 的菌懸液。 四、驗(yàn)證組織機(jī)構(gòu)及職責(zé)： 五、人員培訓(xùn)： 通過對(duì)人員培訓(xùn)，明確驗(yàn)證的目的和驗(yàn)證的程序，確保驗(yàn)證數(shù)據(jù)的可靠性。 工程部 負(fù)責(zé)提供生產(chǎn)工藝驗(yàn)證中相關(guān)設(shè)備、設(shè)施的驗(yàn)證文件及 SOP等支持文件，保證驗(yàn)證過程中的設(shè)備、設(shè)施等符合生產(chǎn)工藝要求，并參與驗(yàn)證、會(huì)簽驗(yàn)證文件。 具有抑菌活性的供試品供試液的制備 當(dāng)供試品具有抑菌活性時(shí)，須先消除抑菌活性，其方法如下： 培養(yǎng)基稀釋法：取供試液 2ml，每 的供試液注一皿或每 的供試液注一皿；或取供試液 1ml 每 的供試液注 一皿，傾注 15ml 的培養(yǎng)基，測(cè)定細(xì)菌、霉菌及酵母菌的菌數(shù)，混勻，凝固，培養(yǎng)。 結(jié)果判斷 在 3 次獨(dú) 立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的菌回收率（稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率） ≥70%。按《微生物限度檢查 SOP》沙門菌項(xiàng)下規(guī)定檢查。 驗(yàn)證時(shí)檢驗(yàn)條件發(fā)生改 變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)。 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證記錄及控制菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證記錄。陰性對(duì)照菌不得檢出。 薄膜過濾法：取規(guī)定量試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液，過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入 50～ 100cfu 試驗(yàn)菌，過濾，按薄膜過濾法測(cè)定其菌落數(shù)。 方案編號(hào)： JiLinGuoYuan 微生物限度檢驗(yàn)方法 驗(yàn)證方案 第 5/16 頁 驗(yàn)證菌菌液制備 大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液制備：接種大腸埃希菌、金色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至 10ml營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中， 35～ 37℃ 培養(yǎng) 18～ 24小時(shí)。 三、 驗(yàn)證范圍 ： 本方案適用于本公司各品種微生物限度檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。 QA 部 參與驗(yàn)證及驗(yàn)證方案的制定、實(shí)施、會(huì)簽驗(yàn)證文件。每 1ml 供試液所注的平皿生長的菌數(shù)之和即為 1ml 的菌落數(shù)。若試驗(yàn)組的菌回收率（試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率） ≥70%。 金黃色葡萄球菌 取相當(dāng)于 1g 或 1ml 供試品 的供試液至 100ml 膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，陽性菌對(duì)照加入金黃色葡萄球菌 10～ 100cfu，陰性菌對(duì)照加入大腸埃希菌 10～ 100cfu， 35～37℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時(shí)。 ： 驗(yàn)證小結(jié) 項(xiàng)目 標(biāo)準(zhǔn) 驗(yàn)證結(jié)果 是否符合規(guī)定 無菌檢驗(yàn) 無菌生長 結(jié)論： 項(xiàng)目負(fù)責(zé)人： 年 月 日 七、驗(yàn)證計(jì)劃執(zhí)行日期： 年 月 日至 年 月 日 八、 再 驗(yàn)證周期： 通常情況 2 年為一個(gè)驗(yàn)證周期，下列情況之一 要隨時(shí) 進(jìn)行再驗(yàn)證 ： 或更換 后 ； ； 要原輔材料供應(yīng)商發(fā)生變更后； ； 。若試驗(yàn)組檢出試方案編號(hào)： JiLinGuoYuan 微生物限度檢驗(yàn)方法 驗(yàn)證方案 第 9/16 頁 驗(yàn)菌，照該供試液制備方法和控制菌檢查法進(jìn)行該供試品控制菌的檢查；若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)采用自然沉降法、培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。方法同試驗(yàn)組，驗(yàn)證大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌檢查法時(shí)的陰性對(duì)照菌采用金黃色葡萄球菌；驗(yàn)證銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌檢查法時(shí)的陰性對(duì)照菌采用大腸埃希菌。 培養(yǎng)基稀釋法（平皿法）：取試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí) 1ml 供試液分別注入 N 個(gè)平皿中，每個(gè)平皿再注入 50～ 100cfu 試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾入培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備 2 個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定其菌落數(shù)。 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得超過 5 代 （從菌種 保存中心獲得的冷凍干燥菌種為0 代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。 二