微生物限度檢驗操作規(guī)程(20xx年版)-wenkub
2022-08-22 16:21:56 本頁面
【正文】 液制備方法經(jīng)確認均不適用，應(yīng)建立其他適宜的方法。 供試液的制備根據(jù)供試品的理化特征與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液。 開啟微生物檢測室紫外燈和空調(diào)凈化系統(tǒng)，并使其工作不低于30min。 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號筆、薄膜過濾膜等。6 內(nèi)容 需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)計數(shù)方法包括平皿法、薄膜過濾法和最可能數(shù)法（MPN法）。4 責(zé)任中心化驗室負責(zé)人：對本規(guī)程的實施負責(zé)。1 目的規(guī)范微生物限度檢驗操作，確保檢驗結(jié)果準確、可靠。中心化驗室檢驗人員：嚴格按照本規(guī)程執(zhí)行檢驗操作。檢查時，按已驗證的計數(shù)方法進行供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的測定。 試液 消毒液 A．% 新潔爾滅溶液 B．75%乙醇溶液 稀釋液、試劑及配制A．：、加純化水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，1210C滅菌15分鐘。 操作人員進入一更，用洗手液或肥皂洗手，烘干。供試液制備若需加溫時，應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過45℃。 水溶性供試試品取供試品，－蛋白胨緩沖液或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基溶解或稀釋制成1：10供試液。 水不溶性非油脂類供試品取供試品，－蛋白胨緩沖液或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基溶解或稀釋制成1：10供試液。 油脂類供試品 取供試品，加入無菌十四烷酸異丙酯使溶解，或與最少量并能使供試品乳化的無菌聚山梨酯80或其他無抑菌性的無菌表面活性劑充分混勻。以此類推，根據(jù)供試品污染程度，可稀釋至1:1000、1:10000等適宜稀釋級。除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗量為10g或10ml；膜劑為100cm2；貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗量可以酌減。如果陰性對照有菌生長，應(yīng)進行偏差調(diào)查。C左右的瓊脂傾注上述各個平皿約15ml，以順時針或反時針方向快速轉(zhuǎn)動平皿（勿使培養(yǎng)基溢出）使供試液與培養(yǎng)基混勻，放置，待凝。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數(shù)。以最高的平均菌落數(shù)，計算1g、1ml或10cm2供試品中所含的微生物，取兩位有效數(shù)字報告。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。若供試品所含的菌數(shù)較多時，可取適宜稀釋級的供試液1ml,過濾。 陰性對照 取試驗用的稀釋液1ml照上述薄膜過濾法操作，作為陰性對照。 MPN法MPN法的精密度和準確度不及薄膜過濾法和平皿法，僅在供試品需氧菌總數(shù)沒有適宜計數(shù)方法的情況下使用，本法不適用霉菌計數(shù)。如果由于供試品的原因使得結(jié)果難以判斷，可將該管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，在相同條件下培養(yǎng)1～2天，觀察是否有微生物生長。使用選擇性培養(yǎng)基時，應(yīng)進行培養(yǎng)基適用性檢查。當(dāng)本法用于檢查非無菌制劑及其原、輔料等是否符合相應(yīng)的微生物限度標準時，應(yīng)按下列規(guī)定進行檢驗、包括樣品取樣量和結(jié)果判斷等。供試品檢查時，若使用了中和劑或滅活劑，應(yīng)確認有效性及對微生對無毒性。陰性對照試驗：以稀釋劑代替供試液照相應(yīng)控制菌檢查法檢查，陰性對照試驗應(yīng)無菌生長，如陰性對照有菌生長，應(yīng)進行偏差調(diào)查。 試液指示液、革蘭染色液、碘液、95%乙醇。 選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中， 42～44℃培養(yǎng)24～48小時。以接種針輕輕接觸單個疑似菌落的表面中心，沾取培養(yǎng)物，應(yīng)挑選2～3個以上疑似菌落，分別接種營養(yǎng)瓊脂斜面，培養(yǎng)18～24小時，作以下檢查。滴加沙黃染液,復(fù)染1min,待干后,鏡檢。否則，菌細胞成堆或連成片。 脫色是關(guān)鍵，脫色時間不足，菌細胞易染成陽性，脫色時間過長易染成陰性。 試液、指示液 、。 定量試驗 選擇和分離培養(yǎng) 、（、）供試品的預(yù)培養(yǎng)物或其稀釋液分別接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，30℃～35℃培養(yǎng)24～48小時。表2 耐膽鹽革蘭陰性菌的可能菌數(shù)（N）各供試品量的檢出結(jié)果每1g（或1ml）供試品中可能的菌數(shù)cfu＋＋＋－＋＋－－＋－－－N＞103102＜N＜10310＜N＜102N＜10注：（1）+代表紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上有菌落生長；—代表紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上無菌落生長。 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號筆、薄膜過濾膜等。 選擇和分離培養(yǎng) ，
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