【正文】 對(duì)于口服制劑來(lái)說(shuō)，大多數(shù)中成藥的抑菌作用是有限的，一般可采用常規(guī)平皿法或培養(yǎng)基稀釋法： 為節(jié)約成本，創(chuàng)造良好的經(jīng)濟(jì)效益，可用簡(jiǎn)單的常規(guī)法或培養(yǎng)基稀釋法進(jìn)行檢查的供試品，就不需要用到消耗量較大的薄膜過(guò)濾法。 建議 ： 了解藥品的處方組成是微生物限度檢查的前提。 陽(yáng)性對(duì)照 取大腸埃希菌菌懸液 lml，加入相應(yīng)規(guī)定量的增菌培養(yǎng)基 (檢查大腸埃希菌用膽鹽乳糖培養(yǎng)基，大腸菌群用膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基中 )，按藥典方法檢查。本菌細(xì)胞呈卵圓形，很象酵母菌， 比葡萄球菌大 5～ 6倍，革蘭氏染色陽(yáng)性，但著色不均勻。其中，菌落計(jì)數(shù)和控制菌檢查屬于微生物限度檢查的內(nèi)容。該方法測(cè)定結(jié)果只反映在規(guī)定的條件下所生長(zhǎng)的細(xì)菌 (嗜中溫、需氧和兼性厭氧 )、霉菌和酵母菌的菌落數(shù)，不包括對(duì)營(yíng)養(yǎng)、氧氣、溫度、 pH 值和其他因素有特殊要求的細(xì)菌、霉菌和酵母菌。其芽孢體可耐高溫及干燥，有些菌的芽孢體 可在土壤中存活數(shù)十年。因此，藥典規(guī)定，含動(dòng)物組織 (包括提取物 )及動(dòng)物類原材料 (蜂蜜、王漿、動(dòng)物角及阿膠除外 )的口服制劑每 10g 或 10ml 不得檢出沙門氏菌。受到真菌污染的藥品不僅可能導(dǎo)致變質(zhì)，還可能因其產(chǎn)生的代謝物以及各種真 菌毒素，使服用該藥品的患者產(chǎn)生急性或慢性的中毒病癥，有的真菌毒素甚至可導(dǎo)致或誘發(fā)癌癥 [8]。上世紀(jì) 70 年代中后期，國(guó)內(nèi)先后在武漢、宜昌等地因使用中藥散劑治療宮頸糜爛發(fā)生了多起 事故，經(jīng)查證為藥物污染破傷風(fēng)梭菌所致。事實(shí)上，由于藥品染菌引起使用者感染以至造成嚴(yán)重后果的事件屢有報(bào)道。在藥品質(zhì)量控制的范疇里，除了確保其有效性以外，安全性的控制更應(yīng)具有特殊意義。微生物限度標(biāo)準(zhǔn)也已頒布實(shí)施了三十年。藥品細(xì)菌數(shù)測(cè)定是活菌計(jì)數(shù)，最常用也是我國(guó)藥典收載的使用的方法是平板法。我國(guó)藥典采用 MPN(Most Probable Number)測(cè)定法檢查大腸菌群。 梭菌 梭菌屬是在自然界分布廣泛的一類微生物，主要存在于土壤、海水和淡水的沉積物中。不同特性的供試品溶液，應(yīng)采取不同的制備方法。所以，藥品中微生物檢驗(yàn)時(shí)，只有在各檢測(cè)條件均適宜，即在該檢驗(yàn)條件下的樣品濃度不足以抑陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 7 7 制污染微生物的生長(zhǎng)，使供試品中污染的微生物狀況得以真實(shí)的反映，從而才能保證檢驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。生長(zhǎng)適溫 37℃，最低相對(duì)濕度為 88％，能引致水分較高的糧食霉變。 回收率 (％ )=[(試驗(yàn)組菌數(shù)．供試品對(duì)照組菌數(shù) )／菌液組菌數(shù) ] 100％ [大于 70％ ]結(jié)果果見(jiàn)表 21 表 2— 1 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)回收率 (％ ) 品名 批號(hào) 金黃色葡萄球菌 大腸埃希氏菌 枯草芽孢桿菌 白色念珠菌 黑曲霉 感冒清膠囊 121230 131202 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 11 11 141127 控制菌檢查的方法驗(yàn)證 本次驗(yàn)證的均為口服制劑，需進(jìn)行大腸埃希菌的檢查。在制備驗(yàn)證用黑曲霉菌懸液前，首先需要從固體培養(yǎng)基上將菌苔洗下，制成儲(chǔ)備液，然后再稀釋。 細(xì)菌計(jì)數(shù)回收率試驗(yàn)大腸埃希菌的驗(yàn)證結(jié)果可為控制菌大腸埃希菌的檢查提供參考。沒(méi)有足夠的耐力和信心就很難堅(jiān)持對(duì)畢業(yè)設(shè)計(jì)每一步的順利進(jìn)行。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道。