【正文】 試驗(yàn) UV檢測(cè) 靛基質(zhì)試驗(yàn) 感冒清膠囊 121230 + + — + + + + — — 131202 + + — + + + + — — 141127 + + — + + + + — — (表中‘‘ +，’表示在培養(yǎng)基中呈附性反應(yīng)或在試劑中呈正反應(yīng)；“ ’’表示不呈陽(yáng)性反應(yīng)或在試劑中不呈正反應(yīng)；‘‘士’’表示在未能通過(guò)觀察判斷結(jié)果 ) 表 2— 2 表明，各控制菌陽(yáng)性對(duì)照均能生長(zhǎng)，陰性對(duì)照 無(wú)菌生長(zhǎng) ， 試驗(yàn)組均能生長(zhǎng)，可用常規(guī)法檢查大腸 埃希菌。在相應(yīng)的溫度下培養(yǎng) (細(xì)菌在 30～ 35℃培養(yǎng)48 小時(shí)，霉菌在 23～ 28℃培養(yǎng) 72小時(shí) )，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，取均值。該法操作簡(jiǎn)單，是藥品檢驗(yàn)的常用方法之一?？莶菅挎邨U菌通常作為芽孢菌的代表 . 黑曲霉 (Aspergillus niger， [CMCC(F)98 003] 黑曲霉屬半知菌亞門(mén)真菌。 在菌落計(jì)數(shù)方法學(xué)驗(yàn)證中，選取大腸埃希菌 (Escherichiacoli)[CMCC(B)441 02]、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003]、枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501]、白色念珠菌 (Candida albicans， [CMCC(F)98001]、黑曲霉 (Aspergillus niger， [CMCC(F)98 003]五種菌作 為驗(yàn)證菌株。 針對(duì)本論文藥品采用常規(guī)法，現(xiàn)對(duì)常規(guī)法介紹如下： 常規(guī)法是微生物限度檢查中最重要也是最基本的方法。它是用一定培養(yǎng)基在規(guī)定條件下培養(yǎng)后在固體平 板上呈現(xiàn)可見(jiàn)菌落，按規(guī)定方法計(jì)數(shù)報(bào)告的方法。這是由于藥品本身可能含有抑菌作用的組成及防腐劑等組分，一般認(rèn)為，這些組分在一定濃度下對(duì)微生物具有抑制或殺滅的作用，被抑制的微生物將因受到不同程度的損傷而可能影響檢查的準(zhǔn)確性[14]。所以，培養(yǎng)時(shí)應(yīng)注意嚴(yán)格控制環(huán)境中的含氧量。 [12]目前，因?yàn)槠湮廴舅幤芬鹚幵葱约膊『歪t(yī)療事故的例子時(shí)有發(fā)生，所以加強(qiáng)對(duì)該菌的控制是必要的。廣泛分布于自然界，也存在于人和動(dòng)物皮膚及與外相通的腔道中。它不僅包括埃希菌屬中的某些細(xì)菌，還包括腸桿菌屬、枸櫞酸菌屬及克雷伯菌屬中的某些細(xì)菌 [11]。我國(guó)藥典采用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行各種制劑的霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)測(cè)定，當(dāng)制劑中含有蜂蜜和王漿時(shí)，需采用酵母浸出粉胨葡萄糖 (YPD)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行酵母菌計(jì)數(shù)測(cè)定。 細(xì)菌數(shù)測(cè)定 藥品細(xì)菌數(shù)測(cè)定是微生物的定量檢查，是用來(lái)判斷藥品被細(xì)菌污染程度和衛(wèi)生質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)，也是檢測(cè)中藥藥品質(zhì)量的指標(biāo)之一。 1986 年衛(wèi)生部頒發(fā)了經(jīng)修改的《藥品衛(wèi)牛標(biāo)準(zhǔn)》， 1989 年又下達(dá)了《藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)補(bǔ)充規(guī)定和說(shuō)明》。微生物檢驗(yàn)分為強(qiáng)制性的無(wú)菌檢查 (要求不能檢出 )和非強(qiáng)制性的限度標(biāo)準(zhǔn)檢查 (允許有一定數(shù)量的菌，微生物限度 )。這方面還有更多的例證，例如由于滴眼劑污染銅綠假單胞菌，導(dǎo)致病人發(fā)生角膜潰瘍的事例、因使用污染破傷風(fēng)梭菌的婦科用藥引發(fā)破傷風(fēng)癥而死亡的事例、 2020 年導(dǎo)致 11人死亡的“欣氟”事件、 2020 年導(dǎo)致云南省 6 名患者出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)，其中死亡 3 例的“刺五加注射液”事件等等，都是由于微生物污染藥品引起的。 