【正文】 對于口服制劑來說，大多數(shù)中成藥的抑菌作用是有限的，一般可采用常規(guī)平皿法或培養(yǎng)基稀釋法： 為節(jié)約成本，創(chuàng)造良好的經(jīng)濟效益，可用簡單的常規(guī)法或培養(yǎng)基稀釋法進行檢查的供試品，就不需要用到消耗量較大的薄膜過濾法。 建議 ： 了解藥品的處方組成是微生物限度檢查的前提。 陽性對照 取大腸埃希菌菌懸液 lml，加入相應規(guī)定量的增菌培養(yǎng)基 (檢查大腸埃希菌用膽鹽乳糖培養(yǎng)基，大腸菌群用膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基中 )，按藥典方法檢查。本菌細胞呈卵圓形，很象酵母菌， 比葡萄球菌大 5～ 6倍，革蘭氏染色陽性，但著色不均勻。其中，菌落計數(shù)和控制菌檢查屬于微生物限度檢查的內容。該方法測定結果只反映在規(guī)定的條件下所生長的細菌 (嗜中溫、需氧和兼性厭氧 )、霉菌和酵母菌的菌落數(shù)，不包括對營養(yǎng)、氧氣、溫度、 pH 值和其他因素有特殊要求的細菌、霉菌和酵母菌。其芽孢體可耐高溫及干燥，有些菌的芽孢體 可在土壤中存活數(shù)十年。因此，藥典規(guī)定，含動物組織 (包括提取物 )及動物類原材料 (蜂蜜、王漿、動物角及阿膠除外 )的口服制劑每 10g 或 10ml 不得檢出沙門氏菌。受到真菌污染的藥品不僅可能導致變質，還可能因其產(chǎn)生的代謝物以及各種真 菌毒素，使服用該藥品的患者產(chǎn)生急性或慢性的中毒病癥，有的真菌毒素甚至可導致或誘發(fā)癌癥 [8]。上世紀 70 年代中后期，國內先后在武漢、宜昌等地因使用中藥散劑治療宮頸糜爛發(fā)生了多起 事故，經(jīng)查證為藥物污染破傷風梭菌所致。事實上，由于藥品染菌引起使用者感染以至造成嚴重后果的事件屢有報道。在藥品質量控制的范疇里，除了確保其有效性以外，安全性的控制更應具有特殊意義。微生物限度標準也已頒布實施了三十年。藥品細菌數(shù)測定是活菌計數(shù)，最常用也是我國藥典收載的使用的方法是平板法。我國藥典采用 MPN(Most Probable Number)測定法檢查大腸菌群。 梭菌 梭菌屬是在自然界分布廣泛的一類微生物，主要存在于土壤、海水和淡水的沉積物中。不同特性的供試品溶液，應采取不同的制備方法。所以，藥品中微生物檢驗時，只有在各檢測條件均適宜，即在該檢驗條件下的樣品濃度不足以抑陜西科技大學畢業(yè)論文 7 7 制污染微生物的生長，使供試品中污染的微生物狀況得以真實的反映，從而才能保證檢驗結果的科學性和準確性。生長適溫 37℃，最低相對濕度為 88％，能引致水分較高的糧食霉變。 回收率 (％ )=[(試驗組菌數(shù)．供試品對照組菌數(shù) )／菌液組菌數(shù) ] 100％ [大于 70％ ]結果果見表 21 表 2— 1 細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)回收率 (％ ) 品名 批號 金黃色葡萄球菌 大腸埃希氏菌 枯草芽孢桿菌 白色念珠菌 黑曲霉 感冒清膠囊 121230 131202 陜西科技大學畢業(yè)論文 11 11 141127 控制菌檢查的方法驗證 本次驗證的均為口服制劑，需進行大腸埃希菌的檢查。在制備驗證用黑曲霉菌懸液前，首先需要從固體培養(yǎng)基上將菌苔洗下，制成儲備液，然后再稀釋。 細菌計數(shù)回收率試驗大腸埃希菌的驗證結果可為控制菌大腸埃希菌的檢查提供參考。沒有足夠的耐力和信心就很難堅持對畢業(yè)設計每一步的順利進行。