微生物限度檢驗操作規(guī)程(20xx年版)(已改無錯字)
2022-08-22 16:21:56 本頁面
【正文】 為宜。培養(yǎng)時間過長的革蘭陽性菌易染成紅色。 脫色是關鍵，脫色時間不足，菌細胞易染成陽性，脫色時間過長易染成陰性。 耐膽鹽革蘭陰性菌 設備、儀器及用具 設備微生物限度檢測室、陽性菌檢測室、生物安全柜、凈化工作臺、生化培養(yǎng)箱（30350C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、滅菌柜、紫外燈等。 儀器及器皿顯微鏡、托盤天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過濾器等。 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號筆、薄膜過濾膜等。 試液、指示液 、。 培養(yǎng)基 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、腸道菌增菌液體培養(yǎng)基、 操作方法 供試液制備和預培養(yǎng) 取供試品，用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基作為稀釋劑照“”制成1：10供試液，混勻，在20～25℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時間應使供試品中的細菌充分恢復但不增殖（約2小時）。 定性試驗 除另有規(guī)定外，取相當于1g或1ml供試品的上述預培養(yǎng)物接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，30℃～35℃培養(yǎng)24～48小時后，劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30℃～35℃培養(yǎng)18～24小時。如果平板上無菌落生長，判供試品未檢出耐膽鹽革蘭陰性菌。 定量試驗 選擇和分離培養(yǎng) 、（、）供試品的預培養(yǎng)物或其稀釋液分別接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，30℃～35℃培養(yǎng)24～48小時。和述每一培養(yǎng)物分別劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)平板上，30℃～35℃培養(yǎng)18～24小時。 結果判斷 若紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，則對應培養(yǎng)管為陽性，否則為陰性。根據(jù)各培養(yǎng)管檢查結果，從表2查1g或1ml供試品中含有耐膽鹽革蘭陰性菌的可能菌數(shù)。表2 耐膽鹽革蘭陰性菌的可能菌數(shù)（N）各供試品量的檢出結果每1g（或1ml）供試品中可能的菌數(shù)cfu＋＋＋－＋＋－－＋－－－N＞103102＜N＜10310＜N＜102N＜10注：（1）+代表紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上有菌落生長；—代表紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上無菌落生長。 （2）若供試品量減少10倍（，），則每1g（或1ml）供試品中可能的菌數(shù)（N）應相應增加10倍。 沙門菌 設備、儀器及用具 設備微生物限度檢測室、陽性菌檢測室、生物安全柜、凈化工作臺、生化培養(yǎng)箱（30350C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、滅菌柜、紫外燈等。 儀器及器皿顯微鏡、托盤天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過濾器等。 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號筆、薄膜過濾膜等。 試液、指示液 、。 培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、RV沙門菌增菌液體培養(yǎng)基、木糖賴氨酸脫氧酸鹽瓊脂培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基等。 操作方法 供試液制備和增菌培養(yǎng) 取10g或10ml供試品直接或處理后接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)18～24小時。 選擇和分離培養(yǎng) ， 30～35℃培養(yǎng)24～48小時。取少量RV沙門增菌液體培養(yǎng)物劃線接種于木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～48小時。沙門菌在木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上生長良好，菌落為淡紅色或無色、透明或半透明、中心有或無黑色。用接種針挑選疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基高層斜面上進行斜面和高層穿刺接種，培養(yǎng)18～48小時，或采用基他適宜方法進一步鑒定。 結果判斷 若木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上有疑似菌落生長，且三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基的斜面為紅色、底層為黃色，或斜面黃色、底層黃色或黑色，應進一步進行適宜的鑒定試驗，確證是否為沙門菌。如果平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結果為陰性，或三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基的斜面未見紅色、底層未見黃色；或斜面黃色、底層未見黃色或黑色，判供試品未檢出沙門菌。 銅綠假單胞菌 設備、儀器及用具 設備微生物限度檢測室、陽性菌檢測室、生物安全柜、凈化工作臺、生化培養(yǎng)箱（30350C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、滅菌柜、紫外燈等。 儀器及器皿顯微鏡、托盤天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片
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