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 1 1 第一章 前 言 藥品是一種關(guān)乎人類身體健康的特殊商品，一生中從不使用藥 品的人是鳳毛麟角的。普羅大眾從生命孕育到牛命終結(jié)，都少不了和藥品打交道，而且?guī)缀醵际怯糜谥尾∩踔潦蔷让摹Ａ硗?，藥品染菌還可引起產(chǎn)品的霉變、酸敗等理化性質(zhì)的改變，從而造成藥品失效、變質(zhì)，甚至產(chǎn)生毒素，嚴(yán)重危害藥品使用者的健康 [1]。實(shí)踐中，在中成藥的使用上要求無(wú)菌的相對(duì)較少 (即必須進(jìn)行無(wú)菌檢查的制劑所占比例不大 )，大部分中成藥需要進(jìn)行的是微生物限度檢查 。這兩個(gè)文件載有與國(guó)際上基本一致的微生物限度檢查法和 20個(gè)化學(xué)藥品種的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，并收載于《中國(guó)藥典》 1990 年版 [4]第二增補(bǔ)本。細(xì)菌計(jì)數(shù)是指在 一定條件下 (如需氧情況、營(yíng)養(yǎng)條件、 pH值、培養(yǎng)溫度和時(shí)間等 )每 lg、 lml、 10cm2 供試品液經(jīng)培養(yǎng)后所生長(zhǎng)的菌落數(shù)。 控制菌的檢查 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 4 4 測(cè)定單位重量 (g)、單位容積 (m1)和單位面積 (cm2)藥品中糞便污染的指示菌，如：大腸埃希菌、大腸菌群、沙門(mén)氏菌，以及某些特定菌 (包括：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、梭菌、活螨等 )， 在樣品中不得檢出或不超過(guò)某限度。中國(guó)藥典規(guī)定口服制劑中含藥材原粉的以及含豆豉、神曲等發(fā)酵成分的都需檢查大腸菌群。葡萄球菌大部分是不致病的，但是人群中陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 5 5 有 20％ 39。與金黃色葡萄球菌相似，中國(guó)藥典規(guī)定局部給藥制劑都需控制該菌。中國(guó)藥典對(duì)用于陰道和尿道的制劑進(jìn)行梭菌檢查時(shí)，采用生孢梭菌作為陽(yáng)性對(duì)照菌。但在適合的 pH、營(yíng)養(yǎng)充足等合適的條件下，微生物可能復(fù)蘇，從而危害人體健康。其原理主要為：將待測(cè)供試品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微牛物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液至平皿中，再加入一定量的培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原供試品中的一個(gè)單細(xì)胞。它主要的特征是將制各好的供試品溶液 lml加入培養(yǎng)皿后，直接加入相應(yīng)培養(yǎng)基進(jìn)行培 養(yǎng)。其中金黃色葡萄球菌代表革蘭氏陽(yáng)性菌，大腸埃希菌代表革蘭氏陰性菌，枯草芽孢桿菌代表芽孢菌，白色念珠菌代表酵母菌，黑曲霉代表霉菌。 菌落初白色，后變黑。常規(guī)法適用于不含抑菌成分的藥材及制劑。 5個(gè)菌株分別操作分別計(jì)數(shù)。另外，在感冒清膠囊的大腸菌群檢查中，陽(yáng)性對(duì)照管生長(zhǎng)良好，陰性無(wú)干擾 ，試驗(yàn)組均能生長(zhǎng)。其中菌絲可吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，孢子為其主要繁殖器官。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道。在試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，在具有抑菌作用的中成藥中，多數(shù)制劑對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌和枯草陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 14 14 芽孢桿菌敏感，尤其是枯草芽孢桿菌。沒(méi)有足夠的耐力和信心就很難堅(jiān)持對(duì)畢業(yè)設(shè)計(jì)每一步的順利進(jìn)行。在 畢業(yè)設(shè)計(jì)過(guò)程中， 余 老師無(wú)論是在理論上還是在實(shí)踐中，都給了我很大的幫助。 細(xì)菌計(jì)數(shù)回收率試驗(yàn)大腸埃希菌的驗(yàn)證結(jié)果可為控制菌大腸埃希菌的檢查提供參考。三萜及其皂苷具有抗真菌活性。在制備驗(yàn)證用黑曲霉菌懸液前，首先需要從固體培養(yǎng)基上將菌苔洗下，制成儲(chǔ)備液，然后再稀釋。