微生物限度檢驗(yàn)操作規(guī)程(20xx年版)-文庫吧資料
2024-08-07 16:21本頁面
【正文】 片、薄膜過濾器等。 脫色是關(guān)鍵，脫色時(shí)間不足，菌細(xì)胞易染成陽性，脫色時(shí)間過長易染成陰性。 培養(yǎng)物的菌齡以1624h為宜。否則，菌細(xì)胞成堆或連成片。革蘭陰性菌呈紅色,大腸埃希菌為革蘭陰性短桿菌,或球桿菌狀,亦有桿菌狀。滴加沙黃染液,復(fù)染1min,待干后,鏡檢。滴加結(jié)晶紫染液,染色1min,水洗,滴加碘液,媒染1min,水洗,以濾紙吸干余水。以接種針輕輕接觸單個(gè)疑似菌落的表面中心，沾取培養(yǎng)物，應(yīng)挑選2～3個(gè)以上疑似菌落，分別接種營養(yǎng)瓊脂斜面，培養(yǎng)18～24小時(shí)，作以下檢查。 結(jié)果判斷 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。 選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中， 42～44℃培養(yǎng)24～48小時(shí)。 操作方法 供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“”制成1：10供試液。 試液指示液、革蘭染色液、碘液、95%乙醇。 儀器及器皿顯微鏡、托盤天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過濾器等。陰性對照試驗(yàn)：以稀釋劑代替供試液照相應(yīng)控制菌檢查法檢查，陰性對照試驗(yàn)應(yīng)無菌生長，如陰性對照有菌生長，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。陽性對照試驗(yàn)方法同供試品的控制菌檢查，對照菌的加量應(yīng)不大于100cfu。供試品檢查時(shí)，若使用了中和劑或滅活劑，應(yīng)確認(rèn)有效性及對微生對無毒性。供試液制備及實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求同需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)應(yīng)為內(nèi)容，這個(gè)羅列成子項(xiàng)。當(dāng)本法用于檢查非無菌制劑及其原、輔料等是否符合相應(yīng)的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)按下列規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)、包括樣品取樣量和結(jié)果判斷等。若供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的檢查結(jié)果均符合該品種項(xiàng)上的規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若基中任何一項(xiàng)不符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定。使用選擇性培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。 表1 微生物最可能數(shù)檢索表生長管數(shù)需氧菌總數(shù)最可能數(shù)95﹪置信限每管含樣品的g或ml數(shù)MPN/g或ml下限上限000〈300013010310011170201703035100171011710211435110201111143512011435121155381301653820035201144352022053821015438211205382122799422021540221289942223599423029994231369943002359430138910430264161813104391813117517199312120303603131603038032093183603211503038032221030400323290909903302404099033146090198033211002004000333〉1100 結(jié)果判斷需氧菌總數(shù)是指胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數(shù)（包括真菌菌落數(shù)）；霉菌和酵母菌總數(shù)是指沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數(shù)（包括細(xì)菌菌落數(shù)）。如果由于供試品的原因使得結(jié)果難以判斷，可將該管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，在相同條件下培養(yǎng)1～2天，觀察是否有微生物生長。必要時(shí)可在培養(yǎng)基中加入表面活性劑、中和劑或滅活劑。 MPN法MPN法的精密
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