據(jù)文獻報道。另外，在感冒清膠囊的大腸菌群檢查中，陽性對照管生長良好，陰性無干擾 ，試驗組均能生長。常規(guī)法適用于不含抑菌成分的藥材及制劑。其中金黃色葡萄球菌代表革蘭氏陽性菌，大腸埃希菌代表革蘭氏陰性菌，枯草芽孢桿菌代表芽孢菌，白色念珠菌代表酵母菌，黑曲霉代表霉菌。其原理主要為：將待測供試品經(jīng)適當稀釋之后，其中的微牛物充分分散成單個細胞，取一定量的稀釋樣液至平皿中，再加入一定量的培養(yǎng)基，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原供試品中的一個單細胞。中國藥典對用于陰道和尿道的制劑進行梭菌檢查時，采用生孢梭菌作為陽性對照菌。葡萄球菌大部分是不致病的，但是人群中陜西科技大學畢業(yè)論文 5 5 有 20％ 39。 控制菌的檢查 陜西科技大學畢業(yè)論文 4 4 測定單位重量 (g)、單位容積 (m1)和單位面積 (cm2)藥品中糞便污染的指示菌，如：大腸埃希菌、大腸菌群、沙門氏菌，以及某些特定菌 (包括：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、梭菌、活螨等 )， 在樣品中不得檢出或不超過某限度。這兩個文件載有與國際上基本一致的微生物限度檢查法和 20個化學藥品種的微生物限度標準，并收載于《中國藥典》 1990 年版 [4]第二增補本。另外，藥品染菌還可引起產(chǎn)品的霉變、酸敗等理化性質的改變，從而造成藥品失效、變質，甚至產(chǎn)生毒素，嚴重危害藥品使用者的健康 [1]。 陜西科技大學畢業(yè)論文 1 1 第一章 前 言 藥品是一種關乎人類身體健康的特殊商品，一生中從不使用藥 品的人是鳳毛麟角的。微生物檢驗分為強制性的無菌檢查 (要求不能檢出 )和非強制性的限度標準檢查 (允許有一定數(shù)量的菌，微生物限度 )。 細菌數(shù)測定 藥品細菌數(shù)測定是微生物的定量檢查，是用來判斷藥品被細菌污染程度和衛(wèi)生質量評價的指標，也是檢測中藥藥品質量的指標之一。它不僅包括埃希菌屬中的某些細菌，還包括腸桿菌屬、枸櫞酸菌屬及克雷伯菌屬中的某些細菌 [11]。 [12]目前，因為其污染藥品引起藥源性疾病和醫(yī)療事故的例子時有發(fā)生，所以加強對該菌的控制是必要的。這是由于藥品本身可能含有抑菌作用的組成及防腐劑等組分，一般認為，這些組分在一定濃度下對微生物具有抑制或殺滅的作用，被抑制的微生物將因受到不同程度的損傷而可能影響檢查的準確性[14]。 針對本論文藥品采用常規(guī)法，現(xiàn)對常規(guī)法介紹如下： 常規(guī)法是微生物限度檢查中最重要也是最基本的方法?？莶菅挎邨U菌通常作為芽孢菌的代表 . 黑曲霉 (Aspergillus niger， [CMCC(F)98 003] 黑曲霉屬半知菌亞門真菌。在相應的溫度下培養(yǎng) (細菌在 30～ 35℃培養(yǎng)48 小時，霉菌在 23～ 28℃培養(yǎng) 72小時 )，點計菌落數(shù)，取均值。由菌絲和孢子組成，許多菌絲交織在一起成為菌絲體。 預試驗時，可先驗證金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的回收率。使我在查閱資料、克服困難、編排創(chuàng)興上都有了很大的提高。 Manik 等人 [17]研究了 49 種五環(huán)三萜類化合物的抗真菌活性，研究表明 C． 27或 28位有游離羧酸的齊敦果酸和長春藤皂苷元的皂苷具有較強的抗真菌活