另外，在感冒清膠囊的大腸菌群檢查中，陽(yáng)性對(duì)照管生長(zhǎng)良好，陰性無(wú)干擾 ，試驗(yàn)組均能生長(zhǎng)。常規(guī)法適用于不含抑菌成分的藥材及制劑。其中金黃色葡萄球菌代表革蘭氏陽(yáng)性菌，大腸埃希菌代表革蘭氏陰性菌，枯草芽孢桿菌代表芽孢菌，白色念珠菌代表酵母菌，黑曲霉代表霉菌。其原理主要為：將待測(cè)供試品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微牛物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液至平皿中，再加入一定量的培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原供試品中的一個(gè)單細(xì)胞。中國(guó)藥典對(duì)用于陰道和尿道的制劑進(jìn)行梭菌檢查時(shí)，采用生孢梭菌作為陽(yáng)性對(duì)照菌。葡萄球菌大部分是不致病的，但是人群中陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 5 5 有 20％ 39。 控制菌的檢查 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 4 4 測(cè)定單位重量 (g)、單位容積 (m1)和單位面積 (cm2)藥品中糞便污染的指示菌，如：大腸埃希菌、大腸菌群、沙門氏菌，以及某些特定菌 (包括：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、梭菌、活螨等 )， 在樣品中不得檢出或不超過(guò)某限度。這兩個(gè)文件載有與國(guó)際上基本一致的微生物限度檢查法和 20個(gè)化學(xué)藥品種的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，并收載于《中國(guó)藥典》 1990 年版 [4]第二增補(bǔ)本。另外，藥品染菌還可引起產(chǎn)品的霉變、酸敗等理化性質(zhì)的改變，從而造成藥品失效、變質(zhì)，甚至產(chǎn)生毒素，嚴(yán)重危害藥品使用者的健康 [1]。 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 1 1 第一章 前 言 藥品是一種關(guān)乎人類身體健康的特殊商品，一生中從不使用藥 品的人是鳳毛麟角的。微生物檢驗(yàn)分為強(qiáng)制性的無(wú)菌檢查 (要求不能檢出 )和非強(qiáng)制性的限度標(biāo)準(zhǔn)檢查 (允許有一定數(shù)量的菌，微生物限度 )。 細(xì)菌數(shù)測(cè)定 藥品細(xì)菌數(shù)測(cè)定是微生物的定量檢查，是用來(lái)判斷藥品被細(xì)菌污染程度和衛(wèi)生質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)，也是檢測(cè)中藥藥品質(zhì)量的指標(biāo)之一。它不僅包括埃希菌屬中的某些細(xì)菌，還包括腸桿菌屬、枸櫞酸菌屬及克雷伯菌屬中的某些細(xì)菌 [11]。 [12]目前，因?yàn)槠湮廴舅幤芬鹚幵葱约膊『歪t(yī)療事故的例子時(shí)有發(fā)生，所以加強(qiáng)對(duì)該菌的控制是必要的。這是由于藥品本身可能含有抑菌作用的組成及防腐劑等組分，一般認(rèn)為，這些組分在一定濃度下對(duì)微生物具有抑制或殺滅的作用，被抑制的微生物將因受到不同程度的損傷而可能影響檢查的準(zhǔn)確性[14]。 針對(duì)本論文藥品采用常規(guī)法，現(xiàn)對(duì)常規(guī)法介紹如下： 常規(guī)法是微生物限度檢查中最重要也是最基本的方法。枯草芽孢桿菌通常作為芽孢菌的代表 . 黑曲霉 (Aspergillus niger， [CMCC(F)98 003] 黑曲霉屬半知菌亞門真菌。在相應(yīng)的溫度下培養(yǎng) (細(xì)菌在 30～ 35℃培養(yǎng)48 小時(shí)，霉菌在 23～ 28℃培養(yǎng) 72小時(shí) )，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，取均值。由菌絲和孢子組成，許多菌絲交織在一起成為菌絲體。 預(yù)試驗(yàn)時(shí)，可先驗(yàn)證金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的回收率。使我在查閱資料、克服困難、編排創(chuàng)興上都有了很大的提高。 Manik 等人 [17]研究了 49 種五環(huán)三萜類化合物的抗真菌活性，研究表明 C． 27或 28位有游離羧酸的齊敦果酸和長(zhǎng)春藤皂苷元的皂苷具有較強(qiáng)的抗真菌活