05版藥典微生物限度檢查法操作要點(diǎn)(已修改)
2025-04-16 23:00 本頁面
【正文】 05版藥典微生物限度檢查法操作要點(diǎn)林麗英05版藥典微生物限度檢查法與以往藥典的最大不同就是多了方法驗(yàn)證。由于以前版本的藥典沒有要求對檢驗(yàn)方法進(jìn)行必要的驗(yàn)證，所以大家都覺得不好理解、不好難操作。為了更好執(zhí)行05版藥典，現(xiàn)根據(jù)我的理解，對藥典上的各種檢驗(yàn)方法在驗(yàn)證時(shí)的操作要點(diǎn)與大家作個(gè)探討。一、驗(yàn)證的目的由于制劑在投料和加工過程中，或有抑菌成份存在，或由于各種成份相互作用的結(jié)果，將可能對某些類型的微生物的檢出產(chǎn)生影響。對所建立的微生物限度檢查法進(jìn)行驗(yàn)證的目的，就是要對每個(gè)樣品使用適宜的檢驗(yàn)方法，順利的檢出樣品中污染的各種類型的菌。細(xì)菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證所用的菌株：大腸埃希菌[CMCC（B）44102]：代表革蘭陰性菌；金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]：代表革蘭陽性球菌； 枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]：代表革蘭陽性桿菌；霉菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證所用的菌株：白色念珠菌[CMCC（F）98001]：代表酵母菌；黑曲霉[CMCC（F）98003：代表霉菌；由于每個(gè)菌株代表不同類型的菌，所以只有這五個(gè)菌株的回收率均達(dá)到要求，才表明樣品中污染的各種類型的菌都可能檢出來，否則，所得的結(jié)果是不能真實(shí)地反映樣品的污染情況的。菌液的制備：接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24小時(shí)；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24～48小時(shí)。％無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為50～l00cfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5~7天，加入3~5ml ％無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，吸出胞子懸液(用管口帶有薄的無菌棉花或紗布能過濾菌絲的無菌毛細(xì)吸管)至無菌試管內(nèi)，％無菌氯化鈉溶液制成每lml含孢子數(shù)50～l00cfu的孢子懸液。二、方法的驗(yàn)證所有驗(yàn)證方法的操作均應(yīng)在陽性接種間。（一）、細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)法的驗(yàn)證驗(yàn)證方法 取試驗(yàn)可能用的最低稀釋級供試液進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌株每次試驗(yàn)的回收率。 1．常規(guī)法就是取1:10的供試液1ml和50~100個(gè)試驗(yàn)菌株加入到1個(gè)平皿中，立即傾注相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，培養(yǎng)，計(jì)算各菌株的回收率。常規(guī)法做一個(gè)樣品的細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證試驗(yàn)，需要多少個(gè)平皿呢？試驗(yàn)組：52=10個(gè)，即每個(gè)菌株做2ml共需10個(gè)；菌液組：52=10個(gè)，即每個(gè)菌株的加菌量，每株2個(gè)皿。 共24個(gè)本底菌組：2個(gè)細(xì)菌計(jì)數(shù)，2個(gè)霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)。細(xì)菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證所用的平皿共14個(gè)，其中6個(gè)用于試驗(yàn)組計(jì)數(shù)，6個(gè)用于菌液組計(jì)數(shù)，2個(gè)用于細(xì)菌本底菌計(jì)數(shù)，傾倒?fàn)I養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)所用的平皿共10個(gè)，其中4個(gè)用于試驗(yàn)組計(jì)數(shù)，4個(gè)用于菌液組計(jì)數(shù)，2個(gè)用于霉菌本底菌計(jì)數(shù)，傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（虎紅瓊脂培養(yǎng)基）?；厥章?[(試驗(yàn)組菌數(shù)本底菌組菌數(shù))/菌液組菌數(shù)]當(dāng)大腸埃
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